用于菊花品种核型分析的根尖压片技术研究

根尖压片技术是研究植物中期染色体数目和形态的一种重要方法。以2个大菊品种的根尖为材料,以典型中期分裂相的数目、中期染色体的分散程度、聚缩程度和中期染色体的清晰性为衡量制片效果优劣的标准,通过对比不同预处理药剂、取材时间、预处理温度、预处理时间长短以及解离时间条件下的制片效果,得出如下结论：当根长至1 cm时,在9：00~10：00取根,用饱和对二氯苯溶液在4℃条件下预处理4 h,然后用卡诺固定液固定22~24 h,用1 mol/L的HCl60℃下解离10 min,能够得到数量较多、染色体分散良好、染色体形态清晰以及染色体长度适中的中期分裂相。     

根尖压片法制备树莓染色体标本的研究

以红泡刺藤(R.niveus)、栽秧泡(R.ellipticusvar.obcordatus)和插田泡(R.coreanus)绿枝或硬枝扦插生根的根尖为材料,通过取材时季与扦插环境气温,8-羟基喹啉、秋水仙素和对二氯苯3种药剂在不同的温度下预处理不同时间,混合酶液和盐酸在不同温度下解离,醋酸洋红、卡宝品红、席夫试剂和铁矾-苏木精各染色剂染色压片等的对比研究,并以细胞中有丝分裂中期分裂相的数目、染色体的清晰性、分散程度和聚缩程度以及染色体的形态为衡量指标,探索出适于树莓属植物核型分析的根尖压片方法是:当根尖长至1~2 cm、扦插环境气温17~23℃时取材,卡诺氏固定液I低温固定24 h,用0.002 mol/L 8-羟基喹啉在0~4℃下预处理24 h,再用1 mol/L HCl(60±1)℃恒温解离4~7 min,最后用卡宝品红染色压片能获得效果好树莓染色体标本,该染色体标本完全适用于核型分析。     

西瓜染色体压片技术改进研究

以西瓜根尖和花蕾为试验材料,进行了不同取样时间、不同预处理、不同解离时间处理后压片观察染色体试验,确定了西瓜根尖和花粉母细胞染色体观察过程中的取样、预处理、固定、解离时间以及染色体压片观察中的主要参数和方法,建立了一套简便快捷的观察西瓜染色体的系统操作规程。     

一种改进的大麦根尖染色体压片法及其应用

以大麦根尖为实验材料,采用改良的苯酚品红为染色液,在《遗传学实验》的基础上探索适宜的预处理时间、解离时间和染色时间,省略了纤维素酶和果胶酶处理步骤,形成了一套快速、简单的大麦根尖压片方法,该方法获得的染色体图像清晰,便于计数,可用于大麦倍性鉴定和染色体变异方面的研究。     

药用植物刺五加栽培技术

刺五加别名刺拐棒、刺老牙等,为五加科多年生落叶灌木,主产地黑龙江小兴安岭,在吉林、辽宁、河北、山西等省也有分布.其树皮可作五加皮入药,民间多用根及根茎,其茎、叶、果实部分也都有医疗效果.近些年来研究证明,刺五加有类似人参作用,属于"适应原"性药物.其树皮味辛,性温,有祛风除湿、强筋骨之功能;根及根茎有扶正固本、益智安神、健脾补肾等功效.     

一种简便的根尖压片法

目前流行的各种根尖压片方法一般都包括以下六个步骤:种子催芽、予处理、固定、离析、染色和压片。其中离析时间的长短和条件对制片效果的影响比较大。最近根据远藤隆博士在美国堪萨斯州立大学植病系工作期间和来华访问时所推荐的方法,并参照张天定的有关介绍,经过几次反复试阶,我们已成功地将固定和离析两个过程寓于一个步骤之中,这样一     

