喹乙醇人工抗原的合成与鉴定

采用琥珀酸酐法合成喹乙醇半琥珀酸酯(OLA-HS),以质谱法对其进行鉴定;活化酯法合成全抗原OLA-BSA、OLA-OVA,以紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定之;用OLA-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗血清效价,阻断ELISA鉴定其敏感性、特异性。紫外扫描测得OLA-BSA、OLA-OVA中OLA-HS和BSA、OVA的分子结合比分别为17.1∶1和12.4∶1;3号小鼠抗血清的效价最高,对OLA的IC50为58.923 ng/mL,与卡巴氧的交叉反应率为1.841%,与其他药物无交叉反应。通过系列ELISA鉴定,获得高价、敏感、特异的多克隆抗体(pAb),为OLA残留免疫学检测方法的建立奠定基础。     

甲硝唑半抗原及全抗原合成与鉴定

在微波加热条件下,将甲硝唑与琥珀酸酐反应,合成半抗原甲硝唑半琥珀酸酯,氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法的鉴定结果表明,目标半抗原合成成功;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备甲硝唑全抗原,紫外光谱法鉴定结果表明,全抗原合成成功.     

斑蝥素人工抗原的制备与初步鉴定

【目的】合成并鉴定斑蝥素人工抗原,为建立斑蝥素的酶联免疫分析方法提供依据。【方法】对斑蝥素进行化学修饰,引入羟基合成N-羟乙基斑蝥酰亚胺(BY),并经MS、NMR、IR法对其结构进行鉴定。进一步经琥珀酸酐法合成琥珀酸酯(BYS)并纯化,在此基础上,分别采用混合酸酐法和碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白偶联,合成斑蝥素的人工抗原(BYS-HS-BSA、BYS-TY-BSA、BYS-HS-OVA、BYS-TY-OVA),并经MS、IR法对人工抗原进行定性鉴定。免疫原免疫兔子获得抗斑蝥素多克隆抗体并测定其效价。【结果】成功合成了一种斑蝥素半抗原,与载体蛋白BSA、OVA偶联后得到免疫原(BYS-HS-BSA、BYS-TY-BSA)和包被原(BYS-HS-OVA、BYS-TY-OVA),免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,效价分别为8 000和16 000。【结论】初步合成并鉴定了斑蝥素人工抗原,在设计合成斑蝥素的半抗原时不能破坏其关键的环结构。     

有机磷杀虫剂毒死蜱人工抗原的合成与鉴定

 以杀虫剂毒死蜱为起始原料 ,在碱性条件下与 3 巯基丙酸反应 ,合成了半抗原O ,O 二乙基 O [3,5 二氯 6 (2 羧乙基 )硫代 2 吡啶基 ]硫逐磷酸酯 (简称AR) ,然后分别与牛血清白蛋白 (BSA)和卵清白蛋白 (OVA) ,经过碳二亚胺法和混合酸酐法偶联反应得到了免疫抗原和包被抗原 ,其结合比分别为 39∶1和 13∶1。用所得的免疫抗原免疫兔子获得了效价较高的多克隆抗体。     

克百威人工抗原的合成与鉴定

以2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃酚为反应原料,在通光条件下合成了2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氯甲酸酯.然后,以其作为反应原料与氨基已酸或氨基丁酸反应,在不同条件下合成了具有羧基的两种活性半抗原6-[[(2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基] 氨基]已酸(BFNH)和4-[[(2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基] 氨基]丁酸(BFNB).半抗原和牛血清蛋白(BSA)经碳二亚胺法偶联得到了其免疫原,BFNH-BSA和BFNB-BSA的结合比分别为10∶1和13∶1,同时利用混合酸酐法和卵清蛋白经偶联得到包被抗原,BFNH-OVA和BFNB-OVA的结合比分别为4∶1和3∶1.     

