土壤放线菌简捷分离方法研究

研究了土壤放线菌的快捷分离方法。结果表明,用含有抑制剂K2Cr2O7使用量为100ug/ml的改良高氏一号及精氨酸-甘油培养基,采用划线分离法可用于大量土壤样品的快速分离,既方便快速准确又能获得较多数量的各种类型的放线菌菌株。     

土壤放线菌分离方法研究

研究了土壤放线菌的分离方法,结果表明:培养基中加入150mg/L重铬酸钾,既有利于放线菌的生长,又能抑制真菌和细菌的生长;土样在28℃或室温风干10～20d后,制成10%土壤悬浮液,40～50℃、pH7条件下,加6%酵母膏(或6%蛋白胨)和0.05%SD(S5mmol/L磷酸缓冲液),振荡10～20min,灭菌水稀释成1%后,与含250mg/L重铬酸钾的高氏1号琼脂培养基制成平板,最有利于放线菌的分离。     

红树林海洋淤泥中放线菌的分离与鉴定

为了解广西北海红树林海洋淤泥中的放线菌资源,采用海水配制高氏培养基分离红树林海洋淤泥中的放线菌样品,从中筛选、分离、提取lO株典型放线菌菌株总DNA,用放线菌通用引物对16Sr DNA进行PCR扩增,对获得的扩增结果进行DNA序列测定和对比鉴定.结果表明,10株典型放线菌菌株为2种菌属,其中有8株为链霉菌属(80%),为常见放线菌;有2株为拟诺卡氏菌属(20%),为稀有放线菌.表明,广西北海红树林海洋淤泥蕴含着种类丰富的放线菌.     

新疆硝尔库勒盐湖放线菌分离方法的初步研究

为了研究新疆硝尔库勒盐湖中的放线菌多样性,以微生物抗高渗透压的生理机制为指导,结合盐湖高盐、寡营养的特点,设计了含有在嗜盐微生物细胞中起渗透调节作用的多种碳源和氮源的分离培养基,以TP培养基、GW1培养基和F6培养基为对照,对新疆硝尔库勒湖沉积物样品进行分离。结果表明,海藻糖-肌酸培养基(B3)分离效果最好,能分离到10个属16个不同种的放线菌;海藻糖-天冬氨酸培养基(B1)和海藻糖-谷氨酸培养基(B2)分离效果次之,均能分离到5个属7个不同种的放线菌,并有2个潜在的放线菌新物种被发现(菌株编号为41376、41293)。这说明以渗透调节物作为碳源和氮源是高盐环境放线菌分离比较理想的选择,为以后高盐环境微生物的分离培养提供了理论指导。     

抑制剂对土壤放线菌分离的影响

研究了青霉素、萘啶酸、制霉菌素、重铬酸钾和氟哌酸5种抑制剂对分离土壤放线菌的影响,其中以重铬酸钾的分离效果最好,其次为制霉菌素;通过正交试验研究了重铬酸钾、萘啶酸、制霉菌素3因子组合对放线菌分离的影响:最后用STATISTICA6.0进行分析.正交试验结果分析得到的最优抑制剂组合为重铬酸钾0.6mg·L-1,制霉菌素10mg·L-1,萘啶酸10mg·L-1,其中制霉菌素在3个因子中起的作用最大.     

