棉花黄萎病菌毒素产生条件的研究

用Czapek’s液体培养基培养的不同致病力类型的14个棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae Kleb.)菌株进行毒素产生条件的研究。试验结果表明:各菌株的培养滤液中的毒素含量与培养天数、菌丝量有关。各菌株在pH3的Czapek’s培养液中都不生长。其滤液也不含毒素;在pH5～9的Czapek’s培养液中生长良好,产生毒素量明显增加。在相同pH的Czapek’s培养液中培养结果,致病力强的菌株产生毒素量高于致病力弱的菌株。     

玉米弯孢叶斑病菌粗毒素的制备

对玉米弯孢叶斑病菌毒素的研究表明,利用甲醇沉淀毒素培养液得到蛋白和非蛋白部分,其中非蛋白部分对寄主具有生物活性;毒素培养液中的活性成分是一类极性较大的物质,而且溶于甲醇。各种生物测定方法中,针刺法方便、快捷,可作为检验该毒素生物活性的测定方法。可以利用甲醇沉淀、氯仿和甲醇混合提取制备粗毒素。     

松针褐斑病毒素的确定及其基本性质

以ＭＳ液体培养基培养２０ｄ左右至菌丝大量生长并紧密交织成团时病菌即可大量产毒,病菌是否产孢对产毒量大小无显著影响。毒素原液中仅非蛋白部分具致病活性,经高温高压灭菌１５ｍ ｉｎ 后活性仍不丧失,且有所加强。该毒素经冷冻或灭菌后于室温下可保存２个月以上而不失活。毒素粗提液中活性成分为一类极性较大的物质,易溶于水、甲醇、乙醇,可溶于正丁醇,微溶于乙酸乙酯,不溶于苯,可被活性炭吸附并为甲醇所洗脱。试验表明,毒素粗提液的ｐＨ值和渗透势分别为６．０和１．２２巴,毒素原液的毒性非ｐＨ值或渗透势所致,从而确定了病菌人工培养滤液中存在有具致病活性的毒素物质。     

大蒜白斑病菌(Stemphylium solani)毒素的基本性质分析

为了探明大蒜白斑病菌(Stemphylium solani)粗毒素液的致病机理,采用毒素活性分析方法,对大蒜白斑病菌粗毒素液的基本性质进行了初步分析。结果表明:S.solani毒素是一种极性较大的非蛋白小分子物质;经高温处理后,致病活性基本不变;在微酸或微碱条件下毒素较稳定,强酸性条件有利于加强毒素的致病活性,而强碱性条件下毒素活性有所下降;粗毒素液渗透势对生测结果无显著影响;培养液中的活性成分不能被活性碳有效吸附。官能团鉴定结果表明,粗毒素液中不含酚类、糖类和生物碱等物质,但含酯类和含氨基的有机物。     

不同除草剂对树莓中菟丝子防治效果

以多年生小浆果树莓林地为试验地块,对树莓上的日本菟丝子喷施3 种除草剂,观察防治菟丝子的效果及对树莓生长的影响,以期为树莓林地防治日本菟丝子提供参考。结果表明:三种药剂,药后30d 对菟丝子均有一定的防除效果,其中大葱专用除草剂120 倍液,施药后30 天防效达到88.4%,对树莓产生轻度药害,15d 后可正常生长,菟丝子全部枯萎,防效最好,且对树莓生长影响最小。6%的草甘磷水剂200 倍液和仲丁灵500 倍液,防效分别达到59.3%,50%,并产生药害,进入寄主部位的菟丝子能继续生长。     

栗疫菌(Endothia parasitica)致病毒素的初步研究

栗疫菌(Endothia parasitica)引起的板栗疫病是森林植物检疫对象之一。病原菌在侵染植物的过程中产生的毒素一向被认为是致病的重要因子。本实验以PD液体培养基为基础,通过震荡和静止两种培养方式,采用浸渍法和针刺法对板栗叶片和小枝进行了生物测定。研究显示板栗小枝和叶片可产生典型的症状,证明栗疫菌能产生具生物活性的毒性物质(毒素),PD培养液适于菌株的生长和毒素的产生。震荡培养比静止条件更利于产毒,浸渍法处理后第二天板栗小枝和叶片都表现典型的病斑和萎蔫症状,针刺法处理后第一天便表现出典型症状,说明针刺法比浸渍法效果更明显、叶片比小枝更敏感。     

