饲用维生素K3应用现状及其合成方法

维生素Ｋ的合成方法有很多种，本文就国内外公开的合成方法和发展趋势进行深层次的探讨，以期对该领域的发展有一定的指导作用。     

维生素K3的合成

利用2-甲基-1,4萘醌和亚硫酸氢钠为原料,合成维生素K3,探讨原料物质的摩尔比、温度、时间对反应的影响。实验结果表明,最佳工艺条件为:2-甲基-1,4-萘醌与亚硫酸氢钠的物质的摩尔比为1∶2;反应温度为50℃;反应时间为1h。     

饲料添加剂维生素K3的测定--高效液相色谱法

饲料在加工、贮存、运输过程中不可避免地接触光、热、空气、水、酸、碱、微量元素等外界因素,在这些因素的作用下,VK3可不断分解或产生同分异构体。尤其在高温、高热、高水分等恶劣环境中,VK3最终可产生70%左右不被动物利用的同分异构体。国家标准GB7294-1987中VK3(亚硫酸氢钠     

饲用维生素K3中甲基萘醌含量分析探究

VK3的分析一直因扰着饲料领域,由于分析方法的不同,在实际应用中产生很多不便和争议,本文系作者在工作实践中的一些实际体会,提供给大家供参考。     

维生素K

在饲喂鱼提取物或肉粉的鸡提内发现了抗出血因子。抗出血因子是一种苯醌类化合物,其化学结构普遍存在于多种化合物内。维生素K一词是2-甲基-1-4-萘并-苯醌(2-甲基萘醌,维生素K3)衍生物,这种化合物所有的衍生物都表现抗出血活性。叶绿醌(维生素K1)存在于绿叶植物中,其化学性质不太稳定;     

维生素K的生理功能及合理使用

畜禽饲料中除糖、脂肪、蛋白质和矿物质以外,还必须有极少量的营养辅助因素—维生素。维生素是维持生物体正常生命活动所必需的、需要量又很少的一类小分子有机化合物,其主要功能是促进和调节生物体的新陈代谢。在饲料中含有适当的维生素是十分重要的,因为除了少数几种维生素外,动物并不能从其他营养物合成维生素。缺乏维生素,将引起动物生长障碍,并常常由食欲不振而使病情加剧,各种营养缺乏症均与缺乏某种维生素有关。本文着重介绍脂溶性维生素中维生素 K 的生理学功能和合理使用。     

饲用维生素K3应注意的事项

一、产品物化性对于维生素Ｋ的真正含义国内外学者尚无统一的认识 ,但主流的看法是只要包含有甲基萘醌基础基团就称作维生素Ｋ ,而根据侧链基团的不同分别称作维生素Ｋ1维生素Ｋ2 维生素Ｋ3维生素Ｋ4 ,这些产品应用性能基本一致 ,都起到凝血止血的作用 ,但饲用产品一般是维生素     

气相色谱法测定饲料添加剂中维生素K3和E的含量

复合多维添加剂或预混饲料含有较多维生素E和维生素K3,其中由于维生素E易被氧化,主要以其醋酸酯形式存在。对维生素E醋酸酯含量测定,通常采用高效液相法,或是比色法、荧光法等．样品均需经皂化、提取、洗涤、浓缩等前处理,操作繁琐．时间长,在生产过程中不能及时监测产品的质量,使生产与检测脱节。我们参考有关文献（林海丹等,1996;王玉杰等,2004）,采用不经皂化而直接提取维生素E醋酸酯,同时测定维生素K3的气相色谱法。     

饲用维生素K3应用注意事项

1产品物化性质维生素K的真正含义国内外学者尚无统一的认识，但主流的看法是只要包含有甲基萘醌基础结构就称作维生素K，而根据侧链基团的不同分别称作VK1,VK2，VK3，VK4等，这些产品应用性能基本一致，都起到凝血止血的作用，但饲用产品一般是VK3，其甲禁配主要衍生物包括以下几种类型：（1）亚硫酸氢销甲萘醌（MSB）白色结晶状，易溶于水和热乙醇，难溶于冷乙醇，不溶于本和乙醚，相对分子质量330．29，常温下稳定，高温时分解为甲萘醌后对皮肤有强刺激，对酸性介质敏感。（2）复合亚硫酸氢钠甲萘醌（MSBC）白色结晶状，结晶粒度…     

