禽流感RT—PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法,应用此法对鸡胚培养ＡＩＶ尿囊液,ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩莠试验和电镜技术作了对比,特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）,传染性氏囊病病毒（ＩＢＤ     

用RT—PCR技术检测蓝乱病病毒的研究

蓝舌病病毒非结构蛋白ＮＳ１基因在各型中具有高同源性，可作为群特异检测的依据。采用ＮＳ１基因中２１０ｂｐ的区段作为ＰＣＲ扩增模板，经逆转录酶合成第一股ｃＤＮＡ后，再进行ＰＣＲ扩增。结果对ＢＴＶ可扩增出特异片段，而鹿流行性出血病病毒和茨城病病毒则不出现扩增。     

RT—PCR检测猪传染性胃肠炎病毒

根据猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）纤突蛋白S基因的5′端核酸序列设计了1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为886bp。在优化RT－PCR反应条件的基础上，建立了检测TGEV的RT－PCR方法。用此RT－PCR方法检测56份猪腹泻粪样，同时用夹心ELISA法作对照。结果显示，RT－PCR法检测的20份阳类粪样，用夹心ELISA法检测有14份呈阳性，两者的符合率为89％。RT－PCR法比夹心ELISA法敏感性更高，可用于TGEV的诊断和流行病学调查。     

用RT—PCR检测新城疫病毒的研究

用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测新城疫病毒（ＮＤＶ）。研究结果表明ＲＴ－ＰＣＲ可检测出Ｆ４８Ｅ９株、Ｌａｓｏｔａ株、Ⅰ系疫苗株、Ｌ株、ＳＹ１株等５株ＮＤＶ尿囊液为阳性,其敏感性可测至１０－３倍稀释尿囊液病毒。ＲＴ－ＰＣＲ还能直接检测出发病鸡气管中的ＮＤＶ。     

RT—PCR快速诊断猪流行性腹泻

猪流行性腹泻病毒(PEDV)属于冠状病毒,是一种猪肠道病原性腹泻病毒.其感染猪表现的临床症状与猪传染性胃肠炎(TCE)十分相似.虽然通过细胞培养可以进行病毒分离、诊断PEDV感染,但是PEDV只能在Vero细胞中繁殖,而且通常需要胰蛋白酶参与的情况下盲传数代,因此,有必要建立一种病原鉴别诊断方法.     

浅析荧光PCR检测出现假阳性和假阴性的原因

荧光PCR技术的高敏感性导致检测结果易出现假阳性和假阴性。阳性样本和阳性对照污染是导致假阳性的原因;RNA酶降解核酸是导致假阴性的重要原因。避免出现假阳性和假阴性检测结果需从实验室设置和管理、操作人员和试验器材管控入手。     

应用RT—PCR技术扩增禽传染性支气管炎病毒S1基因的研究

选择Ｓ１基因做为目的基因,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术分别扩增１２株以非免疫鸡胚繁殖并通过超速离心浓缩的鸡胚尿囊液中的ＩＢＶ,所用引物为ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列,跨幅为１．７２ｋｂ。结果６株ＩＢＶ毒株（ＳＡＩＢ３、Ｆ、Ｄ４１、Ｈ５２、Ｈｏｌｔｅ）扩增出了长约１．７ｋｂ的Ｓ１基因片段,而另６株ＩＢＶ毒株虽经４次ＲＴ－ＰＣＲ重复后也显阴性。用ＨａｅⅢ内切酶对６个毒株的ＲＴ－ＰＣＲ产物     

