光对海带雌、雄配子体 lhcf5 和 lhcf6 基因相对转录量的影响

利用实时荧光定量PCR(Q-RT-PCR)方法分析了在不同光照强度、光质及有利于配子产生的条件下,lhcf5和lhc6基因在海带(Laminaria japonica)雌、雄配子体中转录量的变化.不同光照强度条件下(光源为白光),lhcf5和lhcf6基因在黑暗中接近不转录;雌配子体在光照强度40 μmol·m-2·s-1时转录量最高,而雄配子体的最岛转录量出现在80μmol·m-2·s-1的光照强度处;高于此光照强度,2个基因的转录量都会随光照强度增加而降低.相对于同强度的白光来说,红光照射无论是短时间(3 d)还是长时间(7 d),都会促进2个基因的相对转录水平;蓝光对雌配子体中2个基因转录的促进作用不明显,而对它们在雄配子体中的转录有一定的促进作用.将海带配子体从营养生长转至有利于配子发生的条件下,雌、雄配子体lhcf5和lhcf6基因在第1天的转录最都明显增加;雌配子体在第4天以及第12天(lhcf6)或第14大(ljcf5)均显著增加,第6天及第10天接近不转录;雄配子体在第8天及第14天增加,第10天也近似不转录;发育阶段其他时间内的转录量都低于营养生长期的.结果表明,海带配子体lhcf5和lhcf6的转录受光诱导,其中红光的促进作用最明显;其转录可能因有利于配子体细胞叶绿体结构的完善及物质与能量的积累而利于细胞分裂与营养生长.     

[06]光对海带雌、雄配子体 lhcf5 和 lhcf6 基因相对转录量的影响

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牙鲆基因组 (CAG)n微卫星 DNA 特征分析

通过磁珠富集法筛选牙鲆(Paralichthys olivaceus)的微卫星分子标记,采用限制性内切酶Sau 3A Ⅰ对牙鲆完整基因组DNA进行酶切;通过蔗糖溶液梯度离心,收集400～900 bp大小的片段,连接Brown接头,构建牙鲆基因组文库.用生物素标记的微卫星探针(CAG)15,对基因组文库进行杂交,利用磁珠富集含有微卫星的DNA单链序列,并对其进行PCR扩增;将扩增产物连接到pMD18-T载体后转入感受态大肠杆菌DH5α中,得到微卫星序列文库.利用大量质粒检测法进行二次筛选,成功地从牙鲆基因组中分离出含有CAG重复的微卫星序列,测序其中的3000个单菌落,获得2805个(占93.5%)含有微卫星序列的克隆,其中含有微卫星座位3120个,完美型1808个,占57.97%;非完美型226个,占7.25%;混合型1085个,占34.78%.从中选出186个微卫星序列设计120对引物并合成,经过筛选,74对引物可扩增清晰条带,其中68对呈多态性.     

团头鲂 HSP70 cDNA 的克隆、序列分析以及热应激对其 mRNA 表达的影响

采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆出团头鲂(Megalobrama amblycephala)肝脏热休克蛋白70(HSP70)基因全长cDNA序列,共2 224 bp,包括135 bp5'非翻译区、1 932 bp阅读框以及157 bp 3'非翻泽区[不包括Poly(A)].阅读框共编码643个氨基酸,分子量计算值为70.53 kD,理论等电点为5.25.该HSP70基因在翻译区不含内含子,符合诱导型HSP70的特征.团头鲂HSP70氨基酸序列中含有HSP70家族的3个签名序列以及细胞质特异性调控基序EEVD等.同源性分析表明,团头鲂HSP70氨基酸序列与斑马鱼等脊椎动物的相似性高达84.0%以上,与无脊椎动物果蝇的相似性也高达73.4%.生物信息学分析显示,团头鲂HSPTO基因所编码的蛋白质以亲水性区域为主,具有丰富的B细胞抗原位点,无信号肽,无跨膜区域,为非分泌型蛋白;同时还含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点、N-肉豆蔻酰化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号转导与调控中发挥重要作用.该蛋白含有2个部分重叠的双向核定位序列,二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,空间结构包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域.应用实时定量PCR研究高温(34℃)应激对团头鲂HSP70 mRNA表达的影响.结果表明,在热应激过程巾肝脏HSP70 mRNA水平呈先升高后下降的变化趋势,说明该基因的表达受热应激调控,本实验克隆的序列为诱导型HSP70 cDNA.     

