苦马豆素对SD大鼠血液生化指标的影响

为探讨SD大鼠苦马豆素亚急性中毒模型的复制时间及苦马豆素对大鼠血液生化指标的影响,进一步揭示苦马豆素毒性作用机理及其中毒早期诊断和防治提供试验模型,64只SD大鼠随机分为4组,即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组。将甘肃棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加15%（含苦马豆素0.03‰）、Ⅱ组添加30%（含苦马豆素0.06‰）、Ⅲ组添加45%（含苦马豆素0.09‰）的比例制作混合饲料,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒后14,35,56,77d每次每组随机采集4只SD大鼠血液,用半自动生化分析仪测定苦马豆素对BUN、CR、ALB、TP、GLU、TG、TC含量及AST、ALT活性的影响。结果显示,GLU、BUN、CR、ALB含量及AST活性呈持续性升高（P〈0.05或P〈0.01）;TG、TP含量分别在攻毒后35,56d降低后又升高（P〈0.05或P〈0.01）,TC含量和ALT活性无明显变化（P〉0.05）。结果表明,中毒剂量与国外报道基本一致,但中毒时间存在较大差异;不同浓度苦马豆素对SD大鼠血液生化指标有显著影响,且具有一定的时间效应和剂量效应关系,长期低剂量摄入苦马豆素可引起动物机体不同程度的肝、肾损伤。     

苦马豆素对SD大鼠血液学指标的影响

将64只雌性SD大鼠随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组16只.试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂含甘肃棘豆干草粉15％(含苦马豆素0.03‰)、30％(含苦马豆素0.06‰)、45％(含苦马豆素0.09‰)的全价饲料,对照组饲喂全价饲料.试验期间,每天观察受试大鼠的临床表现,每周测定体质量1次.在攻毒5、9、13、17周后采血,运用全自动血液细胞分析仪测定各组大鼠血液WBC、LYM、MO、NE、RBC、HGB、HCT、MCV、RDW、PLT及MPV的变化.结果显示,与对照组相比,试验组WBC、MO、NE、RDW、MPV升高,LYM、RBC、HGB、HCT降低,MCV先降低后升高,PLT先升高后降低,部分组间差异显著或极显著(P＜0.05或P＜0.01).结果表明,长期低剂量摄食苦马豆素可诱发SD大鼠贫血,但可提高机体免疫力和骨髓造血能力.     

甘肃棘豆中苦马豆素的分离与鉴定

4.5kg甘肃棘豆用 2 0mL/L稀乙酸和氯仿的混合溶液 (5∶4)浸提 48h,过滤 ,分层。取酸水层用氯仿萃取 ,弃去氯仿层以除杂质 ,然后酸水层用氢氧化钠调pH为 9～1 1 ,依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇部分经硅胶柱层析 ,氯仿∶甲醇∶氨水∶水 (70∶2 6∶1 0∶1 0 )液洗脱分离、纯化得到一白色针状结晶体 ,TLC鉴定分析初步确定为苦马豆素 ,提取率为3 .2 0 μg/g。正丁醇部分苦马豆素含量气相色谱测定为 1 3 .1 4 8%± 0 .852 % ,折算全草苦马豆素含量为 0 .0 69%。     

冰川棘豆生物碱分析及苦马豆素的分离、鉴定

冰川棘豆干粉,经甲醇提取,盐酸酸化,酸水液用氯仿萃取数次,NaOH调pH至9～10,依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取.称重表明生物碱多集中在正丁醇组分,且以大极性生物碱为主.薄层层析检查结果显示,氯仿组分有10种生物碱,乙酸乙酯组分有7种生物碱,正丁醇组分有5种生物碱.将正丁醇组分经硅胶柱层析,乙酸乙酯一甲醇系统梯度洗脱,每30～50 mL收集1份,薄层层析监测,同类合并.Ehrlich＇s试剂显色明显段油浴升华,得到白色针状结晶,与苦马豆素标准样品进行薄层层析对照,其斑点形状、颜色相同,Rf值相近.通过熔点和IR、MS、^1HNMR、^13CNMR等鉴定其化学结构,为苦马豆素.     

宽苞棘豆生物碱提取与毒性试验

采用醇类生物碱系统提取法,从宽苞棘豆中分离出A 、B、C、D四种组分,经薄层层析检测,并与苦马豆素标准品对照,结果表明B、C组分含有吲哚里西啶生物碱--苦马豆素,A、D组分不含有苦马豆素.将C组分按1 g/kg和2 g/kg分别家兔灌胃,结果家兔没有表现出明显的临床中毒症状和病理变化.     

