人血清白蛋白基因的克隆及序列分析

根据Genebank(登陆号V00495)中人血清白蛋白HSA的cDNA序列,设计扩增引物。采用RTPCR自人胎盘中扩增出HSA基因的全长cDNA。产物纯化后连至PMD18T载体,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆菌,酶切鉴定并进行序列测定。结果表明,该试验成功地克隆了HSA基因的1995bp全长cDNA,与Genebank中参照序列同源性为99%。     

转人血清白蛋白基因猪的整合与表达

含有猪血清白蛋白测翼序列的微小人血清白蛋白基因,用显微注射法导入猪的基因组中,生产出转人血清白蛋白基因猪,经PCR和Southern杂交检测,有4头活仔整合有人血清白蛋白基因,其中的3头不同程度地表达了人血清白蛋白。     

猪血清转铁蛋白类型的测定

转铁蛋白(Transferrin)是血浆中能够运载铁的β球蛋白。已发现家畜血清转铁蛋白都有遗传变异的类型。国外许多调查研究指出,猪、牛、绵羊在转铁蛋白(Tf)型与生殖性能之间有些关系。为了探索我国猪、牛、羊中是否也存在这种关系,结合猪种选育,对江西赣州白猪的转铁蛋白类型进行初步的测定。采取赣州白猪217头的血清,进行淀粉凝胶电泳,其中180头猪的血清转铁蛋白在染色的凝胶上显示多样的带谱。Tf型的测定以H、Miohael(1969)所做的经Fe~(59)放射自显影确定的图谱为依据,按电泳相对迁移率计算区带分布位置,初步将这些血清的转铁蛋白区分为AA、BB、CC、AB、AC、BC、六个型。从这六个Tf型中可以看出赣州白猪中Tf~B基因最多,Tf~A基因次之,Tf~C基因最少。我国国内猪的Tf型尚未见报导。已知赣州白猪是约克夏和赣州本地猪的杂交种。Kristjansson(1964)和Abe等(1972)的报导中表明约克夏猪的转铁蛋白只有Tf~A和Tf~B基因。Abe还报导我台湾本地猪中TF~B基因最多,Tf~C基因较常见,Tf~A基因很稀少。这些情况若与本工作测得的结果比较,则赣州白猪Tf~B基因最多,Tf~A基因次之、Tf~C基因最少,是与血清蛋白质型遗传的规律相符的。     

异种器官移植转基因猪检测系统的建立

以PCR、免疫荧光、细胞毒试验在DNA、表达、功能水平对转hDAF基因猪进行了检测。结果表明：转基因猪的整合率为19．35％（18／93）；在14头转基因阳性猪中，有7头动脉肌肉层表达了外源hDAF基因，6头猪的外源基因表达产物可以抑制猪淋巴细胞的裂解。     

三种DNA片段在小鼠体内共整合效率的研究

以小鼠为研究对象,把人的三种DNA片断-血清白蛋白基因(HSA)、DNA修复基因hFEN1和非编码大片断CIT987SK-384D8用显微注射法分批导入小鼠受精卵雄原核,移植到假孕母鼠体内,产生的65只F1代仔鼠中,经PCR和Southern blotting检测,12只仔鼠体内含有导入的DNA段,其中HSA和CIT987SK-384D8的共整合率是1.298%,与hFEN1的共整合率是0.552%,显微注射法的总整合率是3.84%,总有效率是1.92%.从而为转基因动物的研制提供了科学的探索的一种有效的途径.     

PCR—RFLPs检测法在无氟烷隐性基因皮特兰猪建群中的应用

采4用PCR－RFLPs法对上海市农业科学院畜牧兽医研究所试验猪场的皮特兰猪进行氟烷基因检测，结果表明，在40头皮特兰猪中，检测到具有NN氟烷基因型的猪1头，具有Nn基因型的9头，其余的为nn型，试验结果提示，采用此法对皮特兰猪的氟烷基因进行检测不但可行，而且还可依据此结果进行无氟烷隐性基因皮特兰猪群的选育。     

小型猪发情周期和妊娠早期外周血清孕酮含量测定

本试验测定了５头贵州香猪和５头版纳微型猪发情周期和妊娠早期外周血清的孕酮含量。这两个品种发情周期血清孕酮含量有相似的变化，峰值均出现在发情周期的９－１２天，贵州香猪为２６．００ｎｇ／ｍｌ，版纳微型猪为２４．３０ｎｇ／ｍｌ。在妊娠早期的变化也大致相同。     

锌(Ⅱ)-邻菲啰啉络合物线扫极谱法测定血清白蛋白的研究

利用线扫极谱法研究了锌(Ⅱ)-邻菲啰啉(Phen)二元络合物与人血清白蛋白(HSA)的相互作用并建立了以Zn(Ⅱ)-Phen二元配合物为电化学探针测定HSA的分析测试方法。在最佳条件下,还原峰电流的降低值与人血清白蛋白的浓度2.0~20.0mg/L范围内呈线性关系,线性回归方程为ΔIp″(nA)=140.3C(mg/L)+1981.06(ni=16,γ=0.996),检测限为1.301mg/L(3σ)。应用该法测定了模拟样品和健康人血清样品中蛋白质的含量,结果令人满意。     

转hFat-1基因猪外源基因整合分析及拷贝数测定

对转人源化Fat-1基因猪的15头传代仔猪进行PCR检测,发现有7头阳性猪,其断奶后成活5头仔猪。对这5头仔猪进行Southern印迹杂交试验,确认3头仔猪整合有hFat-1基因。采用荧光实时定量PCR法测定原代转hFat-1基因公猪及3头阳性仔猪外源基因的拷贝数,分别是2、1、1、2个拷贝。转hFat-1基因猪能够将外源基因遗传到下代仔猪,但外源基因具有遗传不稳定的趋向。     

转hFat-1基因猪外源基因整合分析及拷贝数测定

对转人源化Fat-1基因猪的15头传代仔猪进行PCR检测,发现有7头阳性猪,其断奶后成活5头仔猪。对这5头仔猪进行Southern印迹杂交试验,确认3头仔猪整合有hFat-1基因。采用荧光实时定量PCR法测定原代转hFat-1基因公猪及3头阳性仔猪外源基因的拷贝数,分别是2、1、1、2个拷贝。转hFat-1基因猪能够将外源基因遗传到下代仔猪,但外源基因具有遗传不稳定的趋向。