维生素K生产工艺进展

维生素K是重要的饲料添加剂。介绍了维生素K的种类、性质与生理意义。着重综述了维生素K的生产工艺。探讨了化学合成法生产维生素K的废液的治理途径,论证了微生物发酵法生产维生素K的可行性。     

Vitamin E regulates bovine granulosa cell apoptosis via NRF2-mediated defence mechanism by activating PI3K/AKT and ERK1/2 signalling pathways

High-yield dairy cows are usually subject to high-intensive cell metabolism and produce excessive reactive oxygen species (ROS). Once ROS is beyond the threshold of scavenging ability, it can induce oxidative stress, imperilling the reproductive performance of cows. The study was to investigate the effects of vitamin E (VE) on H₂O₂-induced proliferation and apoptosis of bovine granulosa cells and the underlying molecular mechanism. Granulosa cells were pretreated with VE for 24 hr and then treated with H₂O₂ for 6 hr. The results showed that VE treatment decreased the intracellular ROS levels, increased the MDA content, and improved the antioxidant enzyme activity in a dose-dependent manner. Furthermore, VE treatment promoted the proliferation and inhibited apoptosis in granulosa cells by up-regulation of CCND1 and BCL2 levels and down-regulation of P21, BAX, and CASP3 levels. The cytoprotective effects of VE were attributed to the activation of the NRF2 signalling pathway. Knockdown of the NRF2 impaired the cytoprotective effects of VE on granulosa cells. Besides, the PI3K/AKT and ERK1/2, but not the p38 signalling pathway is involved in the regulation of VE-mediated cell proliferation and apoptosis. The PI3K/AKT inhibitor LY294002 and ERK1/2 inhibitor SCH772984 inhibited the VE-induced granulosa cell proliferation and promoted apoptosis, whereas the p38 inhibitor SB203580 had the opposite effects. These results were confirmed by proliferation and apoptosis-related gene expression at mRNA and protein levels. The results also showed that the PI3K/AKT inhibitor LY294002 and ERK1/2 inhibitor SCH772984 inhibited VE-induced NRF2, GCLC, GCLM, and HO-1 expression, whereas the p38 inhibitor SB203580 not. Overall, the results demonstrated that VE-regulated granulosa cell proliferation and apoptosis via NRF2-mediated defence system by activating the PI3K/AKT and ERK1/2 signalling pathway.     

Establishment and Rudimentary Application of the nano-dPCR for Detection of PCV2 and PCV3

This study was aimed to establish a duplex nanoparticle-assisted PCR (nano-dPCR) method for the simultaneous detection of porcine circovirus type 2 (PCV2) and PCV3, and to apply this method in the detection of PCV2 and PCV3. Primers specific to PCV2 and PCV3 were designed by reference to the respective gene sequences in GenBank. The reaction conditions of nano-dPCR were also optimized. An evaluation of the specificity and sensitivity of the established nano-dPCR protocol proved the method to be both specific and sensitive, with the lower detection limit for the amount of nucleic acid in PCV2 and PCV3 to be 93.2 and 91.6 copies/μL, respectively. This sensitivity was 100 times higher than that of conventional PCR. The method was applied to inspect 265 clinical samples sent for testing, and the results showed that PCV2 and PCV3 infection in pig was rather common, with 16.6% positive for PCV3, 14.7% positive for PCV2, and 6.8% for mixed infection. The detection results on clinical samples supported the newly established nano-dPCR method as a rapid and sensitive differential diagnosis for the early infection of PCV2 and PCV3.     

