鸡胚源疫苗中污染霉形体的对策 Ⅰ.污染疫苗中霉形体分离株对抗生素的敏感性和以抗生素控制疫苗的霉形体污染

应用从活疫苗中分离的鸡毒霉形体,滑液霉形体16个分离物和3株对照株进行了对8种抗生素敏感性测定,结果表明,这些霉形体株对北里霉素(柱晶白霉素)和泰妙霉素最为敏感,最小抑制量≤0.2微克/毫升。但分离株对链霉素,泰乐霉素和庆大霉素有明显的抗药性,尤其对链霉素的抵抗力极为强大,最小抑制量竟高达1000微克/毫升,为对照株的数十到数百倍。在五批人工实验感染霉形体的新城疫疫苗样品中,分别加入北里霉素、红霉素和四环素,有效地控制了霉形体污染。经过冰箱温度(5—10℃)保存2.5个月疫苗即将失效前,北里霉素和红霉素依然保持着完全的控制作用。加入四环素的有两批样品中尚有微量的霉形体存活。加入这些抗生素对疫苗效力没有影响。作者们认为,在尚未能普遍应用SPF鸡胚培养制造活疫苗以前,应用抗生素控制疫苗的污染,仍不失为一种控制污染的可行的应急方法。     

鸡胚制活病毒疫苗中霉形体污染的研究

对32个鸡胚,80组(每20个鸡胚液混合物为一组)未加抗生素的新城疫疫苗半成品和14批成品疫苗(其中冻干苗12批和液体苗2批)的样品进行了霉形体污染的检查。结果从一个接种了新城疫病毒 LaSota 弱毒株的鸡胚中,9批半成品疫苗中和10批成品疫苗的样品中分离出了霉形体。共20个分离物,对其中12个进行了种属鉴定,12个分离物中有4个含有两种霉形体,因此共含有16株霉形体,即鸡毒霉形体8株,滑液霉形体7株和一株不属于这两种的霉形体。随机选出3个分离物进行了链霉素敏感性测定。测定结果表明这些菌株的抗药性大为增强,链霉素的最小抑制量为对照株的几十百倍,因而能抵抗疫苗中链霉素的作用而污染了疫苗。建议在产品检验中增加霉形体检测项目。在未能使用 SPF 鸡胚生产疫苗以前应尽速进行消灭污染的研究。     

鸡胚源疫苗中污染霉形体的对策——Ⅱ.热力处理制苗用鸡蛋消除活疫苗中霉形体的污染

鸡毒霉形体新鲜培养物在43.5℃,44℃和45℃中经过12和14小时的处理后,霉形体完全死亡,实验感染鸡毒霉形体的鸡蛋或8日龄鸡胚,以45℃经14小时处理后,可以将95%以上的鸡胚内的霉形体消除,残存霉形体只出现于卵黄膜上,尿囊液内未出现。新城疫病毒LaSota株在这样处理过的鸡胚中发育良好,病毒血凝价比未处理过的鸡胚中高几倍,处理过的种蛋对鸡胚制苗利用率没有明显影响。     

兽用疫苗中霉形体污染的套式PCR检测技术建立及初步应用

根据GenBank公布的鸡毒霉形体、猪肺炎霉形体、猪滑液霉形体和絮状霉形体的16s rRNA基因序列,利用引物设计软件DNAStar和Primer5.0自行设计3对特异性引物,以市场上常见的兽用疫苗为检测对象进行试验,优化反应体系,建立了兽用疫苗霉形体污染检测的套式PCR方法。同时,本试验还对市场上的兽用疫苗进行随机抽查检测,其检出率分别为24.2%(23/95)、21.1%(20/95)和14.7%(14/95)。     

