孕酮对小鼠妊娠早期子宫内膜转化生长因子β1Ⅰ型受体表达的影响

采用免疫组织化学SABC法，研究了外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β1Ⅰ型受体(TGFβRⅠ)表达的影响。结果显示：(1)孕4d，注射2mg孕酮组，子宫表面上皮、腺上皮及基质中TGFpRI表达增加，与对照组和注射孕酮4mg组差异显著(P＜0．01)。注射孕酮4mg组，表面上皮TGFβRⅠ表达无显著增加；腺上皮细胞TGFβRⅠ表达稍有下降，但与对照组差异不显著；基质细胞TGFβRⅠ表达明显增加，与对照组差异显著(P＜0．01)。(2)孕5d，试验组表面上皮和腺上皮TGFβRⅠ随着孕酮剂量的加大，其表达下降；基质细胞TGFβRⅠ表达则随孕酮剂量的增加而增多，且3组间差异显著(P＜0．01)。(3)孕6d，注射2mg组，表面上皮及基质细胞TGFβRⅠ表达增加，与对照组差异显著(P＜0．01)，而腺上皮TGFβRⅠ表达呈下降趋势。注射4mg组，表面上皮、腺上皮及基质表达变化趋势同孕5d。结论：外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β1型受体表达有一定影响，即孕酮可显著提高基质TGFβRⅠ表达，但对腺上皮TGFβRⅠ的表达有下调作用；对表面上皮TGFβRⅠ的表达作用不定，2mg使表面上皮TGFβRⅠ表达增多，4mg使TGFβRⅠ表达降低。     

生长因子β1(TGF β1)和孕酮对着床期子宫内膜的调节作用

TGFβ1是一种肽类生长因子，广泛分布于妊娠期的子宫内膜，它和类固醇激素一起参与调节胚泡着床时子宫内膜局部微环境内发生的生殖活动，对妊娠的维持起着重要作用。本文就转化生长因子β1(TGFβ1)和孕酮对着床期子宫内膜的调节作用进行综述。     

分离培养兔子宫内膜细胞的鉴定及性激素对子宫内膜间质细胞形态的影响

为探讨子宫内膜细胞的形态学特点、分泌功能及性激素在子宫内膜细胞中的作用，采用不同的消化分离方法进行了孕早期家兔子宫内膜细胞的消化和分离培养试验。结果显示：子宫内膜主要包括两类细胞，基质细胞和上皮细胞，两类细胞分别在波形蛋白和细胞角蛋白免疫细胞化学染色中有阳性反应特点；在培养基中加入雌激素和／或孕酮刺激后，基质细胞形态发生变化，表现一定的蜕膜化现象。     

孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达的影响

为研究孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达的影响,本试验以原代奶牛子宫内膜上皮细胞为材料,添加不同浓度孕酮(0、1、3、5 ng/mL)对其培养,采用CCK-8法检测孕酮对细胞增殖的影响;免疫印迹法检测孕酮对Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达的影响。结果表明:与对照组相比,添加1、3 ng/mL孕酮组奶牛子宫内膜上皮细胞增殖率提高(P>0.05),5 ng/mL孕酮组细胞增殖率降低(P>0.05);与对照组相比,1 ng/mL和3 ng/mL孕酮组Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin、cyclin D1和c-Myc的表达水平均升高(P<0.01),而5 ng/mL孕酮则抑制了β-catenin的表达(P<0.05),且cyclin D1和c-Myc蛋白表达较3ng/mL孕酮组有下降趋势(P>0.05)。综上,高浓度孕酮抑制了体外培养的原代奶牛子宫内膜上皮细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活和表达,提示该信号通路参与了奶牛产后子宫复旧延迟进程,为进一步研究奶牛子宫内膜的发病机制提供思路。     

延后着床对小鼠妊娠的影响

哺乳动物的胚胎植入都存在着一个短暂的植入窗口期,这个窗口期阻碍了辅助生殖技术的应用。通过以小鼠为研究对象,利用胚胎移植技术研究了延后着床对妊娠的影响。结果显示,小鼠的胚胎在延后1d(即第5天)也能着床并能诱导蜕膜化的发生,而延后2d则不能移植。与正常组(第4天移植)相比,延后着床组的胚胎吸收率明显增加、窝产仔数明显减少及妊娠期延长。试验结果表明,小鼠胚胎超出子宫植入窗口期亦可着床,但会导致植入间隙和胎盘发育异常进而影响妊娠结果。     

孕酮对体外培养的牛子宫内膜细胞上孕酮受体表达的影响

本试验分别用50、100、200和400 ng/mL浓度的孕酮处理体外培养的牛子宫内膜细胞1、3、6、12、24 h,然后收集细胞通过半定量RT-PCR分析孕酮对子宫内膜细胞孕酮受体（PR）表达的影响。结果表明：在细胞层次水平上,孕酮能够抑制子宫内膜体外培养细胞上孕酮受体的表达。     