药用植物刺五加组织培养关键技术的研究

刺五加为五加科植物刺五加[AcanthopanaxSenticosus(Rupr.etMaxim./farms)]的根及根茎。含有各种刺五加甙。近年来新的研究进展表明:刺五加能有效地抗肿瘤、抗疲劳、抗衰老,并对心血管有很好的保护作用,还能提高免疫力,是极其珍贵的药物资源。就目前临床供药而言,主要从刺五加根和茎中提取。资源消耗与日俱增,已使刺五加植物濒临灭绝的危险,为实现其永续利用,建立组织培养技术能在短期内繁殖大量苗木,对保护这一珍稀植物物种和合理开发利用这一药源具有重要的现实意义。选用刺五加的叶片、茎尖、当年生根为材料,研究了激素对刺五加愈伤组织继代培养、不定芽发生及生根的影响。结果表明:培养基中激素配比对刺五加愈伤组织的分化和诱导生根有很大影响。刺五加组织培养适宜的分化培养基为BZ NAA3.0 6-BA2.0,适宜的生根培养基为BZ IBA0.2。刺五加愈伤组织再分化能力主要受外植体类型及愈伤组织继代保存时间的长短影响。来源于叶片的愈伤组织的分化能力最强,愈伤组织经30d继代培养后,愈伤组织分化率达73.62%,再生芽分化系数为7.5,并随愈伤组织继代保存时间的延长,愈伤组织的分化能力逐渐降低。     

西洋参根尖染色体的核型分析

本文进行了西洋参根尖染色体的计数，并对其染色体核型进行了分析研究。结果表明，其染色体数目为４８条。按Ｌｅｖｅｎ等的分类原则，其核型为２ｎ＝２ｘ＝２０ｍ＋２ｂｓｍ＋２ｓｔ，属于Ｓｔａｂｂｉｎ核型的“２Ｂ”型。     

药用植物灵菊七的染色体核型研究

[目的]研究药用植物灵菊七(Gynura medica)的细胞染色体特点,并对其染色体核型进行分析。[方法]以灵菊七幼苗茎尖为材料,从上午6:30～10:30,每隔20 min取材一次,采用常规制片技术制片,显微镜观察中期分裂相细胞,对染色体完全分散开的细胞进行染色体计数及核型分析。[结果]在染色体分散良好的102个中期分裂相细胞中,有96.08%含20条染色体,3.92%含40条染色体;同时结果表明上午7:50～9:30取材较佳。[结论]G.medica为二倍体植物,体细胞含有10对染色体,核型公式为2n=2x=20 m,染色体核型属于1A型。该研究结果为国内首次报道。     

药用植物刺五加组织培养及快速繁殖的研究

选用刺五加的茎尖为外植体材料,采用正交试验方法研究了激素对刺五加愈伤组织分化、继代培养、不定芽发生及生根的影响。试验结果表明,刺五加的最佳初分化培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+KT0.8mg/L+NAA0.10~0.15 mg/L,继代芽分化培养基MS+6-BA0.5 mg/L+IAA1 mg/L+IBA0.8 mg/L,生根培养基为1/2MS+IBA0.4 mg/L     

刺五加内生真菌分离及分布研究

采用平板粘插法分离刺五加内生真菌,并对内生真菌的形态进行鉴定,比较不同产地刺五加内生真菌的分布情况。结果表明,从5地区刺五加体内共分离出75株内生真菌（分属于12个属及未产孢类群）。     

刺五加的同工酶与遗传分化的研究(Ⅰ)--花丝长度不同的刺五加植株同工酶电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对花丝长度不同的刺五加植株进行了6种同工酶比较分析.结果显示,花丝长度不同的刺五加在酸性磷酸酶(ACP)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乙醇脱氢酶(ADH)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)、细胞色素氧化酶(CCO)和过氧化物酶(POD)等6种同工酶酶谱上表现出不同程度的差异,由此对花丝长度不同的刺五加的遗传分化做出推测.     

刺五加GAPDH 基因全长cDNA 的克隆与生物信息学分析

采用cDNA末端RACE技术,从刺五加叶片中克隆到GAPDH基因cDNA的全长序列,并运用生物信息学方法对该基因的cDNA序列、保守区、氨基酸序列、亲缘关系等特征进行分析,并预测其编码蛋白质的结构和功能.研究结果表明,刺五加GA PGH基因的cDNA全长为1 437 bp,开放阅读框全长为1 023 bp,编码一个具有340个氨基酸残基的蛋白,蛋白分子质量为37.070 ku,理论等电点(pI)为7.71.刺五加GAPDH蛋白不存在跨膜结构域,定位于细胞质中,属于亲水蛋白.     

