华南虎源大肠杆菌的快速鉴定及致病特性的初步研究

从患病华南虎分离病原菌,进行快速鉴定,同时以大肠杆菌16S rRNA基因的通用引物和irp2、papC、iucD、tsh、iss毒力基因的特异性引物进行PCR扩增、测序,并将扩增出来的irp2、iucD、iss基因序列与Genbank相应序列进行同源性分析。测序鉴定为大肠埃希氏菌,与传统细菌鉴定方法结果相一致,分离菌携带irp2、iucD、iss毒力基因,从毒力试验得到证实。其序列与Genbank上发表的iucD、iss基因序列同源性分别高达98%、99%,而irp2基因序列的同源性仅为48%。采用16S rRNA基因序列分析法可以对华南虎大肠埃希氏菌感染进行快速鉴定,华南虎源性大肠杆菌同时携带有irp2、iucD、iss 3个毒力基因,可能与其致病性有关系。     

树鼩源大肠埃希氏菌耐药性分析与毒力因子鉴定

为了解树鼩源大肠埃希氏菌遗传进化同源性、对药物的敏感性以及所携带的毒力因子种类等,对广西南宁某大学人工驯化养殖的10只树鼩肠道内容物进行大肠埃希氏菌的分离纯化、生化分析及药敏试验等,并应用PCR技术对菌株进行16S rRNA同源性分析、毒力基因及耐药基因的检测.10份树鼩肠道内容物经分离纯化共分离出9株大肠埃希氏菌.同...     

宁夏吴忠地区奶牛临床型乳房炎主要病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解宁夏吴忠地区奶牛乳房炎的主要病原菌及其耐药情况,采集56份罹患乳房炎的奶牛乳样进行病原菌分离,并对分离菌进行了生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、药敏试验以及耐药基因检测.结果表明,该地区的主要病原菌为大肠埃希氏菌和无乳链球菌,检出率分别为23.2％和14.3％.药敏试验结果表明,大肠埃希氏菌主要对头孢他啶、...     

禽源大肠埃希菌Biolog鉴定和系统发育分析

采用Biolog和16S rRNA基因序列分析法对中国兽医药品监察所菌种室收集保藏的18株大肠埃希菌(Escherichia coli)进行了鉴定.菌株经纯化培养,用Biolog微生物鉴定系统进行了鉴定,结果表明18株菌株为大肠埃希菌.提取基因组DNA,采用16S rRNA通用引物,用PCR进行16S rRNA基因序列扩增,扩增产物纯化后进行测序.序列经人工校对后用Clustal X 1.83软件进行比对分析,采用Mega 3.1软件构建系统发育树,结果表明18株菌株为大肠埃希菌.     

引发仔猪水样腹泻的多重耐药、高致病性大肠埃希菌的分离与鉴定

近来,长春地区多个养猪场发生高致病性、高死亡率的仔猪水样腹泻,腹泻仔猪经多种药物反复治疗,均无疗效。试验从发病仔猪肠壁内膜分离到2株大肠埃希菌(Escherichia coli),经鉴定,分离菌株为多耐药、高致病性菌株。将分离株进行生化试验及其16S rRNA序列的克隆、测序,并与GenBank中的序列进行对比,结果显示,分离菌株16S rRNA与GenBank登录的大肠埃希菌序列同源性达99%。动物回归试验结果显示,该大肠埃希菌能引起仔猪水样腹泻。药敏试验结果显示,常用治疗大肠杆菌病的药物如庆大霉素、氧氟沙星、环丙沙星等均对其无效。     

犬源旱獭埃希氏菌的分离鉴定及耐药性分析

为了对采集自天津农学院附属动物医院确诊为子宫蓄脓的10岁母犬子宫脓汁进行病原菌鉴定,试验采用分离培养方法进行病原菌的分离,同时对分离到的菌株进行生化试验、药敏试验、16S rRNA测序鉴定。结果表明:分离菌菌落呈黏液型,染色镜检为革兰氏阴性菌,生化试验结果同埃希氏菌属,PCR扩增16S rRNA基因测序与旱獭埃希氏菌同源性最高,确定分离菌为旱獭埃希氏菌(Escherichia marmotae)。该分离菌对头孢噻吩、氨曲南、头孢呋辛、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、哌拉西林耐药;对头孢唑啉中度敏感;对氨苄西林、头孢西丁、氧氟沙星、链霉素、妥布霉素、卡那霉素、麦迪霉素高度敏感。说明本试验分离的犬源旱獭埃希氏菌的耐药性比较强,应引起重视。     