RT—PCR一步法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

根据已发表的ＩＢＶＳ基因核苷酸序列,自行设计合成了一对跨幅约０．９ｋｂ的引物。该区段包括了Ｓ１基因Ｃ末端的４００ｂｐ和Ｓ２基因Ｎ末端的５００ｂｐ。用该引物对５株ＩＢＶ参考毒株Ｇｒａｙ、Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈ５２和ＭＡ５进行ＲＴ－ＰＣＲ一步法扩增均获得预期的ＰＣＲ产物,该引物的ＲＴ－ＰＣＲ灵敏度检测结果表明,可以检测出０．１１２ｐｇ／μＬ的模板。用该引物对３０个地方分离株进行检测,１８株呈阳性,与鸡胚传代及电镜观察结果一致。     

禽流感通用型RT—PCR快速检测试剂盒

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的禽流感检测方法．根据禽流感病毒高度保守的M1基因序列．设计一套通用型引物．建立了快速检测禽流感的PCR一步法．并对反应条件进行优化．组装成快速检测试剂盒．并对临床收集的15份疑似禽流感病料进行了检测。结果显示．疑似禽流感病料检出率在100％以上。检测灵敏度达10^15 ELD50,稳定性良好,冷冻至少能保存12个月。通过对临床样品的检测,证实该试剂盒具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点．值得推广应用。     

VSV的RT—PCR快速检测方法的建立

选取水泡性口炎病毒N基因序列，设计1对引物，建立检测水泡性口炎病毒的RT－PCR方法。对VSV各毒株进行检测，结果均为引性， 而对反刍动物病毒性疾病相关病毒进行检测，结果均为阴性。结果表明所建立的RT－PCR技术可用于水泡性口炎的诊断和流行病学调查。     

鸡新城疫病毒B95株的RT—PCR检测方法研究

本试验设计了一对B95株的特异引物NDV－P1／P2，探讨了对其进行RT－PCR检测的可行性，结果证明，用该引物可以扩增出一条310bp的特异核酸带，敏感性为0．0043ng/ul。     

我国鸡传染性支气管炎病毒地方性流行毒株S1基因的RT—PCR扩增及其 …

采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,以ＩＢＶ Ｓ１全基因特异性引物分别从我国华东,华北,华中,华南,西北及东北等地的ＩＢＶ流行株基因组中扩增出预期的１．７ｋｂ左右的ＤＮＡ片段。ＰＣＲ产物的ＨａｅⅢ酶切分析及其与英国ＩＢＶ Ｓ１全基因核酸探针的分子杂交证实所获６个ＩＢＶ流行株的ＰＣＲ产物为ＩＢＶ Ｓ１基因。将此６个毒株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物分别进行５‘和３’端的ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切识别位点的分子修饰之后插入到     

RT—PCR快速诊断鸽新城疫

2008年11月成都市某种鸽场5120只种鸽发生急性疾病并出现大批死亡。临床表现有下痢和歪头缩颈等明显神经症状,剖检变化有全身性的黏膜和浆膜出血,并伴有呼吸道和消化道病变,经实验室细菌分离鉴定和RT—PCR检测,确诊为鸽新城疫。目前使用LaSota、V4等鸡新城疫疫苗进行免疫,可有效地控制该病在鸽群中的流行。     

用RT—PCR鉴别新城疫病毒不同毒力株的研究进展

本文概述了用RT－PCR技术检测新城疫病毒（NDV）的研究进展。主要介绍了鸡新城疫病毒（NDV）基因组结构以及强弱毒株F蛋白在裂解位点附近的氨基酸差异以及从感染鸡胚尿囊液提取RNA和从组织匀浆直接提取RNA,并用之作RT－PCR以鉴别NDV毒株毒力和诊断ND的研究现状及应用前景。     

禽流感与新城疫二联RT—PCR诊断方法的建立及其应用

根据禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)基因组序列高度保守区，设计合成了2对引物，以AIV、NDV培养物提取RNA并反转录，进行RT-PCR特异性片段扩增，扩增的片段大小分别为470和320bp。结果，扩增产物与设计的2对引物之间的序列大小一致。通过特异性与敏感性试验，AIV、NDV培养物均可扩增至10^-4，表明本方法对2种病毒具有快速、特异和高度敏感的特点。