中药菟丝子与其混伪品的鉴定

[目的]对中药菟丝子与其常见混伪品进行真伪鉴别,并对菟丝子与南方菟丝子2种正品进行对比鉴别,为菟丝子与其混伪品和2种正品菟丝子的鉴定提供依据。[方法]用性状和微性状鉴别法对菟丝子与其常见混伪品进行真伪鉴别;用性状、微性状、显微鉴别法和水煮吐丝试验对菟丝子与南方菟丝子2种正品进行对比鉴别。[结果]菟丝子与其常见混伪品的性状、微性状鉴别特征主要表现在形状、颜色、表面特征和种脐等方面的差别;菟丝子与南方菟丝子的性状、微性状鉴别主要表现在颜色、表面特征和种脐等方面的差别,两者的显微特征和水煮吐丝试验结果也存在明显差异。2种菟丝子显微特征的差别在于种皮表皮细胞断面观的形状和内列种皮栅状细胞的径向长度。水煮吐丝中2种菟丝子的水煮膨胀高度、水煮液颜色、吐丝率、吐丝情况及种皮、胚乳和胚芽的颜色区别明显。[结论]该研究为中药菟丝子与其混伪品和2种正品菟丝子的鉴定提供依据。     

不同除草剂对豆薯菟丝子的防效与安全性试验

选用7种除草剂对豆薯菟丝子进行茎叶喷雾处理,药后7 d调查菟丝子防除效果和豆薯叶片药害率,药后15 d调查豆薯块茎药害率。结果表明,30%草甘膦异丙胺盐水剂500倍液和1 000倍液对菟丝子茎尖防除效果分别达到95.00%和92.50%,对藤茎的防效分别为85.83%和80.83%,但对寄主植物豆薯叶片药害率分别为49.80%和3.72%;50%乙草胺乳油150倍液对菟丝子茎尖防除效果为83.33%,对藤茎防效为75.83%,对豆薯叶片药害率仅为0.89%;44%氟醚·灭草松水剂250倍液对菟丝子茎尖防除效果为81.67%,对藤茎防效为68.33%,对豆薯叶片无药害影响;其余除草剂虽对豆薯安全性好,但对菟丝子防除效果一般。从菟丝子防除效果和豆薯安全性方面综合考量,50%乙草胺乳油150倍液和44%氟醚·灭草松水剂250倍液可选作本地豆薯菟丝子防控的化学除草剂。     

水稻纹枯病菌毒素提取及其对水稻的毒性

致病力不同的3个水稻纹枯病菌株在改良的Richard培养基中培养能产生毒素,培养液过滤后经灭菌、活性炭吸附、甲醇洗脱和浓缩得到粗毒素。用3种毒素处理不同类型的水稻种子,测定发芽率、对胚根和胚芽生长的影响。结果表明,不同致病力菌株产生的毒素毒性差异明显,3个菌株粗毒素对不同类型水稻种子的发芽率、胚根和胚芽生长均有一定抑制作用,且浓度越高,抑制率越高能力越强。不同类型的水稻品种在同种毒素相同浓度下受到的抑制也有显著差异。     

草莓根腐病菌致病物质的初步研究

为明确引起草莓根腐病主要致病菌之一的石楠拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis photiniae)的致病机理,对该病菌的致病物质进行了初步探讨。在证实除去病菌菌体的培养滤液中存在致病活性物质的基础上,经硫酸铵沉淀法得蛋白类致病物质,用乙酸乙酯萃取毒素类致病物质,然后采用离体叶片针刺法测定致病活性,并对其基本性质进行了初步研究。结果表明,蛋白类物质无致病活性,毒素类物质具有明显的致病活性;毒素类致病物质是一种相对分子质量在10 kD以下的小分子物质,且热稳定性较差,不同pH值致病活性差异显著,pH 2.5时致病活性最强。     