罗非鱼 MC4R 基因克隆及与其生长相关的 SNPs 位点

黑素皮质素受体-4(Melanocortin receptor-4,MC4R)是5种已发现的黑素皮质素受体家族成员之一,属于跨膜G-蛋白耦联受体超级家族,对于调节动物的采食量、体质量及能最稳态有着重要的作用.本研究采用基因组步移技术获得了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)MC4R基因组DNA序列.该基因全长2547 hp,其中5'侧翼序列长为1481 bp,3'侧翼序列长为82 bp,编码区序列长为984 bp,只有1个外显子.采用PCR产物直接测序法、PCR-RFL和CRS-PCR技术对尼罗罗非鱼MC4R基因启动子和外显子区域进行了SNPs位点的检测和分犁,结果共检测到5个SNPs位点(-G1000C、-T974A、C276T、C561T和C708T),其中外显子上的3个SNPs位点均为同义突变.利用一般线性模型分析5个SNPs位点与尼罗罗非鱼生长性状的关系,结果表明,5个SNPs位点不同基因型之间体质量均值差异最大值分别为9.5%、23.2%、14.4%、18.6%和13.5%,没有达到显著水平(P＞0.05).将5个SNPs位点不同基因型组合成7种双倍型(去掉频率小于3%的组合),关联分析表明,在体质量和体长这2个主要生长性状方面,双倍型D4与D1、D3、D6存在显著性差异(P＜0.05),双倍型D2与D3、D6也存在显著性差异(P＜0.05).因而可以考虑将MC4R基因作为影响罗非鱼体质量等生长性状的候选基因,应用于罗非鱼分子标记辅助育种.     

[18]中国明对虾“黄海 1 号”血细胞和肌肉 cDNA 文库的构建

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气相色谱质谱法同时测定水产品中 8 种雌激素类化合物

应用气相色谱-质谱建立了同时检测水产品中辛酚、壬酚、双酚A、己烯雌酚、雌酮、17肛雌二醇、17a-乙炔雌二醇和雌三醇8种雌激素的方法.样品经乙酸乙酯提取,HLB小柱净化,经七氟丁酸酐衍生后用电子轰击电离源在SIM模式下进行检测.结果表明,8种激素化合物在DB.1.MS柱上能得到良好的分离,色谱峰出峰尖锐,没有杂峰干扰.本方法检出限为0.3～1.O μg/kg.在空白样品中添加水平为1.0～5.0 μg/kg范围内,平均回收率为81%～108%,相对标准偏差(RSD)为6.7%～11.7%.     

02黄颡鱼 LRH-1 基因的分离和表达

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[02]罗非鱼 MC4R 基因克隆及与其生长相关的 SNPs 位点

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Growth performance of hybrid striped bass (Morone chrysops × M. saxatilis) fed with commercial pike perch and trout diets

Two commercial trout diets (Oncorhynchus mykiss) and one commercial pike perch diet (Sander lucioperca) were fed to hybrid striped bass (Morone chrysops × M. saxatilis) (mean initial weight ± SD of 60.7 g ± 12.1; mean initial length SD of 17.2 cm ± 1.1) for 69 days at rations of approximately 1% average body weight. While final body weight (FBW), final length (FBL) and condition factor (Cf) were not significantly influenced by diets, specific growth rate (SGR) in hybrid striped bass fed with the pike perch diet (1.15) was significantly higher than those fed with either of the two trout diets (1.04 and 1.07). The feed conversion ratio (FCR) in hybrid striped bass fed with the pike perch diet (1.0) was significantly lower than the FCR in hybrid striped bass fed with either of the two trout diets (1.1 and 1.2). When hybrid striped bass (mean initial body weight: 65.7 ± 4.5 and 127.7 ± 2.9 g) were fed with the pike perch diet twice per day until satiation for 52 days, the SGR was 1.7 and 1.15% d^?1 in fishes with an average body weight of 116 and 183 g, respectively. Present results demonstrate that growth performance in hybrid striped bass can be improved when fishes are fed with commercial pike perch diets rather than using commercial trout diets as is the current practice.