二氯喹啉酸人工抗原的合成与鉴定

 以除草剂二氯喹啉酸（quinclorac，Q）、氯化亚砜、氨基己酸和氨基丁酸等为起始原料，经2步化学反应分别合成了2种二氯喹啉酸半抗原：6-(3,7-二氯-8-喹啉甲酰基)氨基己酸（QC）和4-（3,7-二氯-8-喹啉甲酰基）氨基丁酸（QB）。并通过碳化二亚胺法和混合酸酐法将Q、QC和QB分别与载体蛋白（BSA、OVA）偶联制备了二氯喹啉酸的免疫抗原和包被抗原。再将Q-BSA、QC-BSA和QB-BSA分别免疫新西兰大白兔获得了3种抗二氯喹啉酸的多克隆抗体：抗Q-BSA抗体(Q-Ab)、抗QC-BSA抗体(QC-Ab)和抗QB-BSA抗体(QB-Ab)，当相应的包被抗原浓度均为4 ?g·ml-1时，相应的冻干粉效价分别为2×103，1.2×106和1.6×106。由于Q-Ab效价偏低，不适合用于检测。采用同源间接ELISA竞争法测定时，其他2种抗体（QC-Ab、QB-Ab）的抑制中浓度(IC50)均大于50 mg·L-1，检测灵敏度也较低。因此本文对异源间接竞争ELISA法进行了研究，结果表明，异源反应的检测灵敏度高于同源反应，其中QB-Ab的IC50为0.4 mg·L-1；最低检测限为0.006 mg·L-1。     

链霉素人工抗原的制备与鉴定

链霉素经氧-羧甲基羟胺肟化处理后引入羧基,采用EDC一步法分别合成免疫原BSA-EDC-SM和包被抗原OVA-EDC-SM;用戊二醛法和1,4-丁二醇缩水甘油醚分别合成BSA-GA-SM和BSA-di-SM;采用SDS-PAGE凝胶电泳和紫外扫描测得BSA-EDC-SM、BSA-GA-SM和BSA-di-SM的BSA与SM的分子结合比分别为1:23、1:15和1:10.用3种免疫原免疫Balb/C小鼠,获得了高价、敏感和特异的抗血清.BSA-EDC-SM免疫组中1#小鼠的多克隆抗体对SM的IC50为45.8üg/mL,对双氢链霉素(DHSM)的交叉反应为90.6%,与其他氨基糖苷类药物或抗生素药物的交叉反应均小于0.001%.BSA-di-SM和BSA-GA-SM免疫组的多克隆抗体对DHSM、其他氨基糖苷类药物或抗生素类药物的交叉反应均小于0.001%.     

醋酸甲羟孕酮人工抗原的合成与鉴定

【目的】为建立醋酸甲羟孕酮(MPA)快速准确的免疫学分析技术,对MPA人工抗原的合成鉴定进行研究。【方法】将MPA肟化后与琥珀酸酐反应制得MPA半琥珀酸(MPA-HS),然后通过碳二亚胺法将MPA-HS与牛血清白蛋白(BSA)偶联合成人工抗原MPA-BSA,并采用紫外全波长扫描法、SDS-PAGE法、ELISA检测法和动物免疫试验对其进行鉴定。【结果】MPA与BSA的偶联比为8∶1时,合成的人工抗原MPA-BSA具有良好免疫原性与反应原性。【结论】成功合成了人工抗原MPA-BSA,为进一步的MPA免疫学分析技术研究奠定了基础。     

溴虫腈半抗原及全抗原合成与鉴定

以杀虫剂溴虫腈为起始原料,合成了半抗原4-溴-2-(对氯苯基)-1-乙氧基甲基-5-(三氟甲基)吡咯-3-甲胺(简称CFP-NH:).通过戊二醛法将该半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联得到全抗原,经紫外光谱法鉴定后,用三硝基苯磺酸法(TNBS)测得2偶联物偶联比分别为22:1和15:1.以CFP-NH2-BSA免疫新西兰白兔、CFP-NH2-OVA为包被原,对其抗血清进行间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA),测得抗血清效价为2.56×104,抗血清竞争性抑制试验表明,溴虫腈质量浓度为40 μg/mL时,其抑制率达80%以上,进一步证明抗原合成成功.     

莠去津人工抗原的合成与鉴定

以除草剂莠去津原药、巯基丙酸等为起始原料,经过亲核取代反应合成了莠去津的半抗原:2-硫丙酸基-4-乙胺基-6-异丙胺基-1,3,5-三嗪,并用UV、IR以及NMR等手段证明合成成功,用活泼酯法将半抗原与载体蛋白成功的进行偶联,根据紫外吸收的加和性原理,比较测定半抗原、载体蛋白及偶联物的吸光值,并计算出半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)的结合比为16:1和6:1。     

磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原的合成与鉴定

用重氮化方法将SDM偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成免疫抗原BSA-SDM和包被抗原OVA-SDM,通过紫外扫描(UV)、SDS-PAGE凝胶电泳试验。结果显示:BSA-SDM和OVA-SDM的UV与BSA、SDM的相比均发生了改变,出现了明显的特征峰。这表明半抗原和载体偶联成功。用BSA-SDM免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价。结果表明,获得了高效价的pAb,为SDM残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体的制备