松针褐斑病菌和4个球腔菌属真菌毒素杀草活性比较

以紫茎泽兰和湿地松幼苗为材料,研究球腔菌属4个菌种毒素粗提物活性,并与松针褐斑病菌对比。结果显示：褐孢霉菌和草莓蛇眼小球壳菌对湿地松幼苗和紫茎泽兰均具有伤害作用,且为非寄主专化性毒素。在MS液体培养基中,松针褐斑病菌产毒高峰为10～20d,20d达到最大;褐孢霉菌和草莓蛇眼小球壳菌产毒高峰为5～10d,10d左右达到最大。不同浓度毒素粗提液对紫茎泽兰伤害活性测定结果显示,松针褐斑病菌和褐孢霉菌毒素粗提物活性比草莓蛇眼小球壳菌毒素粗提物活性更强;梨球腔菌和柿子球腔菌在MS液体培养基中不能产生明显伤害生测材料的毒素物质。     

利用枯萎病菌粗毒素筛选香蕉抗性突变体

在香蕉(Musa AAA)组织培养过程,将枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)粗毒素添加到组织培养基中。结果表明,毒素对香蕉组培芽的分化和存活具有较强的抑制作用,粗毒素的添加剂量与组培芽存活率成反相关,致枯萎50%的粗毒素为36.3038μg.mL-1。添加粗毒素的多种筛选法均获得了香蕉抗枯萎病突变体。突变体再生苗用病菌分生孢子接种结果表明,其相对抗病性均显著高于亲本组织培养再生苗。本研究中,多步正筛选方案Ⅱ是利用粗毒素筛选抗香蕉枯萎病突变体的最佳方案。     

溃疡病菌Botryosphaeria dothidea粗毒素产生的条件及特性

为了研究溃疡病菌的致病机制,以葡萄座腔茵Botryosphaeria dothidea产生的毒素对北京杨Populus×beijingensis愈合组织的褐化程度为评价指标．对溃疡病菌产生粗毒素的条件和粗毒素的基本特性进行了初步研究。结果表明,溃疡病菌在改良Fries No．3液体培养基,25℃温度,光照,振荡培养,21d后所得的粗毒素毒性最强;该病原茵在偏酸性和中性条件（pH5．60和7．00）下易于产毒;产生的粗毒素对热不稳定,经121℃高温,0．11MPa压力处理15min后,其生物活性丧失;这种粗毒素对酸碱具有一定的稳定性,pH4．69及8．69时,粗毒素的生物活性虽有一定程度的下降。但与自然pH条件下的粗毒素的生物活性差异不显著。图5表3参18     

溃疡病菌Botryosphaeria dothidea粗毒素产生的条件及特性

为了研究溃疡病菌的致病机制,以葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea 产生的毒素对北京杨Populus × beijingensis愈合组织的褐化程度为评价指标,对溃疡病菌产生粗毒素的条件和粗毒素的基本特性进行了初步研究。结果表明,溃疡病菌在改良Fries No.3液体培养基,25 ℃温度,光照,振荡培养,21 d后所得的粗毒素毒性最强;该病原菌在偏酸性和中性条件（pH 5.60和7.00）下易于产毒;产生的粗毒素对热不稳定,经121 ℃高温,0.11 MPa压力处理15 min后,其生物活性丧失;这种粗毒素对酸碱具有一定的稳定性,pH 4.69及8.69时,粗毒素的生物活性虽有一定程度的下降,但与自然pH条件下的粗毒素的生物活性差异不显著。图5表3参18     

禾长蠕孢菌孢子及粗毒素对稗草防御酶系活性的影响

[目的]探讨禾长蠕孢菌(HGE)孢子及其代谢产物粗毒素对稗草主要防御酶系活性的影响。[方法]在室内条件下测定了HGE孢子及其粗毒素对稗草防御酶系[苯丙氨酸解氨酸(PAL)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)]活性的影响。[结果]HGE孢子、粗毒素及二者混合处理稗草后,不同程度地影响了稗草PAL、POD的活性,对SOD活性无明显影响,并且孢子和毒素对稗草防御酶系的影响具有相似性。[结论]病原真菌孢子和毒素对寄主的作用具有一定的相似性,基于病原菌致病过程的复杂性,毒素可以替代病原菌研究其部分致病性作用机理。     

Study on the Relationship Between the Toxin of Phytophthora infestans （Mont.） de Bary and Resistance of Potato

