噬菌体展示技术

噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白的表达而表达,同时,外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止,人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、入噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。本文主要概述了噬菌体展示技术的基本原理、噬菌体展示系统研究以及技术特点等,并跟踪了目前该领域的最新研究进展和发展前景。     

科学家盯上噬菌体

俄罗斯国家遗传和微生物育种科研所首席科学家克雷洛夫认为 ,噬菌体有望成为人类制服病菌的新武器。噬菌体是能感染其他病毒或细菌细胞的病毒 ,体形微小 ,一般呈蝌蚪状。它们能侵入细菌体 ,在其中大量繁殖 ,使细菌细胞裂解。据克雷洛夫介绍 ,自然状态下 ,一种噬菌体只能杀灭特定种类的病菌。在与噬菌体抗争的过程中 ,细菌的抵抗力会逐渐增强。多年来 ,病人不正确地使用抗生素使病菌的抗药性也越来越强。因此 ,俄科研人员正在用基因技术对噬菌体进行改造 ,使其在进入人体后能攻击更多种类的病菌。经基因改造的噬菌体能使病菌细胞内生成毒蛋白…     

噬菌体基因组学研究进展

现代生物学很多里程碑式的成果都是基于噬菌体而获得的。在过去数年中,完成测序的噬菌体基因组数目在逐年增加,美国国立生物技术信息中心(NCBI)噬菌体数据库中已登录了530多个噬菌体基因序列,比2005年增加了3倍多。生物圈里拥有数量庞大的噬菌体,而噬菌体的基因组包含了较高比例、未知功能的基因序列,因此对噬菌体基因组的研究,有助于深入了解噬菌体及其与宿主、环境的相互作用。文中基于噬菌体基因组信息,重点介绍了噬菌体基因组的特点和进化。     

噬菌体治疗研究进展

随着致病性细菌耐药性的加剧,以及患免疫抑制病人的伴发症发生率增高,人类正面临着严峻的现实--重新回到"抗生素发现以前的时代".目前寻找有效的抗菌制剂已成为现代医药工业中的紧急问题.在这样的时代背景下,噬菌体治疗的研究重新进人人们的视野[1].     

鸡缩胆囊素(CCK)在T4噬菌体表面的展示及免疫原性研究

采用T4噬菌体表面展示系统，将CCK-33肽四多串联体及八多串联体展示在T4噬菌体表面，并研究其免疫原性。将CCK四串联体和八串联体与SOC基因缺失的、依赖溶菌酶的噬菌体ФT4-Z1重组，获得重组噬菌体CT-4CCK和西T-8CCK。SDS-PAGE和Western Blot检测结果表明，CCK多串联体蛋白已经成功展示在T4噬菌体表面，其融合蛋白分子量约30ku和41ku，能够与CCK标准阳性血清发生特异性反应。以重组噬菌体为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡后，抗体浓度显著升高，肉鸡的体重、采食量都有所提高，而料肉比有所下降。结果说明，鸡CCK蛋白展示在T4噬菌体表面具有良好的免疫原性。     

噬菌体治疗的另一种策略——转基因噬菌体

许多研究已论证噬菌体作抗菌剂使用的可行性,并有一些噬菌体制剂已获批,可用作抗菌性饲料添加剂。但直接采用分离自环境中的天然烈性噬菌体防控细菌感染,面临诸多问题和发展障碍。基因工程和合成生物学技术的发展为解决这些问题提供了新的思路,本文综述了近年来转基因噬菌体治疗相关研究进展。     

口蹄疫病毒全衣壳前体(P1)重组T4噬菌体的构建和鉴定

以含完整的口蹄疫病毒全衣壳前体基因（P1）的质粒pP1-T为模板进行PCR扩增获得P1基因片段（约2 200bp）,构建整合质粒pR-P1经引物对Pr.78/P1-A2进行PCR扩增筛选插入方向正确的重组质粒,EcoRⅠ酶切和T7启动子测序正确。以pR-P1质粒转化E.coliE2,感染噬菌体φT4-Z1进行同源重组,经溶菌酶依赖性筛选获得整合成功的噬菌体φT4-P1。SDS-PAGE检测重组噬菌体出现约98 000预计大小的条带;Western bloting检测表明,重组噬菌体φT4-P1与口蹄疫阳性血清可发生免疫反应。     

反刍动物瘤胃噬菌体研究进展

近年来,反刍动物瘤胃病毒组功能的研究日益受到关注,其中瘤胃噬菌体作为瘤胃病毒组中数量最多、功能最重要的组成部分,成为研究热点.瘤胃噬菌体是反刍动物瘤胃病毒中研究最深入的一大类,它是反刍动物瘤胃微生态系统的固有组成部分,与原生动物、细菌、古生菌、真菌等共同维持着瘤胃微生态平衡,决定着瘤胃对植物性饲料的发酵和利用.瘤胃噬菌...     

噬菌体展示技术研究进展

噬菌体肽库是在噬菌体基因中整合一段编码外源短肽的寡聚核苷酸,该寡聚核苷酸能在噬菌体表面以融合蛋白的形式表达,并获得不同特定长度的小肽集合。目前,噬菌体肽库被广泛应用在蛋白表位的筛选、药物筛选、疫苗研制等方面。     

噬菌体抗体库技术

噬菌体抗体是表面表达有单链抗体（Singlechain Fv,ScFv）或抗体Fab段的噬菌体,用基因克隆技术将B细胞全套可变区基因克隆出来,组装到表达载体内并表达到噬菌体表面成为噬菌体抗体的群体,即为噬菌体抗体库.该技术是丝状噬菌体展示（phage display）与抗体组合文库技术相结合而成.其基本路线为用PCR方法扩增抗体全套可变区基因,重组到噬菌体载体中,并通过与丝状噬菌体的外壳蛋白形成融合蛋白,把Fab段或ScFv表达到噬菌体表面.通过＂吸附-洗脱-扩增＂的富集过程,从中筛选出特异性抗体的可变区基因.     

