刺激隐核虫感染的免疫预防研究进展

综述了刺激隐核虫感染诱发的免疫应答及其免疫预防的研究现状,为开发阻断或减少刺激隐核虫感染的方法提供参考。研究显示,刺激隐核虫感染可以诱发宿主鱼的先天性和适应性免疫;利用刺激隐核虫的虫体(特别是幼虫)以及表面蛋白(或抑动抗原)的重组蛋白和真核表达的重组质粒DNA免疫宿主鱼,均获得了一定的相对免疫保护率(40%～100%)。今后应进一步研究鱼与刺激隐核虫之间的相互作用,以便综合利用鱼对刺激隐核虫的免疫应答,研发高效、多元化的刺激隐核虫病的防治方法。     

刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备与特性分析

为获得刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体并初步分析单抗特性,提取刺激隐核虫幼虫膜蛋白,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/O细胞融合,以间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞。通过ELISA方法检测单克隆抗体的亚类及效价;通过SDS-PAGE和western blot分析单抗特异性结合的蛋白,并以串联质谱方法对所识别条带进行鉴定;采用免疫荧光法分析单抗的抗原结合位点和特异性。结果得到3株能稳定分泌刺激隐核虫幼虫膜蛋白抗体的细胞株(5D11AG5、5H9BG3、6E11CE7)。这3株细胞株产生的抗体亚型均为IgM,ELISA效价分别为1∶3200、1∶25600、1∶51200。单抗5D11AG5和单抗5H9BG3株能够识别~35kDa的刺激隐核虫幼虫膜蛋白线性抗原表位,单抗5D11AG5所识别的蛋白与数据库中刺激隐核虫表面抗原蛋白、嗜热四膜虫微管蛋白(tubulin)的肽段具有较高覆盖率。免疫荧光结果显示单抗5D11AG5和单抗5H9DG3识别部位主要在虫体表面近胞口的前端,而单抗6E11CE7识别虫体表面外膜。刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备,为刺激隐核虫功能性蛋白的筛选、纯化和功能分析提供了条件。     

鱼类感染刺激隐核虫的免疫保护机制

刺激隐核虫病是海水名优鱼类养殖中的常见寄生虫病,鱼类感染该病后,自身会产生一系列的免疫保护反应。笔者综述了刺激隐核虫诱导鱼类发生免疫保护、免疫反应机制以及刺激隐核虫疫苗的研究现状,以期为防治该病提供理论依据。     

3株刺激隐核虫的ITS-1序列与部分HSP70序列分析

经形态学观察,初步判断从福建长乐、福鼎和宁德三都澳三地患"白点病"的牙鲆、青石斑鱼、大黄鱼鱼鳃和体表上分离收集的寄生虫为刺激隐核虫CryptocaryonirritansBrown。提取基因组DNA,对ITS-1序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析,结果显示:3株刺激隐核虫的ITS-1序列完全一致,与广东番禺PYH4.12株(DQ270010)、日本Wakayama分离株(AB608054)、台湾嘉义Chiayi株(AF490381)等序列同源性为100%,与NCBI数据库中其他刺激隐核虫分离株的ITS-1序列的同源性为90.62%~99.22%,可以鉴定3株虫均为刺激隐核虫。进一步对刺隐核虫HSP70基因部分序列进行PCR扩增和序列分析,结果显示:3株虫间序列差异很小,说明福建省不同养殖模式、不同宿主得到的刺激隐核虫高度同源。     

海南岛石斑鱼刺激隐核虫病发病规律调查

采用定点采样检测和重点区域重点检测的方法,调查了2014—2015年间海南岛主要石斑鱼养殖区刺激隐核虫病的发病情况和流行规律。结果显示,石斑鱼刺激隐核虫病总体发病率稍微降低,其中,点带石斑鱼、斜带石斑鱼、豹纹鳃棘鲈最容易寄生暴发刺激隐核虫病;从石斑鱼养殖区发病地理位置分析,刺激隐核虫病主要集中在文昌到万宁等东部沿海地区;从流行季节分析,当水温低于25℃时文昌至万宁沿海每年的春夏、秋冬之交均会大量发病,在琼海欧村、万宁港北均出现大量暴发而导致整塘死亡的个案。     

中草药浸出液体外杀灭刺激隐核虫的效果

刺激隐核虫是一种严重危害海水鱼类的寄生虫,研究了18种中草药浸出液在体外对激隐核虫幼虫和包囊的杀灭效果,结果表明:辣椒和槟榔的杀虫效果最好,辣椒和槟榔在浓度为1 g/L时杀死全部刺激隐核虫幼虫所用的时间分别为(5.3±0.6)min和(16.0±1.7)min;大蒜、生姜、蛇床子、百部、川楝子、苦参、乌梅、大黄、枳壳的杀虫效果较弱,在浓度为50g/L时才能够在30 min内杀死全部刺激隐核虫幼虫;而牵牛子、贯众、黄柏、茯苓、荆芥、熟地黄、鹤虱没有杀虫效果。     