PCV2和PCV3双重纳米PCR方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种同时检测猪圆环病毒2型（PCV2）和猪圆环病毒3型（PCV3）的双重纳米PCR（nano-dPCR）方法,同时应用该方法对PCV2和PCV3进行检测。参考GenBank中登录的PCV2和PCV3型基因序列分别设计特异性引物,对nano-dPCR的反应条件进行优化;同时考察所建立的nano-dPCR检测方法的特异性和敏感性。结果显示,所建方法的特异性和敏感性良好,对PCV2和PCV3两种病毒的最低核酸检测量分别为93.2和91.6拷贝/μL,其敏感性比普通PCR高100倍。应用该方法对送检的265份临床样本进行检测,结果显示,PCV2和PCV3在猪群中存在普遍感染,PCV3和PCV2的阳性率分别为16.6%和14.7%,混合感染阳性率为6.8%。临床样品的检测结果表明,本试验建立的nano-dPCR方法为PCV2和PCV3早期感染进行快速、敏感鉴别诊断提供了新方法。     

钙和维生素D3对肉仔鸡肉品质和血液生化指标的影响

本试验旨在研究饲粮中添加高水平的钙和维生素D3对AA肉仔鸡肉品质和血液生化指标的影响。试验采用2×2完全随机因子设计,选用240只21日龄AA肉仔鸡,随机分成4个处理,每个处理6个重复,每个重复10只。试验期为28 d。玉米-豆粕型基础日粮中含钙0.90%、维生素D3 750 IU/kg,日粮中共设两个钙水平(0.9%,1.15%)和两个维生素D3水平(750、5000 IU/kg)。结果表明:(1)在AA肉仔鸡饲粮中单独添加1.15%的钙对肌肉嫩度影响显著(P<0.05),5000 IU/kg维生素D3对肌肉嫩度影响不显著(P>0.05),同时添加钙和维生素D3的互作效应对肌肉嫩度影响显著(P<0.05);(2)1.15%的钙显著降低胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的含量(P<0.05),显著升高了高密度脂蛋白的含量(P<0.05);(3)单独添加5000 IU/kg维生素D3显著降低了低密度脂蛋白的含量(P<0.05)。以上研究结果表明,玉米-豆粕型基础日粮中长期添加1.15%钙和5000IU/kg维生素D3能够减小肌肉剪切力,降低血液中总胆固醇和甘油三酯的含量,从而提高肉品质。     

猪圆环病毒Ⅱ型体外诱导3D4/2细胞炎症模型的建立

【目的】通过对猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）体外感染3D4/2细胞浓度、时间与细胞炎症水平进行探讨,建立PCV2体外感染3D4/2细胞炎症反应模型,以期为后期药物调控PCV2诱发3D4/2细胞炎症反应的研究奠定基础。【方法】将3D4/2细胞分为对照组及10⁰、10^-1、10^-2和10^-3 PCV2感染组,每组3个重复。对照组用DMEM培养,各PCV2感染组用不同稀释倍数PCV2液培养,2 h后均更换为含5%胎牛血清（FBS）的DMEM维持液进行培养,培养4、8、12和24 h后分别收集细胞及细胞上清液。采用Griess法检测一氧化氮（NO）水平,DCFH-DA荧光探针法检测活性氧（ROS）水平,酶标法检测还原型谷胱甘肽（GSH）水平,分光光度法检测黄嘌呤氧化酶（XOD）和髓过氧化物酶（MPO）活性,ELISA法测定白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-10、γ干扰素（IFN-γ）、IL-8、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）以及环氧合酶1（COX-1）和COX-2的分泌水平。【结果】10⁰至10^-3 PCV2作用4、8、12和24 h均能够成功感染3D4/2细胞。与对照组相比,10⁰ PCV2在感染3D4/2细胞4、8、12、24 h后ROS水平均极显著升高（P<0.01）,10^-1至10^-3 PCV2感染3D4/2细胞8、12、24 h后ROS水平显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）;10⁰至10^-3 PCV2感染3D4/2细胞8、12、24 h后,细胞内NO浓度及MPO活性显著提高（P<0.05）,细胞上清液中的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、IFN-γ、IL-8和MCP-1水平及COX-1活性均显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）,其中10⁰ PCV2感染3D4/2细胞后,各炎症因子水平上升最显著,且随着时间的延长,NO浓度逐渐升高,XOD活性逐渐降低。【结论】PCV2可诱导3D4/2细胞炎症反应,且10⁰ PCV2体外感染3D4/2细胞4~12 h是建立炎症模型的最佳条件。     

牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型三重RT-PCR检测方法的建立及应用

根椐GenBank中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)和牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV-3)3种病毒基因序列,设计合成引物,建立3种病毒的三重RT-PCR方法。用这3对引物对同一样品中的BVDV、BRSV和BPIV-3核酸模板进行三重RT-PCR扩增,结果显示:可同时扩增BVDV的466 bp,BRSV的735 bp和BPIV-3的258 bp的特异性片段,而对其他4种病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该三重RT-PCR技术能检出10 pg的BVDV、1 pg的BPIV-3和10 pg的BRSV模板。用37份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示:两者的总符合率为100%。结果表明:建立的多重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。     

Establishment of QuantStudioTM 3D Digital PCR Method for Detection of Equine Herpesvirus Type 1

The purpose of this study was to establish a highly sensitive 3D digital PCR (3D-dPCR) method for the detection of equine herpesvirus 1 (EHV-1),which could accurately and quantitatively detect the samples with low EHV-1 content and realize the early diagnosis and prevention of equine rhinopneumonia.According to the conserved region of EHV-1 glycoprotein B gene,we designed specific primers and probes,optimized the concentration and annealing temperature of primers in the 3D-dPCR reaction system,analyzed the sensitivity,specificity and repeatability of this method,and established the 3D-dPCR method of EHV-1.In this study,the best concentration of primer and probe of 3D-dPCR was 0.4 and 0.4 μmol/L respectively,the best annealing temperature was 60 ℃,R² of the absolute quantitative curve of the method was 0.998,the linear relationship was good,the sensitivity was about 10 times higher than that of Real-time PCR,and the minimum detection limit was 5.83 copies/μL.There was no cross reaction with EHV-4,Theileria equi and the nucleic acid of equine arteritis.The results showed that the positive rate of 3D-dPCR was 66.7%,which was higher than that of Real-time PCR for EHV-1 in OIE (64.2%).The results of 3D-dPCR were consistent with those of Real-time PCR,and the sensitivity of 3D-dPCR to the samples with low virus content was higher,which could effectively detect suspicious samples.The results showed that the established 3D-dPCR method was more sensitive,specific and reproducible for the detection of clinical samples with low copy number,and could be used for the accurate and quantitative detection of EHV-1.     

内皮素3对小鼠黑色素沉着相关基因表达的影响

试验旨在探究内皮素3（endothelin 3,EDN3）在不同毛囊时期小鼠皮肤中是否存在差异表达及其对黑色素细胞黑色素沉着相关基因表达的影响。通过RT-PCR技术对EDN3、EDNRB在不同毛囊时期小鼠皮肤的表达情况进行定量分析发现,EDN3和EDNRB在小鼠不同毛囊时期皮肤样品中均有表达,在毛囊生长初期和中期小鼠皮肤中EDN3 mRNA表达量是末期的2.18倍（P < 0.05）和1.15倍（P > 0.05）,毛囊生长初期和中期EDNRB mRNA表达量是末期的16.8倍（P < 0.01）和9.9倍（P < 0.01）。为了进一步揭示EDN3在黑色素细胞色素沉着中的重要作用,通过细胞转染技术使小鼠黑色素细胞过表达EDN3并测定其黑色素含量及色素沉着相关基因的表达水平发现,与空载组相比,体外转染EDN3的黑色素细胞黑色素含量明显增加。此外,MITF mRNA显著降低（P < 0.05）;TYR、TYRP2、EDNRB、c-Kit和EDN1 mRNA显著升高2.04倍（P < 0.05）、1.44倍（P < 0.05）、1.41倍（P < 0.05）、5.21倍（P < 0.01）和3.27倍（P < 0.01）。MITF蛋白水平显著降低（P < 0.05）,TYR、TYRP2、EDNRB和c-Kit蛋白水平显著升高1.48倍（P < 0.01）、4.61倍（P < 0.01）、1.27倍（P < 0.05）和2.64倍（P < 0.01）。综上所述,EDN3在不同毛囊时期小鼠皮肤中均可有效表达,且表达量存在显著差异。黑色素细胞中过量表达EDN3,使色素沉着相关基因的表达量及黑色素含量增加。