斑点免疫结合试验在霉形体研究中的应用

本文报道了将斑点免疫结合试验(DIBA)用于霉形体种的鉴定,细胞培养中霉形体感染的检测和鸡胚实验感染霉形体的检测,都取得了满意的结果。应用DIBA对11种霉形体培养物和36个自感染细胞和污染疫苗中分离的霉形体的培养物进行了鉴定,结果与直接分离培养物用生长抑制试验,间接免疫荧光检测的结果完全一致。应用口腔霉形体、猪鼻霉形体、精氨酸霉形体和莱氏无胆甾体等4种霉形体的抗血清以DIBA对36株细胞培养物进行检测的结果,证明其中15株感染口腔霉形体,1株感染莱氏无胆甾体,1株为口腔霉形体和莱氏无胆甾体的混合感染,与对照用的分离培养方法结果一致,还有1株用分离培养方法和DNA荧光染色证明有霉形体感染,经鉴定此株霉形体不属于此4种霉形体,故用DIBA未检出。以鸡毒霉形体和滑液霉形体实验感染鸡胚各18枚,以DIBA从这些鸡胚的卵黄液及尿囊液中可检出各自感染的霉形体种。结果说明,在霉形体研究中DIBA为一种快速、简便和特异的血清学方法。     

一种灭活鸡败血霉形体疫苗的效力试验

一种鸡场用美国进口的灭活鸡败血霉形体疫苗对童鸡进行效力试验:第一组40只鸡,在45日龄时肌肉注射、88日龄时又皮下注射一次。第二组40只鸡88日龄时仅皮下注射一次。40只鸡作为对照组。免疫后第133天用来自加里弗尼亚的鸡败血霉形体S6—208菌株攻毒结果:对照组与仅免疫一次的鸡有轻微症状及温和的鼻窦炎。免疫后快速凝集与血凝抑制试验均为阳性。试验中第二次免疫皮下注射后局部有短时的肿胀。     

应用电镜技术对细胞培养物中霉形体污染的检查

霉形体是一种最简单的原核生物,大小介于立克次氏体与细菌之间,致病性霉形体分布较广,可感染各种畜禽。在组织培养工作中,经常引起细胞培养物的污染,同时,这种污染又不能用抗菌素加以控制,因此早期检测霉形体的污染是十分必要的。我们应     

从犊牛血清和活毒疫苗中分离出霉形体的报告

从细胞培养用的犊牛血清和兽用活毒疫苗中分离到6株人源口腔霉形体。这说明在生物制品生产过程及细胞培养工作中必须加强对种毒、血清和细胞的质量检测以及严格无菌操作。     

规模猪场猪霉形体肺炎实用综合控制技术

为探讨猪霉形体肺炎实用综合防制技术 ,笔者试用猪霉形体肺炎 (气喘病 )灭活苗和弱毒冻干苗先后对 7日龄与 2 1日龄 (免疫 2次 )和 2 0日龄左右 (免疫 1次 )乳仔猪进行免疫试验 ;同时用治喘灵、泰妙仙、喘气 10 0及息喘平 4种药物对霉形体肺炎的病猪进行治疗试验。结果 :灭活苗免疫的猪( 15 5日龄 )保护率达 10 0 %;弱毒苗免疫的猪 ( 188日龄 )保护率达 83 8%;用治喘灵的猪有效率为 10 0 %;用其他 3种药的猪 :泰妙仙、喘气 10 0、息喘平的总有效率分别为 95 8%、94%、 93 1%。1　材料与方法1 1　疫苗及药物猪霉形体肺炎灭活苗 ,由…     

猪肺炎霉形体血清抗体检测的研究

用单辐射溶血试验(SRHT)和绵羊红细胞间接血凝试验(IHAT)检测了猪霉形体肺炎患猪的特异性血清抗体.感染后第一周.以 SRHT 未检出血清抗体,以 IHAT检出30%;感染后第二周,两种方法的检出率分别为50%和70%;感染三周后,检出率达100%和97.28%,假阳性率为3.85%和零.在感染三周后的血清中,两种试验方法的结果高度一致。述两种方法简单、快速、敏感、特异,具有较高的应用价值。     