中草药浸出液体外杀灭刺激隐核虫的效果

刺激隐核虫是一种严重危害海水鱼类的寄生虫,研究了18种中草药浸出液在体外对激隐核虫幼虫和包囊的杀灭效果,结果表明:辣椒和槟榔的杀虫效果最好,辣椒和槟榔在浓度为1 g/L时杀死全部刺激隐核虫幼虫所用的时间分别为(5.3±0.6)min和(16.0±1.7)min;大蒜、生姜、蛇床子、百部、川楝子、苦参、乌梅、大黄、枳壳的杀虫效果较弱,在浓度为50g/L时才能够在30 min内杀死全部刺激隐核虫幼虫;而牵牛子、贯众、黄柏、茯苓、荆芥、熟地黄、鹤虱没有杀虫效果。     

中草药对刺激隐核虫幼虫的杀灭效果

选择几种具有杀虫功效的中草药或中草药提取物开展对刺激隐核虫幼虫的防治效果试验,结果表明:苦参、鹤芽草、鸦胆子、荜澄茄、使君子、苦楝皮浓度25~800 mg/L作用4 h内均无杀虫效果。双氢青蒿素浓度200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L 3个处理的杀虫效果相当,作用3 h内无杀虫效果,作用3 h以上死亡率超过50%。苦皮藤素浓度200 mg/L和400 mg/L 2个处理效果相当,作用10 min开始出现部分幼虫死亡,作用4 h的死亡率为100%;浓度800 mg/L作用10min开始出现部分幼虫死亡,作用2 h死亡率100%。贯众浓度40 mg/L以上的各处理均表现出一定的杀虫效果,作用10 min死亡率大于50%,作用2 h各处理死亡率均为100%,其中浓度200mg/L作用1 h的死亡率达100%,浓度400 mg/L和800 mg/L 2个处理作用10 min的死亡率达100%。说明:贯众杀虫效果最佳,其次为苦皮藤素,贯众和苦皮藤素具有针对性药用开发价值。     

鱼类"白点病"免疫防治的研究进展

多子小瓜虫（Ichthyophthirius multifiliis）和刺激隐核虫（Cryptocaryon irritans）是两种对鱼类最具致命性的寄生性纤毛虫,分别引起淡水和海水鱼类的＂白点病＂。多年来,该病给淡水和海水养殖造成了极大的经济损失。免疫学方法是防治＂白点病＂流行极具潜力并且具有诸多优点的方法。目前尚无商业化疫苗出现。从＂白点病＂可能的疫苗开发方向出发对目前＂白点病＂的免疫防治研究现状进行综述,以期对未来的研究提供参考。     

刺激隐核虫抑动抗原生物学信息及抗原特性分析

对刺激隐核虫抑动抗原基因进行生物学信息分析,利用抗原表位多肽制备了鼠源抗抑动抗原抗体,并研究其抗原特性.试验结果表明：利用表位串联多肽所制备的鼠源抗抑动抗原抗体包含有针对刺激隐核虫抑动抗原的特异性抗体,为刺激隐核虫单克隆抗体和疫苗的制备奠定了基础.     

大黄鱼在感染刺激隐核虫后MHC ⅡB基因的表达

[目的]为进一步研究大黄鱼抗刺激隐核虫的免疫防御奠定基础,也为海水鱼类养殖的免疫预防提供参考.[方法]用孵化2h内的刺激隐核虫感染大黄鱼,并运用Real-time PCR检测MHC ⅡB基因在各组织(鳃、皮肤、脾和头肾)中表达量的变化.[结果]MHCⅡB基因在鳃、皮肤和脾脏中的表达水平呈现先上调后逐渐下降的趋势,在感染6和12 h后表达量显著升高(P＜0.05);在头肾中,MHCⅡB基因在感染后6和12 h的表达量显著下调(P＜0.05),在感染2d后显著上升(P＜0.05).[结论]大黄鱼MHC ⅡB基因在刺激隐核虫的免疫应答过程中可能发挥重要作用.     

浸浴硝唑尼特对刺激隐核虫的驱虫效果

[目的]明确浸浴硝唑尼特(NTZ)对刺激隐核虫的驱虫效果,为其在水产养殖中的推广应用提供参考依据.[方法]将NTZ溶于二甲亚砜(DMSO)制成溶液,探讨NTZ对刺激隐核虫感染幼虫和滋养体的驱虫效果,并分析药物浓度、日换水量、硫酸铜(CuSO4)和渗透剂对其驱除刺激隐核虫滋养体的影响.[结果]NTZ对刺激隐核虫感染幼虫的杀灭作用随药物浓度的升高而逐渐提高,至20.0 μg/L时刺激隐核虫感染幼虫的死亡率达97.33%.经1.0 g/m3 NTZ浸浴72 h后,患病大黄鱼的刺激隐核虫滋养体完全脱落;NTZ与CuSO4配伍能有效提高药物对刺激隐核虫滋养体的驱除效果,以NTZ 1.2 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3浸浴72 h后患病大黄鱼体表和鳃部均无刺激隐核虫滋养体寄生,病鱼存活率达100.00%;渗透剂氮酮和换水方式与NTZ驱除刺激隐核虫滋养体的效果无相关性.[结论]NTZ浸浴鱼体能有效驱杀刺激隐核虫滋养体,尤其与CuSO4配伍可有效提高药物对刺激隐核虫滋养体的驱除效果,生产中建议使用剂量为NTZ 1.2 g/m3+CuSO4 0.5 g/m3.     