     

[01]牙鲆基因组 (CAG)n微卫星 DNA 特征分析

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04斜带石斑鱼干扰素调节因子 1 基因的克隆及其原核表达

对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的干扰素调节因子1(Interferon regulatory factor 1,IRF-1)基因进行了克隆、测序及原核表达.以PBS做对照,利用polvI:C刺激斜带石斑鱼,然后取其肝脏、头肾、脾脏提取总RNA,随机引物反转录获得cDNA.根据相近物种IRF-1的保守序列设计引物,通过PCR得到了保守片段,通过RACE-PCR获得了斜带石斑鱼IRF-1基因的全长cDNA.基因全长为1 730 hp,完整开放阅读框(ORF)906 bp,编码302个氨基酸,5'非编码区153 bp,3'非编码区671 bp.将斜带石斑鱼ORF与其他物种进行比对发现,与海鳜(Siniperca chuatsi)同源性最高,为85%.将根据斜带石斑鱼IRF-1 ORF推测的氨基酸序列与其他物种进行比对,发现斜带石斑鱼与海鳜同源性为90%,与金头鲷(Sparus aurat)为88%,与乌鳢(Channa argus)为86%,与大菱鲆(Scophthalmus maximus)为82%.利用ORF序列,构建原核重组表达质粒.重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白成功表达,表达蛋白的分子量约55 kD.诱导温度为30℃时,重组蛋白以可溶性蛋白和包涵体2种形式存在.     

插核手术对三角帆蚌血淋巴中 3 种免疫防御因子的影响

对三角帆蚌(Hyriopsls cumingii Lea)进行内脏团插核手术,并对术后机体免疫相关因子基因alpha-2巨球蛋白(α2M)、酶酸性磷酸酶(ACP)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化情况进行研究,旨在为三角帆蚌内脏团育珠实践提供理论依据.实验选取100只健康三角帆蚌分为2组(各50只,每组各设5个重复,每重复各10只蚌),一组在蚌体内脏团进行插核手术(实验组),一组未经处理(对照组),分别饲养于相同条件恒温(24℃)淡水缸内.两组分别于插核后1天、2天、3天、5天及10天采集淋巴血,通过RT-PCR及酶活测定法研究α2M基因表达和ACP、SOD在术后活性的变化.结果发现,α2M基因在手术后表达量增加,在插核后第3天和第5天与对照组差异显著(P＜0.05);实验组血清和血细胞中ACP活性均显著高于对照组;实验组血清中SOD活性在第3天、5天、10天高于对照组(P＜0.05);实验组血细胞中SOD的活性低于对照组.本研究表明,内脏团插核手术后三角帆蚌机体的免疫防御调节增强,血液中免疫相关基因α2M的表达水平和免疫相关酶ACP和SOD活性均有明显变化.     

水环境 ( Mg2++Ca2+ )/(Na++K+ ) 比值对凡纳滨对虾幼虾生长和能量收支的影响

为探索内陆天然咸水的离子组成调控方法,采用人工海水,在盐度30.2、pH 8.2的条件下,研究了水环境(Mg2+Ca2+)/(Na++K+)比值对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)幼虾生长和能量收支的影响.实验持续45 d,结果显示,水环境(Mg2++Ca2+),(Na++K+)比值对凡纳滨对虾的生长、蜕皮、摄食、食物转化效率以及能量收支影响显著(P＜0.05).凡纳滨对虾对低(Mg2++Ca2+)/(Na++K+)比值的水环境耐受力很弱,而对较高(Mg2++Ca2+)/(Na++K+)比值水环境的耐受力略强.本研究表明,在以对虾养殖为目的而进行内陆天然咸水的离子组成的调节时,必须兼顾多种离子的浓度和比值,这样才能提高养殖的成功率.     