猪源大肠埃希菌血清型O145菌株分离鉴定、耐药性及致病性研究

大肠埃希菌是引起仔猪腹泻甚至死亡的最常见的细菌性病原体。本试验对辽宁某规模化猪场3日龄腹泻仔猪进行了细菌分离鉴定。结果显示：从腹泻仔猪肝脏中分离出革兰氏阴性杆菌,经16S rDNA基因扩增和序列测序比对,与GENBANK登录号为CP031919.1(血清型为O145大肠埃希菌)基因序列同源性为99.44%,表明分离菌株为血清型O145大肠埃希菌;动物试验结果：分离菌36h内引起感染小鼠全部死亡,说明分离菌株为强致病性大肠埃希菌;毒力基因检测结果：分离菌株携带iusD、iss、FimH等毒力基因;药敏试验结果：分离菌株对头孢噻肟敏感,对阿米卡星中敏,对多黏菌素B、头孢唑啉、阿奇霉素、阿莫西林、大观霉素、环丙沙星、红霉素、多黏菌素E、利福平、复方磺胺甲唑和多西环素等11种药物均呈现耐药;耐药基因检测：分离菌株携带aac(6′)-Ⅰb、aac(3′)-Ⅱ、TEM、qnrS、ermB等耐药基因。     

肉牛溶血性大肠埃希菌分离鉴定和毒力与耐药基因检测及药敏试验

为了解肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因分布情况及药物敏感性,从河北省围场县采集的健康肉牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠埃希菌,采用PCR检测大肠埃希菌的4个毒力基因和12个耐药基因,并采用K-B法进行药敏试验。结果表明,从116份健康的肉牛鼻腔中分离鉴定出23株溶血性大肠埃希菌,分离率为19.8%;毒力基因检测结果显示,6株菌同时携带LEE(Ler、eaeA)毒力基因,携带率26.1%,18株同时携带高致病性毒力基因HPIirp2、fyuA,携带率78.3%,6株同时携带LEE和HPI毒力基因,携带率为26.1%;耐药基因检测结果显示,blaTEM、aadA1耐药基因的携带率最高,为100%;药敏试验结果显示,23株溶血性大肠埃希菌对头孢氨苄、复方新诺明、磺胺间甲氧嘧啶耐药。结果表明,溶血性大肠埃希菌普遍存在于健康肉牛鼻腔中,HPI毒力基因和β-内酰胺类和耐链霉素类耐药基因携带率高。对河北省围场县肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因进行了研究,并进行药物敏感性分析,结果提示溶血性大肠埃希菌对肉牛养殖存在潜在威胁。     

藏系绵羊源沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌的分离与PCR鉴定

为研究外观健康藏系绵羊携带沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌情况,对采自外观健康藏系绵羊的19份肛门拭子进行大肠埃希菌和沙门菌分离鉴定.用选择性培养基及普通PCR方法共分离鉴定出1株沙门菌和13株大肠埃希菌,其中产志贺毒素大肠埃希菌4株,3株含有产志贺毒素基因Stx 1,1株含有产志贺毒素基因Stx 2,沙门菌invA基因和产志贺毒素大肠埃希菌Stx基因同源性分析表明,分离株沙门菌的invA与NCBI上已登录的5种血清型沙门菌核苷酸序列同源性为99.8％,4株产志贺毒素大肠埃希菌与NCBI上已登录菌株的核苷酸序列同源性都大于95％.本研究结果为高原地区藏系绵羊源沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌的流行病学调查奠定了基础.     

猪源肠外致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定与药敏试验

为对陕西某猪场仔猪肺炎病例进行确诊,无菌采集患病仔猪肺脏,并进行细菌分离培养、生化试验、16S rRNA基因测序、小鼠致病性试验、药敏试验以及耐药基因检测。结果表明,分离到的菌株其培养特性和生化试验与大肠埃希氏菌一致,16S rRNA基因测序与大肠埃希氏菌的同源性为98%;小鼠致病性试验验证了该菌株的致病性;药敏试验显示该菌对氨苄西林、复方阿莫西林、庆大霉素、四环素、头孢噻呋钠、头孢他啶、恩诺沙星、氟苯尼考和磺胺异恶唑等9种抗菌药物表现耐药,对替加环素、美罗培南和多黏菌素B敏感;耐药基因检测结果发现该菌携带sul3、tetA和TEM等耐药基因。研究结果确定了引起某猪场仔猪肺炎的病原菌,并对其生物学特性、耐药情况进行了研究,为临床诊断治疗提供参考。     

