黄瓜胚状体途径再生体系的建立

【目的】建立黄瓜高频胚状体再生体系,为黄瓜遗传转化体系的完善奠定基础。【方法】以黄瓜品种津研四号、长春密刺、Q8和14-1为材料,研究不同基因型材料愈伤组织的诱导情况;分别取14-1的子叶、子叶节、下胚轴和成熟胚为外植体,研究不同外植体类型的愈伤组织和胚状体产生情况;以14-1子叶节为外植体,研究不同激素及其质量浓度配比对黄瓜胚状体诱导的影响。【结果】4个不同基因型中,欧洲温室型黄瓜种质14-1可诱导出胚状体。在4种外植体类型中,14-1的子叶节可以高效诱导出愈伤组织和胚状体,其诱导率分别为100.0%和34.1%。激素及其质量浓度组合也会影响胚状体的诱导,在愈伤组织诱导阶段,以MS+1.5mg/L 2,4-D为培养基对胚性愈伤组织的诱导效果最好,其对14-1子叶节的诱导率为100%;在分化培养阶段,MS+0.1mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.2mg/L IAA有利于体细胞胚的发生,14-1的出胚率为62.5%。显微形态观察发现,黄瓜体细胞胚发育过程包括球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶期胚等时期,这些胚可以发育成正常小植株。【结论】14-1的子叶节经诱导培养基MS+1.5mg/L 2,4-D和分化培养基MS+0.1mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.2mg/L IAA培养后,可高效产生胚状体,并可萌发成正常植株。     

黄瓜胚状体途径再生体系的建立

【目的】建立黄瓜高频胚状体再生体系,为黄瓜遗传转化体系的完善奠定基础。【方法】以黄瓜品种津研四号、长春密刺、Q8和14-1为材料,研究不同基因型材料愈伤组织的诱导情况;取14-1品种的子叶、子叶节、下胚轴和成熟胚为外植体,研究不同外植体类型的愈伤组织和胚状体产生情况;以14-1子叶节为外植体,研究不同激素及其质量浓度配比对黄瓜胚状体诱导的影响。【结果】4个不同基因型中,欧洲温室型黄瓜种质14-1可诱导出胚状体。在4种外植体类型中,14-1的子叶节可以高效诱导出愈伤组织和胚状体,其诱导率分别为100.0%和34.1%。激素及其质量浓度组合也会影响胚状体的诱导,在愈伤组织诱导阶段,以MS+1.5 mg/L 2,4-D为培养基对胚性愈伤组织的诱导效果最好,其对14-1子叶节的诱导率为100%;在分化培养阶段,MS+0.1 mg/L 2,4 D+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L IAA有利于体细胞胚的发生,14-1的出胚率为62.5%。显微形态观察发现,黄瓜体细胞胚发育过程包括球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶期胚等时期,这些胚可以发育成正常小植株。【结论】14-1的子叶节经诱导培养基MS+1.5 mg/L 2,4-D和分化培养基MS+0.1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L IAA培养后,可高效产生胚状体,并可萌发成正常植株。     

攸县油茶胚状体发生及其组织学观察

[目的]研究以攸县油茶(Camellia yuhsienensis Hu)成熟子叶为外植体的胚状体发生情况。[方法]以子叶为外植体,接种于MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT培养基上,诱导胚性愈伤组织。胚性愈伤组织块转接至以MS为基本培养基,添加不同浓度6-BA和NAA的激素组合的培养基上诱导产生胚状体。取不同发育阶段的组织块制作石蜡切片,进行组织学观察。[结果]成熟子叶块接种于诱导培养基MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT,15d左右开始出现胚性愈伤组织。胚性愈伤组织转接至培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA时胚状体诱导率最高,为87.78%;无激素培养基也能诱导胚性愈伤组织产生胚状体,但诱导率极低,仅为6.67%。组织学观察表明,胚性细胞由愈伤组织表面及其内部邻近的若干细胞分化而来,经过球形胚、心形胚、子叶形胚等不同发育阶段直至成熟胚状体。[结论]诱导胚性愈伤组织分化为胚状体的最佳培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA。     