膜联蛋白A8在小鼠早期妊娠子宫中表达研究

膜联蛋白A8(Annexin A8,ANXA8)是一种磷脂结合蛋白,与炎症反应、癌症的发生以及血管生成有密切联系。本实验旨在利用实时荧光定量PCR、原位杂交与免疫组织化学的方法研究ANXA8 mRNA与蛋白在小鼠早期妊娠和人工蜕膜子宫中的表达。原位杂交结果表明:ANXA8 mRNA在小鼠早期妊娠第1～4天子宫腔上皮和腺上皮有微弱表达,ANXA8 mRNA在妊娠第5、6天的初级蜕膜区与第7、8天的次级蜕膜区表达,并随妊娠进行逐渐增强;人工蜕膜化模型中ANXA8 mRNA表达在蜕膜区。实时荧光定量PCR证明:ANXA8 mRNA的表达量在早期妊娠模型中的第7、8天显著提高,人工蜕膜侧子宫与对照侧相比也显著提高。免疫组织化学结果表明:ANXA8蛋白与ANXA8 mRNA表达规律相似。体外分离培养小鼠子宫基质细胞,并诱导蜕膜化,实时荧光定量PCR结果表明ANXA8随着基质细胞的蜕膜化表达升高。以上体内和体外实验表明,ANXA8在小鼠子宫中的表达具有着床相关特异性,ANXA8参与小鼠子宫蜕膜化过程。     

雌激素和孕酮对犬子宫内膜基质细胞增殖和孕酮受体表达的影响

本试验应用不同消化分离途径获取犬子宫内膜基质细胞,调节培养液中雌激素(E₂)和孕酮(P₄)的浓度,采用MTT法测定E₂和P₄浓度水平对犬子宫内膜基质细胞体外增殖的影响,利用细胞免疫组织化学法鉴定细胞并测定细胞孕酮受体(PR)表达与激素浓度水平的相关性。结果表明,E₂浓度变化(15、30、100 pg/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖和PR的表达均没有显著的调节作用(P>0.05);P₄(15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖有显著促进作用(P<0.05),P₄(3、15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞PR的表达具有显著的抑制作用(P<0.05),其影响程度与浓度和作用时间关系密切。     

环氧合酶-1和环氧合酶-2在兔早期妊娠子宫内膜及早期胚胎中的表达

环氧合酶(cyclooxygenase，Cox)是由花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，而前列腺素在哺乳动物的生殖过程中起着很重要的作用。本试验采用RT—PCR方法对环氧合酶-1(Cox-1)及环氧舍酶-2(Cox-2)在早期妊娠兔子宫内膜中的表达进行了半定量研究和在早期胚胎中的表达定性研究。结果表明，Cox-1在早期妊娠兔子宫内膜中表达较平稳，呈组成型表达；在早期胚胎中各个时期均可以检测到Cox-1mRNA，表明它在早期胚胎发育过程中起作用。Cox-2在早期妊娠子宫内膜中的表达水平有很大差异，妊娠第l天表达水平较高，从第2天开始表达下降，到第6天表达又明显增加，第8天达到最高。Cox-2在囊胚之前的各个时期胚胎均未检测到，而在扩展胚泡和孵出胚泡中表达，Cox-2的时期特异性表达可能与兔胚泡孵出及胚胎着床等过程相关。     

孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡和容受性的影响

为研究孕酮对奶牛早期胚胎附植的影响,本试验使用不同质量浓度孕酮处理奶牛子宫内膜上皮细胞,CCK8检测细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡,实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因(p53、Cyto-c、Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3)和容受性相关基因(TLR-4、NF-κB、IL-6、VEGF、LIF和EGF)的mRNA和蛋白表达变化。结果显示：10,25,50,100μg/L孕酮对细胞活力未见影响;10,100μg/L孕酮对细胞凋亡未见影响,对细胞p53、Cyto-c、Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的mRNA及蛋白的表达未见影响,但显著下调了TLR-4 mRNA和蛋白表达水平,显著上调了LIF和VEGF mRNA和蛋白表达水平。结果表明孕酮不影响奶牛子宫内膜上皮细胞的凋亡,但能提高子宫容受性,降低免疫反应。     