Plant pathogenic fungi produce mycotoxins which may lead host plants to produce disease symptoms and may have a significant positive role in the course of disease development. The putative Phytophthora infestans toxins were prepared by culturing in liquid medium (60 g rye and 10% tomato juice L-1) for 1 mon at 17℃, filtering through four layers of cheesecloth and being precipitated by ammonium sulfate. The resulted putative toxin solutions were used to study the effects on 3 potato varieties (both leaf and tuber tissues). The results show that potato leaves and tubers exhibit symptoms similar to the late blight resulted from P. infestans infection. Potato varieties reacting differentially to both the toxin dilutions and toxins produced by different P. infestans isolates suggested the presence of toxin-mediated specificities between potato and P. infestans. Potato leaf and tuber tissues have different and contrary reactions to the toxin. Toxin-mediated specificities are likely present between potato and P. infestans.     

马铃薯晚疫病菌毒素与寄主品种抗性关系研究

 【目的】明确晚疫病菌毒素对马铃薯的毒害作用,及不同生理小种产生的毒素对不同抗病品种的毒性差异。【方法】将马铃薯晚疫病菌培养在液体培养基（每升用黑麦粒60 g,含10%番茄汁）中,置于17℃培养箱中黑暗培养1个月,4层纱布过滤,滤液用(NH4)2SO4盐析,透析后的液体为毒素液。将该毒素液作为介体来测定马铃薯3个品种（叶片和薯块）的抗性。【结果】接种该毒素的马铃薯的叶片和薯块产生的症状与接种马铃薯晚疫病菌孢子囊产生的症状相似。马铃薯品种不同对不同浓度的毒素稀释液和源于不同马铃薯晚疫病菌菌株的毒素的反应不同。推测毒素介导下马铃薯和晚疫病菌间的特异性是存在的。马铃薯的叶片和薯块对毒素的反应是不同的,甚至是相反的。【结论】毒素介导下可能存在马铃薯和晚疫病菌间的特异性反应。     

水稻白叶枯病菌解毒蛋白的纯化及其对热和蛋白酶K的稳定性

采用(NH4 )2SO4分步沉淀法,从水稻白叶枯病菌培养液中分离到对水稻白叶枯病菌毒素有解毒作用的物质,即解毒粗蛋白(Crudedetoxificationprotein,简称CDP)。该解毒粗蛋白可以明显解除水稻白叶枯病菌毒素对水稻苗期生长的抑制作用、减轻毒素注射引起的烟草叶片组织坏死反应。运用滚动式等电聚焦电泳(RPIE)和离子交换层析(FPLC)技术,对解毒粗蛋白进行了分离纯化,SDS PAGE电泳鉴定结果表明,该解毒蛋白相对分子质量为 47 9kD。研究结果还表明该解毒粗蛋白对热和蛋白酶K不稳定。     

离体培养中利用病菌粗毒素检测香蕉枯萎病抗性研究

在香蕉组织培养过程中,将香蕉枯萎病菌粗毒素添加到组织培养基中,以测定不同品种香蕉对粗毒素的敏感性,并对薄片培养芽用粗毒素进行多次诱变以筛选抗(耐)病突变体。结果表明:供试5个品种香蕉离体培养芽对粗毒素的敏感性程度为农科1号粉蕉粉杂巴西蕉东莞大蕉,这与田间真实的品种抗病性不相符合,说明粗毒素虽然对不同抗性的香蕉品种均具有致病作用,但香蕉离体培养芽对粗毒素的敏感性程度与香蕉品种的抗病性无相关关系。巴西蕉和农科1号通过薄片诱导的不定芽对粗毒素的半致死浓度为40.63 mg/L和31.82 mg/L,两个品种香蕉离体培养芽经枯萎病菌粗毒素多次诱变筛选后可获得稳定的耐毒素芽。     

茄病镰刀菌毒素的研究Ⅰ．毒素的分离、鉴定及生物测定

将从豌豆根腐病病株分离获得的茄病镰刀菌（Ｆｕ）Ｄ－０１６菌株接种在ＰＳＤ培养液中，且２５℃恒温箱内黑暗静止培养１４天后，可获得具有毒性的培养滤液。培养滤液及提取的粗毒素经生物测定都具有植物毒性效应。粗毒素经分离纯化后进行的初步鉴定表明，该菌可产生茄病镰刀菌烯醇和Ｔ＿２、二醋酸草镰刀菌烯醇、Ｈ－Ｔ＿２等毒素。