不同地区黄花棘豆营养成分与苦马豆素含量的比较

试验对青海湟中黄花棘豆和甘肃天祝黄花棘豆盛花期常规营养成分、主要矿物质元素含量进行测定;用气相色谱法测定苦马豆素含量,并进行显著性差异比较。结果表明:甘肃天祝黄花棘豆中水分为3.0%,粗蛋白为17.30%,粗脂肪为2.47%,粗纤维为239g/kg,灰分为10.4%,钙0.527%,磷0.23%,中性洗涤纤维为39.8%,酸性洗涤纤维为26.5%;青海湟中黄花棘豆中水分为3.3%,粗蛋白为14.30%,粗脂肪为1.60%,粗纤维为245g/kg,灰分为9.8%,钙0.552%,磷0.14%,中性洗涤纤维为40.3%,酸性洗涤纤维为28.1%。青海湟中黄花棘豆苦马豆素含量极显著高于甘肃天祝黄花棘豆(P0.01)。甘肃天祝黄花棘豆粗蛋白含量极显著高于青海湟中黄花棘豆(P0.01)、粗脂肪、总磷含量显著高于青海湟中黄花棘豆(P0.05),甘肃天祝黄花棘豆粗蛋白含量超过上等青干苜蓿,青海湟中黄花棘豆粗蛋白含量接近中等青干苜蓿,是潜在的高蛋白质牧草资源。     

黄花棘豆不同生长时期苦马豆素含量的分析

采用气相色谱法对黄花棘豆(Oxytropis ochrocephala)不同生育期的根、茎、叶、花、果实及地上部分全草中主要有毒成分苦马豆素的含量进行检测,分析苦马豆素的变化规律,调查并计算单位面积黄花棘豆地上全草中苦马豆素的产量。结果表明,黄花棘豆果实中苦马豆素含量最高,达到107.787 mg·kg-1;地上部分全草中苦马豆素含量在结果期最高,达到48.19 mg·kg-1。从4个生长时期黄花棘豆不同部位苦马豆素含量平均值来看,果实＞花＞叶＞茎＞根;从地上部分全草中苦马豆素含量来看,结实期＞盛花期＞枯萎期＞孕蕾期,样地中黄花棘豆地上部分全草苦马豆素产量也符合此规律。     

冰川棘豆化学成分系统预试及生物碱成分薄层色谱分析

本试验采用植物化学成分系统预试法、生物碱系统提取法和薄层色谱技术对冰川棘豆地上部分全草的化学成分,特别是生物碱成分进行了薄层色谱分析。结果表明冰川棘豆含有生物碱、氨基酸和蛋白质、有机酸、酚类和鞣质、多糖及甙类、皂甙、甾体、香豆素、萜类以及蒽醌类。不含挥发油、黄酮体、氰甙和脂肪族硝基化合物;5 000 g冰川棘豆干草粉经醇类溶剂提取得总浸膏312.0 g,再经酸化、碱化处理,收集碱水液依次用氯仿、乙酸乙酯和正丁醇分段萃取,分别得氯仿部分0.5 g,乙酸乙酯部分5.4 g,正丁醇部分52.0 g,初步表明冰川棘豆生物碱主要集中在正丁醇提取部分,以强极性生物碱为主;各部分生物碱提取物经薄层层析分析,结果表明氯仿部分至少有9种生物碱,乙酸乙酯部分至少有11种,正丁醇部分至少有4种。经与苦马豆素标准样品对照,证明三部分提取物均含有苦马豆素。     

氯化汞对SD大鼠组织损伤的病理学研究

将24只SD大鼠被随机分为4组,即对照组(饮用蒸馏水)、低剂量汞组(HgCl250 mg/L)、中荆量汞组(HgCl2100 mg/L)、高剂量汞组(HgCl2200 mg/L),采用自由饮水染毒,染毒时间为21 d.期间记录大鼠体质量及临床症状,染毒结束后采集心、肝、脾、肺、肾组织,称重并制作石蜡切片观察其病理组织学变化.结果显示,各染毒组大鼠体质量增长均低于对照组,部分组间差异显著(P<0.05);与对照组相比.中、高剂量染毒组大鼠肾脏、脾脏、肺脏和大脑脏器系数差异显著(P<0.05);光学显微镜观察各染毒组大鼠肝细胞肿胀、肝细胞索紊乱、中央静脉淤血;肾小管上皮细胞肿胀、变性,管腔内有脱落的上皮细胞或溶解崩裂的细胞碎片,肾间质有红细胞积聚;心脏、脾脏、肺脏可见大量红细胞积聚,而大脑未见明显异常的病理学变化.结果表明,低剂量汞暴露对SD大鼠生长发育具有明显抑制作用,且能引起机体各组织器官广泛性病理损伤.     