[目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。     

鲤鱼体组织中喹乙醇的残留规律研究

[目的]探索喹乙醇在鲤鱼体内的残留规律。[方法]采用高效液相色谱法(HPLC法)测定幼鲤鱼和成鲤鱼肝脏和肌肉中喹乙醇的残留量。[结果]鲤鱼肝脏中喹乙醇的残留量明显高于肌肉,而幼鲤鱼组织中喹乙醇的残留量要高于成鲤。饵料中菜籽粕不同用量对鲤鱼喹乙醇的残留量无显著影响(P0.05)。[结论]在实际生产中应禁止喹乙醇的使用。     

玉米赤霉醇完全抗原的制备及质量鉴定

旨在合成玉米赤霉醇(ZER)人工抗原,并用其免疫小鼠以获得含高滴度ZER多克隆抗体的小鼠血清,为ZER单克隆抗体的制备奠定基础。改造ZER第16位上的羟基,合成半抗原ZER-16-羧丙基丁醚,然后分别采用混合酸酐法和碳二亚胺(EDC)法将改造后的半抗原与载体蛋白BSA或OVA偶联,制备免疫原ZER-BSA和包被原ZER-OVA,并采用凝胶电泳、动物免疫对人工抗原进行质量鉴定,间接ELISA测定抗血清效价,间接竞争(阻断)ELISA测定抗血清的敏感性和特异性。结果表明,用制备的免疫原免疫小鼠血清效价均已达到1∶104以上。6号鼠的血清敏感性最高,对ZER的半数抑制质量浓度(IC50)达15.77ng/mL,获得的血清除与α-玉米赤霉醇特异性反应外,与其结构类似物β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮分别有12.5%、100%、12.5%、25%、100%的交叉反应,与其他霉菌毒素交叉反应性均小于0.5%。表明试验成功获得ZER人工抗原,通过动物免疫制备敏感性好、特异性强的ZER多克隆抗体,为ZER单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。     

克百威人工抗原合成及其免疫应用

研究克百威半抗原4-[[(2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)的新合成方法,以避免传统三光气合成法的危害。以呋喃酚为起始物,通过酯化反应和还原反应最终合成半抗原BFNB,利用质谱和核磁进行表征,结果证明半抗原BFNB合成成功。利用活性酯法将BFNB分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联得到免疫原和包被原,紫外扫描计算偶联比分别为17∶1和8∶1;将免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体,间接竞争酶免疫检测方法(icELISA)表明其半数抑制质量浓度(IC_(50))为0.096μg/mL,定量检测线性(IC_(20)~IC_(80))为0.023~0.403μg/mL。该研究所制备的抗原为进一步研制抗克百威单克隆抗体奠定基础。     

氯霉素人工免疫原的合成与鉴定

将氯霉素(CAP)进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS);采用混合酸酐(MA)法将CAP-HS与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫原BSA-CAP-HS和包被原OVA-CAP-HS,用红外(IR)、紫外(UV)、凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-CAP-HS免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,CAP-HS与BSA合成成功,其分子结合比为15.6∶1,获得了高价、敏感、特异的CAP pAb,为CAP残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

苯乙醇胺A人工抗原的制备与鉴定

为合成苯乙醇胺A人工抗原,并制备出鼠源苯乙醇胺A多抗血清,采用琥珀酸酐法改造苯乙醇胺A,应用活化脂法(DCC)和碳二亚胺法(EDC)与载体蛋白相连,合成人工免疫原苯乙醇胺A-BSA和检测原苯乙醇胺A-OVA,并用紫外扫描光谱法、凝胶电泳法(SDS-PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定偶联结果.结果显示,在紫外扫描光谱下,合成的免疫原在276 nm处出现最大吸收峰;SDS-PAGE电泳发现,免疫原出现明显的拖尾现象;按10 μg/只的剂量免疫小鼠,共免疫4次,每次间隔3周,最后1次免疫10 d后,断尾采血,经测定,得到的多抗血清的效价均达到1 ∶ 10 000,且1号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为536.8 ng/mL,与其他药物的交叉反应率均小于0.5％,具有很好的特异性.成功合成了苯乙醇胺A人工抗原,并得到了敏感性高、特异性好的多抗血清.