交感神经对妊娠早期小鼠子宫内膜发育的影响

为了研究交感神经对小鼠妊娠早期(妊娠第1～9天)子宫内膜发育的影响,本试验采用交感神经阻断剂6-羟多巴胺(6-OHDA,100 mg·kg~(-1)体质量)腹腔注射成年雌性昆明小白鼠,损毁外周交感神经.利用放射免疫分析法、组织学和免疫组织化学技术,检测了小鼠妊娠早期血清17β-雌二醇水平、子宫腺发育和子宫内膜细胞增殖的变化.结果显示:(1)在妊娠第1天(E1)、E5和E7 6-OHDA处理组血清中17β-雌二醇的含量分别降低了63.4%(P<0.01)、35.7%(P<0.05)和25.5%(P<0.05),而在E3和E9分别升高了79.3%(P<0.05)和156.7%(P<0.01);(2)6-OHDA处理降低了妊娠早期子宫腺的比例,与同期对照组相比分别下降了37.5%、38.6%、41.8%、61.4%和58.1%(P<0.01);(3)6-OHDA处理降低了妊娠早期子宫内膜细胞的增殖,使E1、E3、E5、E7和E9子宫内膜增殖细胞分别减少了27.2%、30.2%、40.7%、27.2%和27.7%(P<0.01).上述结果表明,交感神经对雌激素的分泌以及妊娠早期子宫组织结构的重建具有重要的调控作用,进而调节动物早期胚胎的着床和发育.     

猪TGFβ1基因及其受体组织表达特性的研究

以妊娠母猪为研究材料,采用RT-PCR半定量方法对猪转化生长因子β1(TGFβ1)及其3种受体组织表达特点进行研究。结果表明:TGFβ1在11种组织中的表达量,由高到低依次为肾上腺、下丘脑、肌肉、卵巢、脾、大脑、肾、子宫、肺、肝和心脏。3种受体的表达,总体上来说在子宫中相对较高。TGFβ1及其受体在肾上腺和子宫等组织中有相对较高的表达量,提示其在繁殖过程中可能发挥作用。     

孕酮、干扰素τ对牛子宫内膜上细胞外基质及其相关配体表达的影响

为探索干扰素τ(IFN-τ)、孕酮对牛子宫内膜上细胞外基质(ECM)及其配基基因表达的影响,本研究在体外培养的牛子宫内膜细胞(bECs)培养液中,分别添加孕酮、bIFN-τ、孕酮和bIFN-τ混合物培养24h后,通过荧光定量PCR技术,检测bECs上Collagen、Laminin、Fibronectin、THBS和Tenascin等ECM基因和ECM配基基因Syndecan、CD44、CD47和RHAMM的表达。结果表明:在体外培养的牛子宫内膜细胞上,bIFN-τ显著地诱导了Tenascin、Collagen、RHAMM和Laminin基因的表达,孕酮显著地诱导了CD44、Fibronectin、RHAMM和Laminin基因的表达,但当bIFN-τ和孕酮联合作用时,CD44、THBS基因的转录水平受到抑制,Tenascin、Fibonectin、Colla-gen基因的转录水平恢复到对照组转录水平。研究结果显示,在胚胎植入过程中,IFN-τ和孕酮可能对牛子宫内膜上ECM及其配基基因表达具有调控作用。     

苦参素对肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子-β1的调节作用

[目的]观察苦参素(OMT)对硫代乙酰胺(TAA)所致大鼠肝纤维化的改善作用及对肝纤维化大鼠肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)含量的影响。[方法]试验分为阴性对照组、模型组和OMT高、中、低剂量给药组以及水飞蓟素阳性对照组。除阴性对照组外,其他各组采用硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型。采用OMT和水飞蓟素分别对OMT高、中、低剂量给药组和水飞蓟素阳性对照组大鼠灌胃抑制大鼠肝纤维化,同时对模型组和阴性对照组大鼠给予生理盐水灌胃。灌胃结束后采血并取肝组织,检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽(GSH)的含量以及大鼠肝组织中TGF-β1含量。[结果]与阴性对照组相比,模型组大鼠血清中ALT、AST含量极显著(P<0.01)升高,GSH水平极显著(P<0.01)降低;肝组织中TGF-β1含量极显著(P<0.01)升高。与模型组相比,OMT高、中、低剂量给药组和水飞蓟素阳性对照组大鼠血清中ALT、AST含量显著(P<0.05)降低,OMT高剂量和中剂量给药组GSH水平极显著(P<0.01)升高,而OMT低剂量给药组GSH水平显著(P<0.05)升高;同时,OMT高、中、低剂量给药组和水飞蓟素阳性对照组大鼠肝组织中TGF-β1含量显著(P<0.05)降低。[结论]苦参素在肝纤维化大鼠体内能明显下调其肝脏组织中TGF-β1的基因表达,这一结果提示OMT治疗肝纤维化的作用机制之一可能是苦参素对肝组织中TGF-β1表达的抑制。     