青海高寒地区油菜地土壤中放线菌组成及拮抗性放线菌研究

【目的】研究青海高寒生态区油菜地土壤中放线菌组成及其对油菜菌核病、黑斑病及软腐病的拮抗性,为克服青海油菜连作障碍提供放线菌生态依据及拮抗性生防放线菌菌株。【方法】以青海化隆县(2830 m)、门源县(2800 m)、互助县(2600 m)及青海农业科学院(2300 m)4个海拔高度不同的代表性地区采集的4个土样为研究对象,采用稀释平板法分离计数、皿内琼脂块法筛选拮抗放线菌及发酵滤液抑菌率测定法检测拮抗效果。【结果】①低海拔油菜田土壤中放线菌数量较多,在海拔2300 m的农科院油菜田土壤中,高氏1号培养基上分离的放线菌总数、小单孢菌数量及小单孢菌在放线菌中所占比例分别是高海拔地区(2600~2830 m)的1.5~2.7倍、3.4~6.2倍及1.4~2.5倍,而链霉菌所占比例为51.6%,在海拔较高的3个油菜田土壤中,链霉菌所占比例高达60.6%~75.0%,高海拔土壤中以腐殖酸为碳源能源的链霉菌数量约为低海拔土壤的2倍。②在91株分离自青海高寒地区油菜田土壤放线菌中,有58.2%的放线菌对油菜3种病原菌有抗菌活性;在海拔大于2 600 m的3个供试地区,随着海拔降低,对3种病原菌有拮抗性的放线菌的比例从53.8%提高到70.8%,对胡萝卜软腐欧文氏菌有抗性的放线菌的比例从21.4%降低到5.9%。③从青海高寒地区油菜田土壤中分离的53株拮抗性放线菌中,对芸苔链格孢菌、核盘菌及胡萝卜软腐欧文氏菌有拮抗性的放线菌分别占供试放线菌的59.3%,26.4%及13.2%,拮抗芸苔链格孢菌的放线菌比例最高。④青海高寒地区油菜田土壤中放线菌数量及拮抗性放线菌比例与土壤养分之间无规律性关系。⑤对核盘菌和芸苔链格孢菌有较强抑制作用的放线菌所占比例分别为14.3%和12.5%,尚未筛选到对胡萝卜软腐欧文氏菌有较强抑制作用的拮抗性放线菌;放线菌发酵滤液对核盘菌和芸苔链格孢菌的最高抑制率分别为51.7%和69.7%。【结论】青海高寒地区油菜田土壤中放线菌总量、拮抗性放线菌比例及对不同病原菌的抗性与土壤所处海拔高度有一定关系,与土壤养分之间无规律性关系,表明青海不同海拔高度油菜种植区的土壤微生态环境对3种油菜土传病害的潜在抗性不同。     

大球盖菇菌渣改良滨海盐碱土试验

选用6种大球盖菇出菇后菌渣,按一定比例与黄河三角洲滨海盐碱土混合,经过雨水淋溶、自然降解4个月后,测量其土壤物理、化学及生化指标。结果表明,与不加菌渣对照相比,6个混入大球盖菇菌渣处理的盐碱土p H值降低5. 71%～7. 09%,EC值降低44. 20%～48. 77%,含盐量降低48. 33%～53. 33%,土壤容重降低33. 08%～40. 00%,土壤孔隙度提高22. 87%～27. 56%;有机质含量提高60. 27%～114. 21%,速效磷含量提高257. 11%～539. 72%,碱解氮含量提高48. 85%～168. 58%;脱氢酶活性提高60. 00%～92. 38%,脲酶活性提高52. 48%～58. 71%,磷酸酶活性提高39. 28%～48. 53%,生物量碳含量提高88. 67%～109. 74%。由此看出,各培养料组成的大球盖菇菌渣对盐碱土改良均有良好效果,不同区域可以就地取材进行大球盖菇栽培获得经济效益,同时也可用菌渣改良土壤。     

几种培养基选择性分离稀有放线菌的方法

介绍了几种培养基选择性分离稀有放线菌的有效方法,如采用葡萄糖-天门冬酰胺改良培养基、淀粉-甘油培养基和甘油-酪素培养基从沙漠土样分离稀有放线菌;利用吉兰糖胶选择性分离Sporichthya,Planobispora,Planom-onospora,Actinomadura rugatobispora等。     

番茄灰霉病菌拮抗放线菌的分离和筛选

从沈阳东陵天柱山、小麦田和蔬菜园采集土壤样品，采用平板稀释法分离到212株放线菌，以番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)作为指示菌，通过体外抗菌活性筛选出12株抑菌圈直径大于10mm的菌株，进行离体叶片防病作用测定，初筛出防病效果较好的F22、F27、F39和F89菌株．然后将其发酵液喷洒在盆栽番茄植株上，测定对病害的实际防治效果，最后筛选出防病效果好，防效持久的F89菌株。     

几种利用预处理分离稀有放线菌的方法

稀有放线菌是生物活性物质的重要来源.本文主要从物理处理、化学处理、生物学处理等方面,介绍几种通过预处理选择性分离稀有放线菌的有效方法.     