银合欢组织培养研究初报

以银合欢(Leucaena leucocephla(Lamarck)de Wit)无菌实生苗子叶和胚轴切段为外植体,以MS为基本培养基,研究不同BA和NAA浓度组合对银合欢组织培养效果的影响。结果表明:愈伤组织诱导培养中,以子叶的培养反应性最好,其愈伤组织诱导率在各种组合中都达到100%,其中以附加0.1 mg/L NAA和2.5-7.0 mg/L BA效果最好;胚轴在添加0.1 mg/L NAA及3.0-4.5 mg/L BA的MS培养基上培养时愈伤组织诱导率较高。子叶愈伤组织在MS+3.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA的培养基中培养时芽分化率只有6.7%;胚轴愈伤组织则未能实现芽的分化。     

沙棘胚状体诱导分化技术研究

[目的]探究不同基因型、基本培养基、激素种类及激素浓度对沙棘胚性愈伤组织诱导和胚状体分化的影响,为体胚发生体系的建立提供科学依据。[方法]将中国沙棘和蒙古沙棘种子经5d暗培养后在(14L∶10D)h·d-1的光周期下培养15d,获得的无菌试验材料,并将种胚的各个结构为外植体进行胚性愈伤组织诱导,用子叶和下胚轴以L9(34)正交设计进行胚性愈伤组织培养条件优化以及胚状体分化诱导。[结果]试验范围内,中国沙棘种子培养的最佳培养基是1/2 MS;由中国沙棘和蒙古沙棘种子培养20d所得的无菌子叶连带0.2cm下胚轴是胚性愈伤组织和胚状体诱导分化的良好材料。[结论]最适合中国沙棘和蒙古沙棘胚性愈伤组织诱导的培养基为:1/3 MS+6-BA0.5mg·L-1+IBA 1.0mg·L-1,诱导率可达75.9%;诱导胚状体分化的最佳培养基为:1/3 MS+IBA 0.05mg·L-1+KT 0.1mg·L-1+6-BA 1.0mg·L-1,分化率可达66%。     

黑芝麻不同外植体离体培养研究

以黑芝麻无菌苗的下胚轴、幼根、子叶为外植体,以MS+2,4-D1.5mg/L+ZT0.5mg/L为愈伤组织诱导培养基;MS+6-BA2mg/L-IAA0.5mg/L为分化培养基;1/2MS+0.5mg/LNAA+IAA0.25mg/L为生根培养基进行培养.结果表明,幼根能产生少量愈伤组织,尚未分化出苗;子叶愈伤组织能分化出苗,但分化率低;下胚轴愈伤组织不仅可分化出苗(分化率为36%),而且可形成大量具有分化潜力的胚性愈伤组织,分化绿苗的频率可达67%.     

苜蓿胚性愈伤组织诱导及植株再生研究

以苜蓿5～7 d苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究培养基中不同激素和浓度配比对苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L愈伤组织诱导率达100%,且愈伤组织状态良好,增殖速度快。MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L为苜蓿胚性愈伤组织诱导的适宜培养基,诱导率为37.8%。胚性愈伤组织分化成苗培养基为MS+6-BA0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.02 mg/L+蔗糖10.0 g/L。     

外源激素对桃儿七愈伤组织诱导的影响

为了探讨外源激素对桃儿七愈伤组织诱导的影响,以桃儿七的胚及无菌苗的子叶和胚轴为材料,以MS为基本培养基,研究了3种不同激素配比对不同外植体愈伤组织诱导的影响。结果表明,以胚为外植体,在3.0 mg/L 2,4-D、0.5 mg/L KT和0.5 mg/L IAA组合处理的培养基中,诱导率达到39.5%;诱导子叶和胚轴形成愈伤组织的最佳激素配比为4.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L IAA;成熟胚比子叶和胚轴更易诱导愈伤组织的形成,诱导率分别提高了43.64%和315.79%,诱导效果最显著(P0.001);在接种前,用5mg/L 2,4-D溶液浸蘸子叶和胚轴可有效提高其出愈率。     

北柴胡幼根、子叶和下胚轴组织培养研究

研究了北柴胡幼根、子叶和下胚轴愈伤组织诱导、分化的条件。结果表明,MS+2,4-D1.0 mg/L+KT0.1 mg/L的培养基最适合于幼根、下胚轴和子叶愈伤组织的诱导,其中,幼根和下胚轴愈伤组织诱导率高于子叶;在B5+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.03 mg/L+CH 250 mg/L的培养基中,下胚轴和子叶愈伤组织的分化率最高;北柴胡试管苗生根培养基为1/2 MS+NAA0.5 mg/L。     