转化生长因子-β在母胎界面的表达调节作用

转化生长因子-β（TGF-β）是一种多功能细胞因子,在细胞生长、分化、免疫调节和细胞外基质合成以及血管生成等方面起重要作用。TGF-β由多种实质细胞分泌产生,其中包括外周单核细胞、T淋巴细胞和树突状细胞等。TGF-β可影响生殖活动的各个环节,包括性腺轴的调控、子宫内膜周期性变化、胚胎着床和发育。同时,TGF-β在免疫耐受中是主要的调节因子,TGF-β通过自分泌或旁分泌的方式介导母胎界面的免疫调节过程,以防止发生胎儿的免疫排斥反应。文章综述了TGF-β家族在妊娠过程中免疫调节作用的最新研究进展。     

LPS刺激对断奶仔猪肝脏形态、功能及转化生长因子β1/Smads通路的影响

本试验旨在研究脂多糖（LPS）刺激后对断奶仔猪肝脏形态、功能和转化生长因子β1(TGF-β1)以及Smads通路的影响。选取18头21日龄、体重（7.09±0.9）kg杜×长×大断奶仔猪,随机分成3个处理,每个处理6头猪。预饲14 d后,腹膜注射100μg/kg BW的LPS,分别在注射前（0 h）、注射4 h和24 h后屠宰仔猪,取血浆和肝脏样品待测。结果表明：HE切片显示,与对照组（0 h）相比,LPS刺激4 h后肝细胞损伤严重,有明显炎性细胞浸润,出现大量坏死且细胞核溶解固缩。LPS刺激24 h后肝细胞核溶解固缩,较刺激4 h后损伤有所缓解。与对照组（0 h）相比,LPS刺激4 h后血浆中谷草转氨酶（AST）、谷草转氨酶和谷丙转氨酶比值（AST/ALT）、碱性磷酸酶（AKP）活性升高（P<0.001）,LPS刺激24 h后血浆中AST、AST/ALT活性升高（P<0.001）,AKP活性降低（P<0.05）,ALT活性均无显著变化。肝脏中TGF-β1基因表达在刺激4 h和24 h后均升高（P<0.05）;TGF-βR2在LPS刺激4 h后下降（P<0...     

精子膜抗原SA-30免疫对小鼠子宫内肥大细胞的影响

用牛精子膜抗原SA 30免疫雌性昆明系小鼠 ,取小鼠子宫做常规石蜡切片 ,甲苯胺蓝染色检测子宫内的肥大细胞。结果表明 ,所有肥大细胞均位于子宫肌层 ,间情期时 ,SA 30免疫组和对照组子宫内肥大细胞在数量上无明显差别 (P >0 0 5 ) ;而妊娠第 3天的小鼠子宫中 ,SA 30免疫后肥大细胞显著增多 (P <0 0 5 )。提示SA 30免疫可能诱导妊娠早期小鼠子宫内的细胞免疫反应 ,从而导致生育力的下降。     

交感神经对妊娠早期大鼠子宫内DKK-1和Wnt-1表达的影响

为研究交感神经对妊娠早期子宫内DKK-1和Wnt-1的调控作用,选取180~200日龄健康的性成熟Wistar雌性大鼠,随机分为对照组和处理组,处理组采用静脉注射6-OHDA损毁交感神经,用免疫组化法和qRT-PCR法,观察和分析交感神经对妊娠早期大鼠子宫内膜的DKK-1和Wnt-1蛋白及mRNA相对表达量的影响。结果显示:6-OHDA损毁交感神经后,对卵巢排卵数无显著性影响,但子宫囊胚数量显著下降、囊胚发育延迟,导致子宫腔上皮和腺上皮细胞自分泌DKK-1和Wnt-1紊乱,呈现与正常状态相反的变化趋势。结果表明:在着床窗口期,交感神经通过影响DKK-1对Wnt-1信号分子的调控作用而影响囊胚着床、发育。     

Tgfβ信号通路介导孕酮注射导致的初生仔鼠子宫腺体缺失

为探索小鼠子宫内膜上皮细胞中的Tgfβ信号通路是否能够介导孕酮(P_4)注射导致的新生仔鼠子宫腺体缺失,本研究检测了P_4处理的仔鼠子宫上皮细胞中Tgfβ信号通路受体基因Tgfbr1、Tgfbr2、Tgfbr3及靶基因的mRNA表达水平。结果显示,P_4处理的仔鼠子宫内膜上皮细胞中Tgfbr2和Tgfbr3及靶基因Ctgf和Mmp9的表达水平明显上升,说明Tgfβ信号通路在仔鼠子宫上皮中被P_4激活。此外,在注射P_4的同时给仔鼠注射Tgfβ受体抑制剂,结果发现该抑制剂可以部分挽救因P_4注射导致的小鼠子宫腺体缺失。这些结果说明Tgfβ信号通路部分介导了P_4注射导致的初生仔鼠子宫腺体缺失。