疫苗生产过程中预防支原体污染的方法

<正>兽用疫苗的生产过程通常会涉及细胞培养,而在细胞培养过程中非常容易被支原体污染,影响细胞的正常形态和遗传,进而对疫苗制品的质量与安全造成严重的负面影响,破坏疫苗的正常免疫效力,甚至会给动物造成严重的危害。笔者简单阐述了在疫苗生产过程中的重点检测目标、疫苗生产中常见的污染物、支原体常用的检测方法,同时还对有效预防支原体污染提出了几点建议,以供相关人员参考。     

绵羊肺炎霉形体病药物防治的研究

本文报道在我国进口良种绵羊中发现的一种以绵羊霉形体(Mycoplasma ovipneumonia,简称M.O.)为病原的慢性呼吸道传染病,并证实从四川、云南分离的M.O.株与中监所赠给的国际参考株M.O.y98同型。用当地分离的绵羊肺炎霉形体混合株复制的人工病例,于接种病原后第二天开始用新药支原净(Tiamutin)口服控制病情,日剂量为22.5mg/kg,7天为一疗程,隔一周再服一疗程。经过两周的药物预防,试验组X光透视全部阴性。解剖检查,肺炎实变平均值仅0.15±0.12,而对照组X光胸透全部阳性。肺炎实变严重,平均值为11.9±8.11。对自然发病羊,在相同的剂量和疗程下,治疗前后以X光透视为判定标准,支原净的疗效为100%,螺旋霉素有20%转阴,另80%转为弱阳性(++—±),土霉素最差,转阴率为零。     

猪瘟和蓝耳病疫苗中BVDV和PCV污染情况调查

为了解四川地区规模化猪场所用蓝耳病和猪瘟疫苗中BVDV和PCV的污染情况,笔者选取了几种市售蓝耳病疫苗和猪瘟疫苗进行PCR检测。检测结果为：10份猪瘟活疫苗样品和9份蓝耳病活疫苗样品中,BVDV污染率为10．53％;PCV2污染率也为10．53％,所有样品中未检出PCVl。     

鸡马立克病活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒检测方法的建立

为建立鸡马立克病(MD)活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的间接免疫荧光检测方法,本研究通过向MD活疫苗中添加不同剂量的REV,用拟定的方法对样品检测REV。结果表明,Ⅰ型MD活疫苗、火鸡疱疹病毒活疫苗(Fc-126株)和MD二价活疫苗(HVT+CVI988株)中污染REV的最低检出量分别为每500羽份疫苗中污染5TCID50、10TCID50和15TCID50的REV。应用建立的方法对国内10家企业生产的43批MD活疫苗进行了检验,结果显示,2个企业生产的4批疫苗REV检测阳性。随机选取了5批IFA检测阴性样品和4批IFA检测阳性样品,按鸡检查法进行外源病毒检验,结果两种方法对REV污染检验结果的符合率为100%。因此,本研究建立的IFA法可替代鸡检查法,用于疫苗中REV污染的检验。     

“兔瘟”灭能组织疫苗的免疫期和保存期试验以及生产应用效果

为防制“兔瘟”,我们试制了7批共10万ml“兔瘟”灭能组织疫苗,供紧急预防之用,取得了良好效果。本文主要报告疫苗的免疫期和保存期的试验结果以及在生产实践中应用的实际效益。试验材料一、疫苗:我们于1985年5月至1986年5月制造了“兔瘟”灭能组织疫苗共7批。每批经常规无菌检验、安全试验和效力试验均合格。     