刺激隐核虫在褐牙鲆上的传代及其生活史观察

为保存从福建省长乐市褐牙鲆上分离的刺激隐核虫、并了解其生物学特性、以褐牙鲆为宿主鱼、在水温 22~24益时、对刺激隐核虫进行传代、详细观察其生活史及各阶段的形态结构、比较不同温度处理的包囊孵化率和孵 出幼虫的感染能力、分别采集感染后2 周和4 周的褐牙鲆血清做阻动试验。目前已成功进行了40 个周期的刺激隐 核虫传代保种、每个周期8~10 d、表明褐牙鲆可作为刺激隐核虫的模式宿主鱼。观察包囊的形态结构、发现少数包囊 中存在疑似滋养体并做旋转运动的圆形原生质体。包囊5益冷藏2 个月后刺激隐核虫的孵化率下降至7.6 %、用 1 000 个5益冷藏后孵化的幼虫感染褐牙鲆、未检出滋养体。免疫血清阻动试验表明、感染后2 周和4 周的褐牙鲆血 清对幼虫的阻动效价分别为1颐320 和1颐1 280、说明体液免疫在抵抗刺激隐核虫的感染中发挥了重要作用。     

福建罗源湾海区刺激隐核虫发生周年变化以及与水质因子的相关性研究

2009年对罗源湾主要网箱养殖区20个刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)病害调查站位和4个海水水质调查站位开展周年监测调查,并将刺激隐核虫检出站位数分别与各水质因子进行相关性分析。结果表明:刺激隐核虫在1年中有两个发生高峰期即春夏(5～7月)和夏秋(8～10月),高发期的水温在23.4～29.1℃之间;罗源湾刺激隐核虫检出站位数和水温、弧菌总数在0.01水平上呈极显著的正相关性,Spearman相关系数分别为0.836和0.859;刺激隐核虫检出站位数和硝酸盐在0.05水平上呈显著的负相关性,Spearman相关系数为-0.633;罗源湾刺激隐核虫发生状况和pH值、溶解氧、化学需氧量、活性磷酸盐、悬浮物、铵盐、亚硝酸盐、异养细菌总数等水质因子的相关性不明显。     

水库网箱养殖草鱼常见寄生虫病防治技术

一、小瓜虫病 1.病原:多子小瓜虫. 2.症状:当虫体大量寄生时,肉眼可见病鱼的体表、鳍条和鳃上,布满白色小点状囊泡,因而该病又称白点病.严重感染时,由于虫体侵入鱼的皮肤和鳃的表皮组织,引起宿主的病灶部位组织增长,并分泌大量的粘液,形成一层白色薄膜覆盖于病灶表面.同时鳍条病灶部位遭受破坏出现腐烂.     

水库网箱养殖草鱼常见寄生虫病防治技术

一、小瓜虫病1.病原:多子小瓜虫。2.症状:当虫体大量寄生时,肉眼可见病鱼的体表、鳍条和鳃上,布满白色小点状囊泡,因而该病又称白点病。严重感     

黄姑鱼海水网箱养殖技术

一、网箱养殖网箱的网目规格分别为15毫米、20毫米、35毫米和50毫米;网箱规格分别为3.5×2.5×1.5米、3.5×2.5×2.5米、3.5×2.5×3.5米和3.5×2.5×5米。15毫米网目是无结的机结网片加工而成;20毫米网目是有结的机结网片加工而成,网线为12丝;35毫米网目是有结人工编制网,网线为24丝;50毫米网目是有结人工编制网,网线为45丝。前三种网目规格适用于养殖4公斤以下的幼鱼,后一种规格适用于养殖4公斤以上的幼鱼和亲鱼。幼鱼从全长50～70毫米养殖到90～120毫米,使用15毫米网目的网箱;全长90～1200毫米养殖到210～230毫米,使用20毫米网目;全长达…     

美国红鱼的海水网箱养殖技术

美国红鱼学名眼斑拟石首鱼,为鲈形目,石首鱼科,原产于美国东南沿海.该鱼肉味鲜美,营养丰富,富含可预防心血管疾病的ω-3族脂肪酸,我国引进并成功地培育出大量红鱼苗供应市场.红鱼在美国原产地当年个体重可达500～1000 g,在我国浙江以南沿海采用海上网箱养殖,6月份放养,当年可达商品规格(大于500 g).