拮抗放线菌的筛选培养基与筛选方法研究

从黄土高原人工植被土壤中分离得到若干放线菌,研究了从中筛选的50株拮抗性放线菌在不同培养基上对8种供试靶标菌的拮抗性。结果表明:1在黄豆粉琼脂和玉米粉琼脂培养基上,放线菌生长较好,在PDA和高氏1号琼脂培养基上生长次之。玉米粉和黄豆粉琼脂均可作为拮抗性放线菌的筛选培养基。2反向放置琼脂块是筛选拮抗性放线菌的一种有效且可靠的方法。3筛选拮抗性放线菌时,制备琼脂块的培养时间应控制在8～12d,培养时间过长将会导致拮抗作用减弱。4筛选得到的50株供试放线菌中对辣椒疫霉、黄瓜枯萎菌、棉花枯萎菌、西瓜枯萎菌、青霉、假丝酵母、金黄色葡萄球菌及大肠杆菌有拮抗性的放线菌株数分别为27,26,33,36,35,29,35和20株。     

死海嗜盐耐盐放线菌分离方法研究

【目的】探讨死海高盐地区分离嗜盐耐盐放线菌的最佳方法,为高盐地区放线菌的分离提供理论依据。【方法】采用物理方法（微波）、化学方法（加入孢子活化剂）、富集培养法及3种方法的组合共计9种方法,对死海地区土样进行预处理,然后在3种复合盐含量（150,225,300 g/L）及不同培养基（ISP5、CMKA、HV）条件下,研究复合盐含量及培养基对分离放线菌种类和数量的影响,并筛选嗜盐耐盐放线菌的最佳分离方法。【结果】①在3种培养基上,对土样采用9种方法进行预处理,其中物理+化学方法处理后分离的放线菌种类明显高于其他预处理方法;富集培养法预处理土样分离的放线菌种类明显较少。②不同复合盐条件下,3种培养基分离的放线菌种类和数量表现为CMKA>HV>ISP5。③不同培养基上,3种复合盐条件下分离的放线菌种类总体上表现为300 g/L>225 g/L>150 g/L,分离的放线菌数量总体表现为150 g/L>225 g/L>300 g/L。【结论】比较筛选得到了分离死海高盐地区嗜盐耐盐放线菌的最佳方法,即土样经微波与化学孢子活化剂共同处理后,在含225 g/L复合盐的CMKA培养基上培养。     

不同类型土壤中分枝杆菌噬菌体分离率的比较

为了解分枝杆菌噬菌体在自然界的生存环境,深入研究噬菌体在微生态环境中的作用奠定基础。以含柠檬酸和磷酸氢二钠的溶液为提取剂,从50份不同性质土壤中分离、纯化分枝杆菌噬菌体,电镜观察初步确定其分类;统计分析土壤类型、酸碱度、含水量、阳离子交换量、有机碳含量对噬菌体分离率的影响。共分离纯化到13株尾病毒目肌尾病毒科的分枝杆菌噬菌体。3种类型土壤的分枝杆菌噬菌体分离率分别为暗棕壤(41.2%)>黄棕壤(25.0%)>褐土(16.7%);土壤pH值、含水量、阳离子交换量对分离率影响呈规律性:pH值和含水量分别在7.45-7.95和13.7%-21.7%时分离率最高;当阳离子交换量为20.8-28.6 cmol/kg时,分离率随之升高而升高;未见有机碳含量对分离率的影响有明显规律。     

盐渍土分类的模糊聚类法探讨

【目的】寻求更为准确的盐渍土分类方法。【方法】对模糊聚类法的原理进行了介绍,并结合西北某机场重要建筑物的地质特点,利用模糊聚类法对该地区10个检测点的地基土进行了分类。【结果】西北某机场10个检测点的地基土可分为4类,即(1,2,3,4,8,9)区域属于亚硫酸盐渍土;(5,6)区域属于亚氯盐渍土;(10)区域属于碳酸盐渍土;而(7)区域属于非盐渍土。【结论】盐渍土分类的模糊聚类法较传统分类法简单、准确可靠,尤其是能具体判断出某点或某区域是否为盐渍土,对盐渍土的评判和地基处理有较大帮助。     