野生哲罗鱼种质资源遗传多样性的 AFLP 分析

目前哲罗鱼(Hucho taimen)处于濒危状态,野生样品采集较困难,因此对其种群遗传结构了解甚少.本研究应用7对AFLP引物对5个野生哲罗鱼群体(104个体)进行了扩增和遗传结构分析.结果显示7对引物共扩增出193个多态位点,多态位点比率为70.18%;多态性位点数(AP)、多态性位点比率(P)、观测等位基因(Na)、有效等位基因(Nez、Nei's基因多样性指数(H)、Shannon's信息指数(I)和遗传距离(D)揭示的规律一致,在5个群体中上述指标从大到小依次均为虎头江段2002、抓吉江段、海青江段、虎头江段2006、呼玛河,H在0.148～0.195 3之间,I在0.221 5～0.291 3之间,5个群体的遗传多样性均偏低;且遗传距离(D)、遗传相似度(S)、遗传分化度(Gst)、基因流(Nm)和聚类结果显示5个群体间的基因交流少,遗传分化程度均很大,并在一定程度上存在近亲交配的现象.以上结果表明,哲罗鱼资源量的减少已经影响了其种群遗传多样性,保护野生哲罗鱼资源已迫在眉睫,应采取及时有效的措施对野生哲罗鱼资源进行保护以期恢复哲罗鱼资源.     

高温下不同盐度对刺参幼参和 1 龄参呼吸排泄的影响

在实验室中模拟研究了高温(25.3～26.5℃)条件下,不同盐度对刺参(Apostichopus japonicus)幼参和1龄刺参呼吸排泄的影响.根据对盐度的耐受性不同,分别将体质量为(0.03±0.002)g的幼参暴露于盐度梯度为20、23、26、30、35的水体中,体质量为(22.73±9.46)g的1龄刺参暴露于盐度梯度为16、20、25、30、35的水体中进行盐度变化对其呼吸排泄的影响实验,测定其耗氧率和排氨率.结果表明,盐度变化对刺参的呼吸排泄影响显著(P＜0.05).幼参在23～30盐度、1龄参20～30盐度范围内,耗氧率[Rwr,mg/(g·h)]和排氨率[Rwe,μmol/(g·h)]随着盐度的升高而降低,当盐度升高至35时,两者都明显升高(以盐度30为对照),当盐度降至20(幼参)、16(1龄参)时,刺参耗氧率和排氨率均降低.盐度对刺参O:N比值的影响不显著(P＞0.05),各盐度条件下,2种规格刺参的O:N比值平均在14左右,表明本实验条件下该刺参代谢所需要的能量主要南脂肪和碳水化合物提供.从呼吸和排泄的角度来看,在本实验高温(25.3～26.5℃)条件下,幼参在23～35盐度、1龄参20～35盐度范围内具有较好的渗透压调节能力,而幼参在20盐度、1龄参在16盐度下代谢功能较弱.     

[12]水环境 ( Mg2++Ca2+ )/(Na++K+ ) 比值对凡纳滨对虾幼虾生长和能量收支的影响

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坛紫菜不同品系亲缘关系的 SSR 标记分析

利用SSR标记对9个坛紫菜(Porphyra haitanensis)品系(2个野生品系,2个优良品系,2个杂交品系,3个色素突变品系)的丝状体进行了亲缘关系分析.结果表明:从52对微卫星引物巾筛选出7对引物,它们的反应稳定并且其PCR产物具有多态性.9个品系的平均有效等位基因数(Ne)为1.716 6,平均期望杂合度(He)为0.407 4,平均多态信息含量(PIC)为0.330 8,Shannon多样性指数(I)为0.623 9.用Nei氏法计算出这9个品系的遗传距离和遗传相似性系数,再用UPMGA和Neighbor-joining 2种方法所获得的系统学关系图,其结果均基本上反映了各品系间的亲缘关系.在引物PC-40界定的遗传座位上,2个优良品系申福1号和优质6号(以申福1号为母本选育出来的品系)的丝状体和叶状体均出现了区别于其他品系的等位基因,显示对这2个优良品系进行SSR特异性标记是可能的.