刺五加的同工酶与遗传分化的研究(Ⅱ)--花丝长度不同的刺五加类群的遗传多样性

该文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测了花丝长度不同的三个刺五加类群的异柠檬酸脱氢酶(IDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、过氧化物酶(POD)、细胞色素氧化酶(CCO)和酸性磷酸酶(ACP)五种同工酶型.结果显示,在多态位点0.99标准下,刺五加多态位点比例(P)为0.37,平均每个位点的预期杂合度(He)为0.320 0～0.387 7,平均每个位点的实际杂合度(Ho)为0.270 3～0.359 9,刺五加类群内基因多样度(Hs)为0.338 7,类群间基因多样度(Dst)为0.035 6,类群间基因分化系数(Gst)为0.095 1,刺五加三个类群的遗传相似性(I)为0.909～0.941,遗传距离(D)为0.059～0.091.初步推测刺五加是由雌雄同株的两性花逐步向雌雄异株的单性花分化,L-刺五加将进化成单雄性,S-刺五加将进化成单雌性.其遗传分化的时间约为29.5～45.5万年.     

刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析

[目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1 099 bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋(alpha helix),占46.72%;53个延伸链(extended strand),占14.48%;27个β折叠(beta turn),占7.38%;115个无规则蜷曲(random coil),占31.42%。第262～271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。     

刺五加ATP合酶β亚基基因的克隆与序列分析

[目的]克隆刺五加叶绿体的ATP合酶β亚基cDNA并对其进行生物信息学分析。[方法]根据已知物种叶绿体ATP合酶β亚基基因的序列,设计1对同源引物,通过RT-PCR扩增得到刺五加ATP合酶β亚基cDNA,并对其进行序列比对及结构预测分析。[结果]RT-PCR扩增获得了长1099bp的刺五加ATP合酶β亚基cDNA,该基因编码366个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,刺五加ATP合酶β亚基基因编码的氨基酸与水稻的同源性最高,达96.41%。其二级结构中含有171个α螺旋（alpha helix）,占46.72%;53个延伸链（extended strand）,占14.48%;27个β折叠（beta turn）,占7.38%;115个无规则蜷曲（random coil）,占31.42%。第262～271位氨基酸为ATP合酶β亚基的标志性位点。整个多肽链无明显的疏水区域,初步认定为亲水性蛋白。[结论]该试验克隆得到的ATP合酶β亚基基因为叶绿体ATP合酶β亚基基因,为研究刺五加能量代谢对植物次生代谢的影响及了解植物ATP合酶的结构与功能提供了必要的信息。     

刺五加的形态解剖与遗传分化的初步研究

报道了3类花丝长度不同的刺五加植株之间的部分形态学及解剖学特征。结果表明；伴随异长雄蕊特征的其它表现在于果实形状、花丝角度、导管长度、导管长宽比等。并对花丝长度不同的刺五加的遗传分化做出了推测。     

刺五加导管特征及其与刺五加苷B·E含量相关性的分析

[目的]分析不同产地刺五加导管特征及其与刺五加苷B、E含量的相关性。[方法]以不同产地刺五加的1年生根、茎为试材,石蜡切片法制片,测定导管周长、面积,HPLC法测定刺五加苷B、E含量。[结果]刺五加根中导管平均面积、周长分别为986.89μm2、141.08μm,茎中导管平均面积、周长分别为362.48μm2、88.46μm,不同产地刺五加根、茎中导管的周长、面积差异显著。刺五加茎中刺五加苷E含量与茎中导管面积呈显著相关。[结论]导管面积、周长可以作为鉴定刺五加产地来源的指标,茎中导管面积可作为茎中刺五加苷E含量的早期鉴定指标。     

刺五加多向耐药性转运蛋白基因的克隆及其表达对皂苷含量的影响

利用简并引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增获得长度为693 bp的刺五加(Eleutherococcus senticosus)多向耐药性(pleiotropic drug resistance,PDR)转运蛋白基因,GenBank登录号为KC473536,其编码的231个氨基酸的蛋白属于PDR转运蛋白的核苷酸结合结构域。氨基酸序列与毛果杨(Populus trichocarpa)、蓖麻(Ricinus communis)和水稻(Oryza sativa)的PDR氨基酸序列一致性分别为8874%,9004%和8831%。RT PCR法检测PDR在刺五加不同生长发育时期和不同器官中表达情况和分光光度法测定刺五加总皂苷含量的结果显示: 刺五加PDR基因在整个生长期中均有表达,与皂苷在整个生长期中均有合成的特点相符,但两者的相关性未达显著水平。PDR基因在叶片和叶柄中高表达的特点与刺五加皂苷仅存在于叶中的特点相符,两者间存在显著的正相关关系(P<005)。