4 株致病性大肠杆菌致犊牛腹泻的分离鉴定及毒力与耐药性分析

[目的]为查明致北疆地区某牧场犊牛腹泻的病原,对脱水濒死10日龄新生犊牛进行剖检,无菌采集充血肠系膜淋巴结2 份。[方法]通过采用培养、染色镜检、生化特性考察、PCR鉴定等方法来分离鉴定致病菌,并对分离致病菌株进行相关毒力基因检测及药物敏感性试验。[结果]经分离鉴定分离出4 株大肠杆菌,毒力基因PCR检测结果K99、Sta、irp2、Eae基因分别在163 bp、314 bp、301 bp、552 bp处有清晰条带,与预期[目的]片段大小相符;药物敏感性试验结果表明,分离株对头孢哌酮、链霉素、庆大霉素敏感,对恩诺沙星、卡那霉素高度敏感。[结论]犊牛腹泻要以预防为主,治疗建议采用对因治疗,并配合提高抵抗力的中兽药进行。     

水貂出血性肺炎大肠杆菌毒力基因测定和H基因分型

为了分离鉴定引起水貂出血性肺炎的大肠杆菌,并对其致病性、血清型和毒力基因进行鉴定.本研究主要通过细菌分离鉴定试验对具有典型肺炎症状的死亡水貂的病原体进行分离,利用16S rRNA对进行细菌鉴定,并通过PCR方法对分离细菌的血清型和毒力基因进行检测,分析分离菌对动物的致病性.结果显示:28例水貂肺炎病例中分离出8株大肠杆...     

105株携带耶尔森菌强毒力岛大肠杆菌的毒力基因型和部分菌株毒力因子序列研究

为了解105株携带耶尔森菌强毒力岛(HPI)的大肠杆菌(E.coli)中相关毒力因子的流行情况和基因序列,根据GenBank中参考序列设计引物,采用PCR方法对广东地区养殖场来源的105分离株HPI+E.coli的fyuA、tsh、iucD、iss 4种毒力基因进行检测,统计基因类型;并对部分分离株的5种毒力基因(irp2和fuA、tsh、iucD、iss)进行了克隆与序列分析.结果显示105株HPI+E coli中4种毒力因子携带情况不尽一致,基因fyuA、tsh、iucD和iss的阳性率分别为55.24％、17.14％、49.52％和23.81％,105株HPI+E.coli共有13种基因型;分析表明,除iss基因与参考序列的同源性在88.0 ％～90.9％外,irp2、fyuA、tsh、iucD4种基因与GenBank中参考序列的同源性高达96％以上;广东省养殖场E.coli毒力因子基因型复杂,并以基因型irp2+ fyuA+ iucD+和仅含irp2+的菌株分离率最高,分别为17.14％和28％.     

Isolation,Identification and Biological Characteristics Analysis of a Strain of Clinical Streptococcus suis Serotype 2

In order to determine the pathogen and its virulence characteristics of a suspected case of piglets streptococcosis in a pig farms in Jiangxi province during September to November of 2013,a strain was isolated from the joint fluid and cerebrospinal fluid of one diseased piglet.The isolated strain was identified by culture characteristics,biochemical test,16S rDNA sequence analysis,serotype PCR test and further studied the presence of the following virulence genes:Glutamate dehydrogenase (gdh),virulent-assocciated sequence (orf2),fibronectin-binding proteins (fbps),suilysin (sly),extracellular protein factor (epf),muramidase-released protein (mrp) and antibiotic sensitivity tests.The isolated strain was identified as Streptococcus suis serotype 2 by culture characteristics,biochemical test,16S rDNA sequence analysis and serotype PCR test,and it was named as JMS2. Detection results of virulence gene showed that the distribution of main virulence genes of JMS2 were gdh⁺/orf2⁺/fbps⁺/sly^-/epf^-/mrp^-,suggesting that the strain maybe not likely to be high virulence.Drug sensitivity tests showed that the JMS2 was susceptibility to β-lactams such as penicillin,amoxicillin,but resistant to azithromycin,SMZ-TMP,and so on.The result was significant for the clinical prevention and treatment of swine streptococcosis.     

一株临床2型猪链球菌的分离鉴定及生物学特性分析

为了确定2013年9月至2013年11月江西省某规模猪场仔猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其毒力特性,本试验将病猪剖杀,采取脑脊液和关节液在血平板上划线进行细菌分离培养,将分离到的菌株进行生化试验、16S rDNA序列分析及基因血清分型鉴定,进一步对其进行毒力基因(gdh、orf2、fbps、sly、epf、mrp)检测和药敏性测定。结果显示,分离菌株在血平板上形成灰色"半透明"边缘整齐的有草绿色狭窄溶血环的光滑型圆形细小菌落,镜检呈散在排列的革兰氏阳性短链球菌,结合生化试验、16S rDNA序列分析及基因血清型分型,确定其病原为2型猪链球菌,命名为JMS2。毒力因子基因检测结果显示,JMS2主要毒力因子分布为gdh⁺/orf2⁺/fbps⁺/sly^-/epf^-/mrp^-,预示JMS2可能不是强毒力菌株。药敏试验结果显示,JMS2对β-内酰胺类抗生素如青霉素、阿莫西林等敏感,但对阿奇霉素、复方新诺明等细菌蛋白质合成抑制剂类抗生素耐药。本研究对临床防控猪链球菌病具有参考意义。     