丝状噬菌体与噬菌体展示技术在抗体库中的应用

丝状噬菌体展示技术是将外源蛋白通过与丝状噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒的表面。自问世以来,它已被应用于生物科学的许多领域,其中最具吸引力的是抗体工程,利用该技术可构建不同的抗体库,从而获得针对不同抗原的抗体。本文着重介绍了丝状噬菌体的生物学特征...     

噬菌体防控沙门氏菌实践

正近年来,由于沙门氏菌到处存在、宿主范围广泛、繁殖快、一旦感染持续存在于宿主体内,严重破坏家禽免疫系统,引起家禽各种疾病,特别是种鸡场投诉率高。目前,沙门氏菌防控手段很多,疫苗贵而不对型、抗生素滞后而且易反复,特别是沙门氏菌耐药性增强,抗生素防控沙门氏菌越来越显得无能为力。笔者在畜牧生产一线,使用噬菌体产品防控沙门氏菌,取得非常理想的效果。1养殖现场沙门氏菌感染现状1.1种鸡场育雏期白痢用抗生素效果不理想;育成期均匀度差、胫骨发育不好、羽毛凌乱;产蛋期产蛋率受影响、输卵管炎和肝病增多、蛋壳质量下降。整个饲养过程肠道病多,免疫应答不佳,种鸡逐渐消瘦,     

应用噬菌体快速检测沙门氏菌

应用沙门氏菌噬菌体O－I，对本实验室保存的100个肠科菌株进行了裂解试验，其中30株沙门氏菌4～6小时出现裂解斑，而其余的枸橼酸杆菌、大肠艾希氏杆菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌及变形杆菌等表得反应全部为阴性。应用噬菌体和常规法对进出口动物产品鱼粉、肉骨粉、半年虫卵、蛤蚧及冻海鱼的20个样品进行检测，前者发现10个样品为沙门氏菌阳性，后者发现9个样品为沙门氏菌阳性，通过比较显示，应用噬菌体对进出口动物产品中沙门氏菌进行检测，具有快速、敏感、简便和经济的特点。     

噬菌体治疗制剂的研究进展

从噬菌体作为治疗制剂的前提条件、噬茵体的药物动力学特征、噬菌体可能携带的有害基因、噬菌体产物、噬菌体治疗的实例等方面综述了噬菌体作为治疗制剂的研究进展,旨在通过介绍用噬菌体替代抗生素治疗由细菌引起的感染的机理,为细菌性疾病的治疗提供新的思路和方法.     

噬菌体与动物细胞的相互作用

噬菌体是动物体内最丰富的生物群体。噬菌体易获得、宿主特异性强、不易产生耐药性等特点使其在治疗耐药细菌感染方面具有很大优势。随着基因工程和显微镜技术的发展,噬菌体对动物细胞的调节机制逐渐被发现。笔者综述了近年来关于噬菌体进入动物细胞的机制、噬菌体在细胞内的分布及与细胞内受体相互作用的研究进展,强调了噬菌体在协助宿主细胞杀灭细菌过程中的作用,讨论了噬菌体与动物细胞相互作用对噬菌体治疗的意义,旨在为噬菌体治疗耐药细菌的研究提供理论基础。     

李氏杆菌噬菌体类型鉴定

目前,沙门氏菌、老贺氏杆菌、埃希氏菌、葡萄球菌、布鲁氏杆菌和白喉杆菌采用了噬菌体类型鉴定,其可以充分地、客观地帮助查明传染源和某些疫病爆发之间的关系。国外研究者报道了间接的李氏杆菌噬菌体类型鉴定法即按细菌对特异性噬菌体的敏感性。我们的研究目的是利用培养物的溶菌性直接进行李氏杆菌噬菌体类型鉴定的可能性。研究了18株菌株,其中,单核白细胞增多症李氏杆菌血清型1型的14株,脱氮利李氏杆菌(L. denitrifican, s)2株和默氏李氏杆菌(L. murrayi)2株。单     

噬菌体特性及应用研究进展

近年来,随着“禁抗令”的实施,养殖业迫切需要找到新的替代品来适应无抗的新时代。噬菌体能够特定地裂解某类细菌,且能与细菌同步进化,因此能很大程度上减少细菌的耐药性与药物在动物体内的残留。本文介绍了噬菌体的结构、分类和噬菌体的优势,以及噬菌体在人类、食品和动物中的应用,以期为噬菌体今后更广阔的研发及应用提供参考。     

噬菌体：细菌的天敌

1915年,英国细菌学家特沃特在培养葡萄球菌时,意外发现培养出来的葡萄球菌菌落上,出现了透明斑,这个现象意味着这部分葡萄球菌已经消失了。是什么使葡萄球菌消失的呢？特沃特用接种针接触了透明斑后,再去碰触另外一个正常的葡萄球菌菌落,不久,这个菌落上被碰触的部分,也出现了透明斑。这说明,葡萄球菌有一种天敌,它会被这种＂天敌＂捕食掉。