日粮添加植酸酶和25-羟胆钙化醇对产蛋前期和开产期接种禽败血霉形体F株的商品蛋鸡生产性能的影响

本研究以产蛋前期(12周龄)和开产期(22周龄)接种禽败血霉形体F株的商品蛋鸡为试验对象,探讨了日粮添加植酸酶和25-羟胆钙化醇对其生产性能的影响。试验采用两种日粮,一为基础对照日粮,二为0.025%植酸酶和25-羟胆钙化醇添加日粮,试验期为20~58周龄。从22周龄开始,每周统计产蛋量,直至58周龄,同时计算累加情况和全期总数。在34、50和58周龄时,测定蛋重和鸡蛋内容物质量及蛋壳品质。结果发现,尽管接种禽败血霉形体F株降低了鸡群开产期(22和23周龄)的产蛋量,但是,高峰期过后(45周龄)鸡群的产蛋量却有所增加。此外,各项处理对于试验鸡群的产蛋总量、蛋重和鸡蛋内容物质量及蛋壳品质均无明显影响。研究者认为,虽然日粮添加植酸酶和25-羟胆钙化醇既对鸡群的生产性能没有推动作用,又与禽败血霉形体F株没有互作效应,但是,接种禽败血霉形体F株却在不影响鸡蛋总数的前提下,改变了22~45周龄鸡群产蛋的时空分布状况。     

禽用活疫苗外源病毒污染情况的调查研究

为对禽用活疫苗污染外源病毒的情况进行彻底摸底调查,抽取了目前使用量大、覆盖面广的禽用活疫苗重点品种共8种28批,涉及18家国内生产企业、7家国外企业,疫苗生产用SPF鸡胚来自国内8家企业。按照《中国兽药典》2010年版三部鸡检查法和《欧洲药典》对抽检的禽病活疫苗进行了外源病毒污染和禽腺病毒污染检验。结果显示所抽检的禽用活疫苗均无外源病毒污染和禽腺病毒污染,表明我国禽用活疫苗的质量控制和安全性良好。     

禽用活疫苗生产中污染的半成品(尿囊液)再利用试验

目前,在所有兽用生物制品中的活疫苗生产中,都不可避免会出现5%左右的半成品污染,如在污染季节(天热,霉雨)生产,污染率还会更高一些。按《规程》1规定污染的半成品是不可以用于配制成品苗的,只有白白弃掉,会造成一定的成本浪费。为了解决这一难题,我们对已污染的半成品(如尿囊液)进行了滤过除菌、浓缩处理,然后再次用于配制成品疫苗。结果比较理想,现将实验结果报告如下。1材料和方法1.1材料⑴污染的半成品(尿囊液)及同批次未污染的半成品(尿囊液):取正常生产过程中,同一批次的无菌检验阳性尿囊液和无菌检验阴性的尿囊液(鸡新城疫L系和鸡传…     

H7亚型禽流感病毒灭活疫苗安全性和免疫效力评估

按照《中国兽药典》要求的方法,对3批制备的H7亚型禽流感灭活疫苗的物理性状、安全性和免疫效力进行评估。结果:疫苗物理性状稳定;大剂量和单剂量重复免疫SPF鸡后未出现局部或全身不良反应;免疫后21 d,3批疫苗免疫鸡HI抗体效价平均值分别为8.5 log2、8.4 log2、8.5 log2;以H7N9亚型禽流感病毒株106EID50剂量攻击,14 d观察期内,对照鸡全部排毒,免疫鸡均不排毒,说明疫苗免疫后能阻止病毒的排泄。结果表明:制备的H7亚型禽流感灭活疫苗安全、有效。     

禽弱毒疫苗中REV低剂量污染检测方法的比较

使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗是REV感染途径之一,而通常弱毒疫苗中REV的污染剂量较低,难以检测,本研究对不同方法在检测弱毒疫苗中REV低剂量污染进行了比较研究。将定量好的REV以不同剂量分别人为污染一批商品化新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗,提取核酸后分别以TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测、常规RT-PCR检测以及PCR产物结合核酸斑点杂交检测等不同方法进行检测。结果显示常规RTPCR检测仅可检测到10TCID50/羽份的REV污染,而另外两种方法均检测到1TCID50/羽份的低剂量REV污染。将人为污染1TCID50/羽份和2TCID50/羽份REV的NDV弱毒疫苗各接种10只SPF鸡,定期针对REV抗体及其核酸进行检测,结果显示在免疫污染疫苗后7周内REV抗体全部为阴性,而核酸检测均可以检测到一定比例的阳性,提示通过接种SPF鸡检测弱毒疫苗中REV污染时,仅仅通过抗体判定可能会对一些剂量较低的REV污染造成漏检,通过结合对病原的检测有助于降低漏检率。