腹泻水貂检出携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌

为了解大肠杆菌引起水貂腹泻的机理,进行了小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因的检测,并对其菌株做毒力试验。用PCR扩增法检测毒力岛基因irp2和fyua,小鼠腹腔注射检测菌株毒力。结果：从3个貂场腹泻病死水貂脏器以及粪便中分离出血清型分别为078、029和038的大肠杆菌,对3个血清型大肠杆菌进行毒力岛检测,均检出携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp2和fyua。3个血清型078、029和038的大肠杆菌均使小鼠发病死亡。结果表明水貂腹泻是由携带小肠结肠炎耶尔森茵HPI毒力岛基因irp2和fyua的大肠杆菌引起,该茵对水貂的健康具有潜在的威胁。     

河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌分离鉴定、毒力因子及耐药性检测

[目的]为了分析河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌携带毒力基因和耐药性情况,[方法]2020—2021年在河西走廊地区采集患腹泻病犊牛的粪便、肛拭子及肝脏等病料组织279份,采用人工感染试验动物、PCR方法和K-B药敏纸片法分别检测犊牛腹泻性大肠杆菌致病性、毒力因子和耐药性。[结果]结果表明,分离得到了126株大肠杆菌,其中79株犊牛腹泻性大肠杆菌能引起小鼠死亡;分离的79株致病性大肠杆菌的毒力基因crl、irp2、fimH、papC、K88、K99、stx1、stx2检测率在40.5%～100%之间,其他毒力基因检测率在15.2%～34.2%之间;分离的79株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等8种药物的耐药率在49.4%～96.2%之间,对其他药物的耐药率在5.1%～32.9%之间。[结论]从河西走廊地区患腹泻病犊牛病料组织中分离得到79株致病性大肠杆菌,这些菌株携带多种毒力基因,对临床中常用的抗菌药物产生了耐药性。     

奶牛源化脓隐秘杆菌的分离鉴定及其毒力基因的检测

本研究旨在分离鉴定来自北京某奶牛场死亡奶牛肺脏的1株疑似病原菌CVCC 3982,并测定其致病性。通过分离培养获得疑似病原菌,采用Biolog鉴定系统和16S rDNA序列分析对其进行了鉴定,人工接种CD-1小鼠测定了其致病性,合成引物对其主要毒力基因进行了检测。结果显示,该疑似病原菌为革兰氏阳性杆菌,β溶血,Biolog鉴定结果显示其为化脓隐秘杆菌,其16S rDNA序列与化脓隐秘杆菌模式菌株NCTC 5224的同源性达100%,系统发育分析显示其与化脓隐秘杆菌处于同一分支。腹腔注射该菌可致小鼠死亡。分离菌株基因组中含有溶血素(PLO)基因,神经氨酸酶H(NanH)基因,神经氨酸酶P(NanP)基因,菌毛基因(fimA、fimC和fimE),但缺失胶原结合蛋白(CbpA)基因和菌毛fimG基因。结果表明该分离菌株为化脓隐秘杆菌且具有致病性。     

鸽源性大肠杆菌的分离鉴定及茶多酚对其体外抑菌效果的研究

【目的】确定广州市某规模化鸽场腹泻病例的病原菌及探讨茶多酚对该病原菌的体外抑菌效果。【方法】采集广州市某规模化鸽场腹泻病鸽的粪便,通过分离纯化、染色镜检、16S rRNA基因测序和构建系统进化树等方法对病原菌进行鉴定;采用药敏纸片法分析病原菌的耐药性;采用PCR技术检测病原菌携带的毒力基因;同时通过体外抑菌试验测定茶多酚对该病原菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)以及不同浓度(0(空白对照)、125、250、500和1 000μg/mL)茶多酚对该病原菌的生长、运动和毒力基因表达的影响,综合评定茶多酚对该病原菌的体外抑菌效果。【结果】从病料中分离出1株致病菌株,其生物学特性与大肠杆菌基本一致,命名为GG20210604;经16S rRNA基因测序和系统进化树进一步证实,该菌株为大肠杆菌;经检测,GG20210604对环丙沙星和氨苄西林耐药,并携带4种毒力基因：fliC、fimH、iroN和hlyF;体外抑菌试验结果显示,茶多酚对GG20210604的MIC和MBC均为4 000μg/mL;与空白对照组相比,当茶多酚浓度为250、500和1 000μg/mL时,GG2021...