南方型紫花苜蓿Millennium组织培养及其再生

以南方型紫花苜蓿Millennium种子发育5~7 d无菌苗的子叶、下胚轴为外植体,对紫花苜蓿愈伤组织诱导和植株再生进行了研究。结果表明,在愈伤组织诱导中,下胚轴为最佳外植体材料,出愈率随着2,4-D质量浓度的增加呈明显的升高趋势,最佳愈伤组织诱导培养基为2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,诱导率达到100%。紫花苜蓿诱导最佳愈伤组织的分化培养基为MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L,下胚轴愈伤组织分化率达到58%,子叶愈伤组织分化率达到40%。将苗切下转接到1/2 MS+20 g/L蔗糖质量浓度时,培养6 d即可诱导生根,诱导生根率达到100%,完成植株再生仅需60~70 d。成功地建立了南方型Millenni-um紫花苜蓿子叶和下胚轴的离体培养再生途径,并获得了再生植株。     

圣女樱桃番茄再生体系的研究

以圣女樱桃番茄为试材,通过对其子叶和下胚轴的离体培养,研究不同培养基和激素浓度及配比对愈伤组织诱导、不定芽分化及生根诱导的影响,以筛选最佳再生体系,并研究VC对番茄组培过程中褐化现象的影响。结果表明:诱导圣女樱桃番茄愈伤组织的最适培养基为MS+(0.2~0.4)mg/L IAA+2.0mg/L6-BA,不定芽分化的最适培养基为MS+0.1mg/L IAA+(1.0~3.0)mg/L 6-BA,诱导生根的最适培养基为1/2MS+0.1mg/L NAA;子叶为最佳外植体,其不定芽的分化速度、分化率及生长情况均优于下胚轴;在愈伤组织诱导培养基中添加10mg/L VC,能有效抑制褐化的发生。     

番茄宝大906高频再生系统的建立及其潮霉素选择压的测定

以番茄宝大906品种为试材,通过对其子叶、下胚轴的离体培养,研究了不同6-BA/NAA植物生长物质浓度配比对愈伤组织诱导、不定芽再生及生根的影响.另外,还测定了潮霉素选择压.结果表明:以子叶和下胚轴为外植体诱导愈伤组织的最适培养基分别是MS+ 2.0 mg,/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA和MS+ 2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/LNAA;诱导芽分化的最适培养基均为:MS+ 2.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,子叶的芽分化率高达93.5％;不定芽适宜的生根培养基为MS+0.1 m g/L NAA;子叶、下胚轴的潮霉素选择压分别以20、40 mg/L为宜.     

豇豆愈伤组织诱导的初步研究

研究了不同浓度的生长素(NAA、2,4-D)和细胞分裂素(6-BA、KT)对豇豆[Vigna unguiculata(Linn.)Walp.]花荣下胚轴和子叶愈伤组织诱导的影响。结果表明,子叶较下胚轴更容易诱导出愈伤组织;子叶切片在MS+3.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT中愈伤诱导率最高,为95.83%,下胚轴茎段在MS+3.0 mg/L2,4-D+0.1 mg/L 6-BA中愈伤诱导率最高,为88.89%。此外,2,4-D与KT组合可诱导子叶产生胚状体。     

通过体细胞胚发生快繁优良刺五加植株的技术

以刺五加合子胚及无菌实生幼苗为试验材料,研究通过直接和间接体细胞胚发生方式,快速获得大量再生植株的技术。结果表明:直接诱导体细胞胚的培养基为MS+2,4-D1.0 mg.L-1,以胚根或子叶为外植体诱导胚性愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D0.5 mg.L-1+BA1.0 mg.L-1,下胚轴为外植体诱导胚性愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D0.5 mg.L-1+BA2.0 mg.L-1。胚性愈伤组织经悬浮培养可发育成成熟体胚,快速获得刺五加幼苗。     

孜然芹下胚轴胚性愈伤组织的诱导及再生植株的研究

以孜然芹下胚轴为外值体,研究了在不同种类和浓度激素处理下产生愈伤组织,经继代增殖成胚性愈伤组织,在分化培养基上,胚性愈伤组织进一步分化,得到了再生植株.结果表明:下胚轴在光照时间16 h/d,MS+2,4-D 0.5 mg/L的愈伤组织诱导启动培养基中,20 d愈伤诱导率达100;,继代培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L培养基中,增殖率达80;,在MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基中光照16 h/d培养30 d,可见再生植株,再生率为18.75;.     

