犊牛弓首蛔虫病的诊断与控制

犊牛弓首蛔虫病是由弓首科弓首属的牛弓首蛔虫寄生于牛犊小肠内而引起的以肠炎、腹泻、腹部膨大和腹痛为特征性症状的寄生虫病。初生牛犊大量感染时可引起死亡,对养牛业危害很大。1995年笔者相继在南阳卧龙区、唐河县确诊了该病的存在,但未进一步调查整理。经查《南阳地区畜禽疫病志》,未曾记载该病的存在,笔者也未曾见当地有该病的报道。2001年以来,从诊治的59头牛犊腹泻病例中确诊由牛弓首蛔虫致病16头,占牛犊腹泻病例的27．12％,其中死亡1头。     

用胶体金免疫层析法检测饲料中莱克多巴胺含量

本试验用胶体金免疫层析法对某区域内生产和销售的中大猪配合饲料进行莱克多巴胺含量检测,以摸索有效快捷的莱克多巴胶检测方法.     

基于胶体金免疫层析法快速筛查水产品中的药物残留

[目的]应用现代检测技术,对水产品中药物残留实施监控,推动水产品市场准入制度和基地准出制度的实施.[方法]运用胶体金免疫层析法对采集的水产样品中可能残留的违禁药物进行快速筛查.[结果]试验显示,此方法检测限能达到：氯霉素≤0.5 μg/kg、孔雀石绿≤1.0 μg/kg、硝基呋喃代谢物≤1.0μ/kg、氟喹诺酮≤10 μg/kg,在一定程度上满足了基层对水产品质量安全监管需要,大大减少了基层对水产品安全检测的盲区.[结论]胶体金免疫层析法（GICA）是一种新型快速免疫检测技术,具有特异性强、操作简便快捷、检测成本低等优点,研究可为水产品中的违禁药物残留监控提供技术支持.     

犬蛔虫病的诊断和防治

本病是由蛔虫科的弓首蛔虫寄生于犬的小肠所引起的,是犬常见的线虫病。本病分布于全国各地十分普遍,常引起幼犬发育不良,生长缓慢,严重时可导致死亡。一、症状弓首蛔虫的致病作用主要是虫体的机械作用、吸取营养作用和霉素作用。     

胶体金免疫层析法与酶抑制率法快速检测果蔬中农药残留比较研究

运用胶体金免疫层析法与酶抑制率法快速检测蔬菜、水果中高风险农药残留,以腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟虫腈、百菌清5种农药为例.结果显示,胶体金免疫层析法重复性好,有较高的特异性和灵敏度,检出限可满足GB 2763—2019中规定的最大残留限量要求,无假阳性、假阴性现象,相对准确度较高.与现行有效的国家标准GB/T 5009.199—2003中酶抑制率法相比,胶体金试纸条具有操作简便、检测速度快、受检测环境温度影响较小等特点,适用于对蔬菜、水果中农药残留的现场筛查和检测.     

胶体金免疫层析法在水产品快速检测中的应用和发展方向

胶体金免疫层析法具有简单快速、敏感特异,无需辅助仪器设备,结果判读容易,稳定性好等特点,该方法已成为现今最快速敏感的免疫学检测方法之一,广泛应用于生物医学等各个领域。本文主要阐述了胶体金免疫层析法的基本原理、技术特点等,并简要介绍了该方法在水产品快速检测中的应用及发展方向。     

鸡新城疫免疫胶体金诊断技术的研究

为了建立一种快速、简便的检测鸡新城疫病毒(NDV)的胶体金免疫层析法(GICA),采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的ND抗体,并包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的ND抗体和纯化的兔抗鸡抗体包被在硝酸纤维素膜上,组装成ND快速检测试纸条.用本试验研制的ND快速检测试纸条检测收集的24份样品,其结果与HA结果一致,符合率100%;当病毒HA效价在1∶40以上时,试纸条均能检测为阳性;ND快速检测试纸条与已知的马立克病(MD)病料和鸡传染性法氏囊病(IBD)病料的上清液无交叉反应出现,且保存6个月后重复性100%.试验证明,建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可用于鸡新城疫诊断,具有广泛应用价值.     

犬蛔虫病的诊治

犬蛔虫病是由犬弓首蛔虫和狮弓蛔虫寄生于犬的小肠和胃内引起的一种线虫病。蛔虫病是肠套迭的主要原因之一。主要危害1～5月龄的犬,影响生长和发育,严重的可导致死亡。     

应用特异PCR方法诊断2例猪弓形虫病

[目的]应用特异PCR方法诊断猪弓形虫病。[方法]分别以弓形虫核糖体DNA第一内部转录间隔区(ITS1)序列和529 bp重复序列为目的片段,扩增2例疑似猪弓形虫病的病料肺门淋巴结DNA,对疑似猪弓形虫病的病料进行PCR诊断。[结果]2对引物均能分别扩增出2例肺门淋巴结中弓形虫DNA的特异条带。[结论]基于2种扩增片段的PCR方法均具有较高的特异性,是诊断猪弓形虫病的一种快速检测方法。     

斑点法检测柑桔黄龙病, 香蕉束顶病

 用改进的斑点法检测柑桔黄龙病类细菌、香蕉束顶病毒(BBTV),均获满意结果.阳性反应在硝基纤维转移膜上形成深浅不等的褐色斑点.检测健康柑桔、香蕉粗汁液,获阴性结果,在上述固相载体上不形成有色物质.在缓冲液TBS中加入2%TritonX-100和1%国产蛋白片,作为改进后的封闭缓冲液,封闭硝基纤维转移膜上未结合抗原部位,效果较好.斑点法检测活体香蕉束顶病样品及-30℃冷冻保存6个月香蕉束顶病样品,同样获满意结果.斑点法快速、准确、简单、灵敏度高、特异性强,可用于植物检疫,存在于硝基纤维转移膜上的检疫结果可长期保存.     

