鸭瘟灭活疫苗种毒筛选及生产用种毒种子批的建立

本研究通过鸭胚(DE)传代,建立了鸭瘟病毒(DPV)AV1221株的鸭胚适应毒.通过与其他2株DPV(AV1222株鸡胚毒和AV18株鸭胚毒)免疫原性、毒力等特性的比较,选择AV1221株DE2代鸭胚毒作为制苗用种毒,NJ株D5代鸭肝组织毒作为检验用强毒.使用鸭胚对AV1221株DE2毒进行了连续6次传代.对DE2代～DE7代冻干种毒的鉴定结果表明:未发现细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染;病毒含量为每0.2 mL含104.38～105.25ELD50;能够被DPV抗血清中和;制成灭活疫苗,免疫成鸭后均能够产生完全保护.依据试验结果建立了能够满足疫苗生产所需的生产用种毒的种子批.     

鸡新城疫病毒强毒株的分离及生物学特性鉴定

用SPF鸡胚及鸡胚成纤维细胞，从病死鸡的脑组织中分离到一株病毒。此病毒能凝集鸡的红细胞，而且这种凝集可以被特异性抗血清所抑制。通过对分离株进行回归实验，MDT、ICPI、IVPI及其他生物学特性实验、空斑实验、中和试验、电镜观察等，证实该分离株为新城疫病毒强毒株。     

禽流感H9亚型病毒WD株毒种的纯化研究

采用鸡胚终点稀释法并结合ND抗血清中和法对禽流感H9亚型病毒WD株毒种进行了纯化。将纯化的WD株毒种在SPF鸡胚连续传12代，对各代次毒种进行了毒价测定，选择一定代次的毒种进行了免疫原性试验及外源病毒检验。结果表明，WD株在鸡胚中连续传12代，其HA价稳定在1：512—1：1024，毒价在10^7.0-10^8.3 EID50／0．1mL；不同代次毒种不含外源病毒，免疫原性均符合要求。由此可见，毒种的纯化方法是有效的，将WD株毒种限制在12代内是可行的，并建立了该毒种的种子批。     

犬Ⅱ型腺病毒的分离鉴定

在做犬腺病毒分子流行病学调查的过程中，从送检的犬粪便中分离出多株犬腺病毒，并对其中１株进行了系统鉴定。经形态学、理化学、血清学交叉中和试验、动物感染试验与分子生物学鉴定，证明为１株犬传染性喉气管炎病毒的强毒，即犬Ⅱ型腺病毒。     

犬传染性喉气管炎病毒南昌株的分离鉴定

在与解放军军需大学合作进行犬腺病毒分子流行病学调查过程中，从南昌送检的犬粪便中分离出多株犬腺病毒，并对其中1株进行了系统鉴定，经形态学、理化学、血清学交叉中和试验、动物感染试验与分子生物学鉴定，证明为一株犬传染性喉气管炎病毒（犬2型腺病毒）的强毒。     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗.选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒.攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化.采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高.2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护.以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株.病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤.本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护.     

鸡传染性支气管炎嗜肾性W_(93)株活疫苗研究 Ⅰ.鸡传染性支气管炎嗜肾性病毒X株分离及鉴定

本研究的病毒分离物,是来源于天津地区某鸡场暴发的28日龄病鸡。此毒株对SPF雏鸡几乎100%感染发病,死亡率达30%～90%,此毒有很强的亲肾组织性,引起肾病变肿大、苍白、斑驳状,肾小管和输尿管有尿酸盐沉积。对SPF鸡胚感染率98%～100%,可致鸡胚侏儒化、卷曲等特征性病变。在10日龄SPF鸡胚连传10代后,其毒价可达106.5EID50/0.1ml。鸡胚毒不凝集鸡红细胞,可干扰NDV血凝素的生成,而其本身又可被AEV所干扰,能加速气管纤毛止动效应,电镜观察呈圆形或多样性,边缘不整,表面有纤突的病毒粒子,直径约100mm。病毒中和试验进行血清学鉴定,此毒对Gray株、Holte株和澳大利亚T株的中和保护率均低于50%,而对M41株则高于50%,此毒株具备冠状病毒的主要特征,定名为“鸡传染性支气管炎嗜肾性病毒X株”(NephropathogenicInfectiousBronchitisVirusStrainX)——NIBVX。     

血清4型禽腺病毒强毒株GY株的分离鉴定和致病性研究

从山东某疑似感染禽腺病毒的发病鸡群中采集病料并分离到一株禽腺病毒,克隆纯化后进行PCR检测和序列分析,鉴定该毒株为血清4型禽腺病毒,命名为GY株。用LMH细胞繁殖的GY株病毒滴度可以达到107.5 TCID₅₀/0.1mL,并建立了纯净稳定的种子批。动物致病性试验结果显示,攻毒鸡只8/10死亡,剖检均出现心包积液,肝脏肿大、出血或坏死,表明该毒株为强毒株。就攻毒途径、攻毒剂量等方面研究发现,GY株经胸部肌肉注射后发病率和发病时间相对颈部皮下注射途径更有优势,确定攻毒途径为肌肉注射;通过比较不同剂量(5×10^3.0~5×10^6.0 TCID50)GY株病毒攻击SPF鸡的致病性,将攻毒剂量定为5×10^5.0 TCID₅₀。研究表明,GY株可作为禽腺病毒4型攻毒用强毒株。     

一株鸡传染性喉气管炎病毒流行毒株的鉴定与致病性分析

为评价一株鸡传染性喉气管炎病毒流行毒株在疫苗效力评价中的应用表现，对制备的一株强毒株进行了系统鉴定，包括性状、纯净性、真空度、病毒含量、特异性等，尤其重点关注不同病毒含量对不同日龄鸡只的致病力情况。结果显示，本研究制备的鸡传染性喉气管炎病毒冻干物性状良好，无细菌、支原体和外源病毒污染，可被特异性血清完全中和，病毒含量稳定在10^5.1 EID₅₀/0.2mL。该毒株致病力表现稳定，100 EID₅₀可使80%鸡只发病或死亡，可作为一株良好的检验用强毒，为后续疫苗评价奠定基础。     

新型鸭肝炎病毒的分离鉴定

对从广东地区流行鸭肝炎病例中分离到的1株病毒(命名为"GD株")进行了鸭胚(DE)传代培养.DE2～DE6代鸭胚毒的ELD50在10-5.17/0.2 mL～10-6.38/0.2 mL之间.DE6代毒回归雏鸭后可以产生与1型鸭肝炎病毒(DHV)相同的临床症状和解剖病变.鸭肝组织毒对4日龄、8日龄和16日龄雏鸭的LD50分别为10-6.5/0.5 mL、10-5.38/0.5 mL和10-4.83/0.5 mL.病毒对氯仿、乙醚和胰酶不敏感,能够耐受pH3.0酸处理,62℃30 min不能被完全灭活.病毒核酸类型鉴定为RNA病毒.生物学和理化学特性鉴定结果表明,GD株为强毒DHV.使用标准1型DHV阳性血清进行的交叉中和试验和交叉被动保护试验表明,GD株病毒在抗原性上与1型DHV无关.对DHv抗原相关的VP1基因序列分析和同源性比较表明,GD株与DHV-1的VP1核苷酸序列同源性为69.82%,氨基酸序列同源性为71.77%.GD株属于一种在我国流行的新型DHV强毒(暂命名为"CN-DHV").