不同植被土壤产淀粉酶放线菌的分离与筛选

为了从土壤中获得产淀粉酶放线菌,对陕西省洛南县7种植被下不同土层土壤中的产淀粉酶放线菌进行了分离纯化,研究了化学抑制剂K2Cr2O7质量浓度和土壤稀释液浓度对放线菌分离效果的影响,并通过菌落形态特征和生理生化指标对产淀粉酶放线菌进行了综合分析。结果表明,当土壤稀释液为10-5～10-4 g/mL、K2Cr2O7质量浓度为50mg/L时,最有利于放线菌的分离;同一植被下表层土壤(5～20cm)中放线菌数量显著多于深层土壤(20～30cm);从7种不同植被下土样中共筛选出10株放线菌菌株,其中有8株是产淀粉酶放线菌菌株,从槐树下土壤中分离出的M4菌株对淀粉的水解能力最强,u0为14.27,并初步被判定为诺卡氏菌属放线菌;8株产淀粉酶放线菌均能利用葡萄糖进行糖酵解,6株能利用乳糖,7株不能利用蔗糖,6株不能利用麦芽糖,仅2株能够产生色氨酸酶,并且所有菌株均具有较强的耐碱性(pH值7.0～7.5),6株具有较强的耐盐性(10%),6株具有柠檬酸盐利用能力。     

花生幼胚RNA提取方法研究

花生(ArachishypogaeaL.)幼胚体积很小,不易剥取且富含多糖、酚类等化合物,因此以花生幼胚为材料提取RNA时会遇到很大困难.采用改进的Trizol法和异硫氰酸胍一步法成功提取出了高质量的花生幼胚总RNA,后续实验证明具有良好的逆转录活性.介绍了花生幼胚快速剥取的方法.     

放线菌SL-5链霉素耐药突变菌株的分离、活性筛选及发酵优化研究

【目的】为新型抗生素的开发研究提供有效途径。【方法】对放线菌SL-5在链霉素不同浓度下的耐药突变菌株进行分离和活性筛选,并采用单因素和正交试验对活性菌株进行发酵优化。【结果】从无活性放线菌SL-5的耐药菌株中得到1株活性突变菌株str-14,室内生测结果表明,其发酵液对蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)的抑菌圈直径为17.5 mm。通过单因素和正交试验,确定该菌株的最佳摇瓶发酵培养基配方为:小米10 g/L,葡萄糖20g/L,酵母粉2 g/L,蛋白胨7 g/L,混合VB1.5 mg/L,NaCl 2.5 g/L,CaCO32.0 g/L。最佳培养条件为:初始pH为8.0,装液量70 mL(250 mL三角瓶),180 r/min培养7 d。【结论】通过引入链霉素耐药性突变获得抑菌活性物质,是创制新型抗生素的一条可行之路。     

天津盐碱土中六种菊科植物AMF的初步研究

对天津盐碱土中6种菊科植物的AMF共生状况进行了研究,结果表明:所调查植物均被菌根真菌侵染,但不同植物的侵染率不同,孢子密度也有较大差异,菌根侵染率和孢子密度显著不相关(p=0.495,r=0.353,n=6)。根际土的盐分含量整体均较低,最高为1.92mg·g-1。根际土壤中共发现2属22种AMF的孢子,其中球囊霉属19种,无梗囊霉属3种。柑橘球囊霉,地球囊霉,何氏球囊霉,单孢球囊霉,凹坑球囊霉,地表球囊霉是出现频度较高的6个种。     

疏勒河项目区盐碱地的形成及改良利用

疏勒河项目计划开发荒地523万hm2,由于其独特的地质、气候条件,该区土壤中普遍含盐,且中盐土和重盐土占绝大多数,主要的盐土类型有：沼泽盐土、草甸盐土、典型盐土和干旱盐土。针对不同的盐土类型,提出了相应的改良利用分区,盐土的改良,必须以“水、盐、肥”为中心,水利、农业、生物措施相结合,综合治理。     

南雄烟区土壤调查和微生物分析

为了解广东南雄烟区土壤的退化情况,共调查了8个村的54个农户,种植面积431.2km2,其中包括旱地紫色土103.4km2,牛肝土水田109.4km2,沙泥田水田75.4km2,平均产量为244.4kg/km2。牛肝土水田和紫色土上种植的烟叶质量和产量高,连年种植烟草的沙泥地容易高发青枯病。产量高的地块施肥相对较多,但未呈现正相关关系。采集了土样并进行土壤微生物分析表明,土样间细菌、真菌和固氮菌的种类、数量有很大不同,即可培养微生物群落的差异非常大。烟田种大豆的土壤细菌和固氮菌数量最多。轻发青枯病田块土壤真菌数量最多,但其患青枯病烟杆的根际土真菌数量很少,根际土硝化细菌多。不同土壤固氮菌使碳酸钙溶解的情况也不一样。