五氯酚钠胶体金快速检测试纸条的研制

[目的]研制五氯酚钠胶体金快速检测试纸条。[方法]利用胶体金免疫层析技术,研制一种快速检测猪肉、鸡肉、鱼、虾、水质中五氯酚钠的试纸条。[结果]经测试,该试纸条对猪肉、鸡肉、鱼、虾的检测限为1μg/kg,对水质的检测限为2μg/kg,检测时间为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。[结论]该方法准确、可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。     

间接免疫荧光检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒及抗原定位方法的初步建立

 【目的】建立间接免疫荧光（IFA）检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒（DSHDV）的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段。【方法】用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDV IgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法;利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测。应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性。【结果】IFA最佳条件为：切片在0.01 mol•L-1 柠檬酸（pH 6.0）缓冲液微波修复20 min后,以10%马血清37℃下封闭30 min,然后加入1﹕50的一抗4℃孵育过夜,最后加入1﹕100 FITC标记的含0.01%伊文斯蓝的二抗37℃孵育30 min。IFA检测DSHDV感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阳性,而检测鸭瘟、禽流感病毒(H5N1)、鸭病毒性肝炎、鸭疫里默氏杆菌感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阴性。IFA检测28日龄人工感染DSHDV死亡鸭的不同组织器官,心、肝、脾、胰、肺、肾、法氏囊、食管、气管、胸肌、胸腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠为阳性;哈德氏腺、脑、皮肤、腺胃为阴性。阳性组织中病毒抗原主要分布在细胞浆。经甲醛固定保持1～6年的临床死亡鸭的病毒分离阳性肝脏,IFA检测结果也呈阳性。DSHDV具有呼肠孤病毒特征,有10条分节段核酸,呈“334”分布。【结论】建立的检测石蜡组织切片中DSHDV抗原的IFA具有直观、特异性强的优点,应用于DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位具有良好效果,可用于DSHDV感染的实验室诊断、病原在鸭组织细胞中分布研究。DSHDV抗原存在感染细胞浆,肠道、肾脏、法氏囊和胸腺是DSHDV侵害的主要靶器官。     

斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病

[目的]探讨斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病的可行性,为制备诊断猪蛔虫病试剂盒提供参考依据。[方法]采用猪蛔虫的重组蛋白AS16抗原和胶体金标记葡萄球菌蛋白A（SPA）,根据免疫渗滤原理,建立抗猪蛔虫抗体的斑点金免疫渗滤检测法。[结果]斑点免疫金渗滤法检测1200份猪血清样本中猪蛔虫抗体,检出阳性率为25.00%,而琼脂扩散试验（AGP）阳性检出率为15.00%。[结论]斑点金免疫渗滤检测法具有操作简便,灵敏度高,特异性强的优点,可用于猪蛔虫病的快速检测。     

免疫胶体金标记技术及其在植物保护上的应用前景

综述了胶体金制备、质量鉴定方法 ,胶体金探针的制备、纯化方法 ,以膜为固相载体的免疫胶体金快速试验即免疫层析和免疫渗滤试验技术 ,以及免疫胶体金标记技术在植物保护研究领域中的应用前景。     

应用流式细胞仪检测细胞凋亡的4种方法的比较

[目的]比较4种测定细胞凋亡方法的优缺点。[方法]应用流式细胞仪,分别采用PI单染法、Annexin V-FITC/PI复染法、罗丹明123染色法及Fluo-3染色法测定细胞凋亡。[结果]每种分析方法均有自己优势和不足,在检测过程中应进行多参数分析。[结论]该研究可为后续研究提供试验方法支持。     

应用间接血凝试验(IHA)诊断猪蛔虫病

以猪蛔虫抗原致敏绵羊红细胞制备检测猪蛔虫特异性抗体的间接血凝诊断试剂,与猪蛔虫抗体发生特异性凝集反应.结果表明,用间接血凝诊断试剂对3 000份猪血清进行现场检测,阳性率为30.00%;而琼脂扩散试验(AGP)的阳性率为13.00%,表明,间接血凝试验(IHA)比GAP敏感,间接血凝诊断试剂可用于猪蛔虫病的快速诊断.     

胸膜肺炎放线杆菌的PCR诊断方法研究

采用胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)外膜脂蛋白Om/A基因序列合成了1对特异性引物,建立了用于检测App的PCR方法.结果表明:经过PCR扩增,3株App分离株均能扩增出长约950 bp的预期DNA片段,而大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、葡萄球菌(Staphylococcus sp.)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、变形杆菌(Proteus sp.)和链球菌(Streptococcus sp.)等与猪病有关的8种病原菌均为阴性;App DNA最低检出浓度可达55.0 ng/mL,且试验结果与传统的生化反应鉴定结果完全一致,符合率达100%,证明此方法特异性和敏感性强,可用于猪传染性胸膜肺炎的快速诊断.     

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用

笔者研究构建了一种基于ESE-Quant tube scanner设备的新型实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)IHHNV检测方法,评价其敏感性、特异性、反应速度和实际检测结果。结果表明,IHHNV实时LAMP检测方法在63℃条件下,30 min内检测到106稀释的基因组DNA,可检测到24个质粒拷贝;与27种包括多种水生动物以及对虾常见病原DNA均无交叉反应。通过对152份实际样品的检测,实时荧光LAMP检测方法的检出阳性率为59.87%,与real-time PCR方法相当,高于其他检测方法。本研究建立的IHHNV实时LAMP检测方法对现场诊断具有较大的应用潜力。