苏子组织培养技术研究

以贵州省农业科学院引进的长顺县苏子为实验材料,探讨了培养基中不同激素配比处理、不同外植体取材对愈伤组织、胚状体诱导及再生植株分化的影响。实验结果表明,最佳培养基为MS+IAA(0.25 mg/L)+6-BA(1.5 mg/L);最适宜的外植体为下胚轴。     

花生再生体系的建立

取4 d龄花生(鲁花14)的胚轴、小叶和成熟子叶为外植体,对其进行离体组织培养研究。结果表明:在培养1个月后,胚轴在MS+8.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/LNAA培养基上可以诱导产生丛生芽,诱导率达到80%,平均每个外植体可以产生10~20个芽点;小叶在MS+5.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/LNAA培养基上能诱导出胚性愈伤组织,进一步诱导分化形成芽点并伸长;诱导出的丛生芽接种在MS+5mg/L6-BA+1.0 mg/LNAA+50.0 mg/LAD的培养基上可以扩繁和伸长;花生成熟种子的子叶在MS+20 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT+1.0mg/LAgNO3培养基上可直接诱导形成颗粒状、表面光滑、干燥的体细胞胚,每个外植体可以诱导出8个左右的体细胞胚。     

新疆白鲜愈伤组织生长动态研究

[目的]研究了新疆白鲜愈伤组织诱导及其生长动态,为从中提取药物活性成分奠定基础,同时是解决资源贫乏的一条新途径。[方法]以幼叶、真叶、下胚轴为外植体,研究不同培养基、激素配比、碳源对新疆白鲜出愈率的影响以及愈伤组织生长动态变化。[结果]幼叶在激素浓度为6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L的MS和B5培养基出愈率分别为83.0%和93.3%,且在低盐B5培养基上诱导率较高;不同外植体幼导率为子叶>下胚轴>真叶,子叶的诱导较快,诱导率较高;蔗糖作为碳源时效果较好,诱导率为100%;愈伤组织生长的倍增曲线揭示继代培养时,第5~17天为快速增长期,且在暗处生长较好,继代周期20 d较为合适;不同激素浓度对愈伤组织的质量亦有较大的影响。[结论]y1y、2激素组合诱导出的愈伤组织虽较致密,但在体胚发生中均未达到理想效果,也未能进一步分化。将其转入含有激动素KT 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L的MS培养基中,发现愈伤组织在光下变黄绿色,生长也较紧凑,可诱导出胚状体。     

葡萄胚珠诱导成苗的研究

通过对葡萄几个品种胚珠愈伤组织的诱导、再分化,以胚状体发生途径实现植株再生。结果表明:以葡萄的胚珠为外植体,在附加不同浓度的2,4-D与6-BA的MS、B5和NN-1969培养基上培养,愈伤组织诱导以NN+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.0mg/L培养基最佳,诱导率为84.1%,胚性愈伤组织诱导率为79.5%;将胚性愈伤组织置于含NAA0.03mg/L和6-BA0.5mg/L的NN培养基中,胚状体诱导率为6%～15%;胚状体在无激素MS培养基中的成苗率为0%～20%。     

mzhy@mail.hebau.edu.cn

 以陆地棉冀无2031无菌苗下胚轴为外植体，在MS中附加激素0.1mg/L IAA+0.1mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT的培养基上诱导出愈伤组织。选择疏松愈伤组织继代到附加0.1mg/L ZT的培养基中，经2~3个月的继代培养诱导出颗粒状疏松胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在无激素、每升加2g谷氨酰胺和0.5g天门冬酰胺的胚性愈伤增殖萌发培养基上培养2个月左右，可陆续形成不同时期的体胚苗。对冀无2031不同时期的体细胞萌发后的体胚苗进行观察，发现了真叶畸形苗、子叶节生根胚、胚轴侧生根胚、腋芽丛生苗和以腋