甘肃棘豆（Oxytropis kansuensis）毒性生物碱研究

采用生物碱系统撮法，从甘肃棘豆（Oxytropis kansuensis)中分离出A，B，C，D等4种生物碱组分，经体外血清－a甘露糖苷酶活性抑制试验和小鼠口服服毒性试验，证明C，D组分具有毒性，D组分经质谱和红外光谱分析鉴定为8－甲基－1－羟基吲哚兹定醇。     

甘肃棘豆对家兔血液生化指标的影响

将18只健康成年家兔随机分为3个组,每天分别按每千克体重1、5、10 g剂量饲喂甘肃棘豆,并在试验前及试验后每隔14 d测定血液生化指标,探索甘肃棘豆对实验家兔的毒性.结果表明,在试验第18天Ⅲ组1只怀孕母兔流产,Ⅱ和Ⅲ组试验家兔在第35天开始出现甘肃棘豆中毒症状,I组试验家兔在整个试验期间没有出现异常表现;3个试验组...     

甘肃棘豆抗肿瘤活性成分的筛选

用甘肃棘豆提取物中乙酸乙酯极性部位、水相部位以及生物碱和非生物碱部位，对荷S180和H22肿瘤小鼠进行了体内抗肿瘤试验。结果，试验4个样品中，非生物碱部位没有抗肿瘤活性，乙酸乙酯部位和水相部位对S180和H22均具有一定的抑制作用，但作用都不及生物碱部位强；各试验组小鼠胸腺、脾和体重变化都不明显。结果表明，各样品试验用剂量对小鼠均无毒性反应。     

甘肃棘豆内生真菌种群多样性

将采集于青海省祁连县甘肃棘豆的茎和叶部表面消毒后分别置于黑暗和光照条件以及PDA和BDA 2种培养基上进行内生真菌分离纯化,采用形态学和分子生物学分析技术鉴定种属,并计算多样性指数。结果显示,629块植物样品中共分离到内生真菌433株,分属9个科15个属28种,不同的培养条件下优势菌属不同;多样性指数计算结果显示,香农-维纳指数（H）为1.99,均匀度指数（E）为0.60,辛普森指数（D）为0.257。结果表明,采集于青海省祁连县的甘肃棘豆内生真菌多样性比较丰富,可为今后深入探讨甘肃棘豆内生真菌遗传多样性奠定基础,并为产苦马豆素目标菌株的筛选,提供丰富的内生真菌后备菌株。     

提高玉树地区黄花棘豆种子发芽率试验研究

采用预冷、细沙和砂纸摩擦、热水和浓硫酸浸种共4种处理方法进行破除黄花棘豆种子休眠试验,结果表明,4种处理均可显著提高黄花棘豆种子的发芽率,其中砂纸摩擦方法简单、效果最佳,其发芽势和发芽率分别从8.2%和10.7%提高到51.9%和58.6%.     

甘肃棘豆黄酮抗氧化活性及免疫活性的研究

为研究甘肃棘豆黄酮的抗氧化及免疫活性,试验通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除率测定其抗氧化活性,通过测定不同浓度甘肃棘豆黄酮对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力、白细胞介素2（IL-2）和免疫球蛋白G （IgG）抗体形成的影响研究其免疫活性。结果显示,甘肃棘豆黄酮对DPPH自由基清除率最高为32.23%,略高于维生素E （28.55%）,低于维生素C （97.05%）;对超氧阴离子自由基清除率最高为80.03%,高于维生素E （69.70%）,低于维生素C （98.69%）;对羟基自由基清除率最高为30.39%,低于维生素C （98.98%）、略低于维生素E （32.57%）。在小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验中,随着甘肃棘豆黄酮溶液浓度的提高,脾脏淋巴细胞相对增殖率也提高,当其浓度为200 μg/mL时,小鼠脾脏淋巴细胞的增殖率为23.40%;200 μg/mL甘肃棘豆黄酮组IL-2水平极显著高于对照组（P<0.01）,50和100 μg/mL甘肃棘豆黄酮组与对照组无显著差异（P>0.05）;各甘肃棘豆黄酮组IgG抗体水平均极显著高于对照组（P<0.01）,其中,50 μg/mL甘肃棘豆黄酮组极显著高于100和200 μg/mL甘肃棘豆黄酮组（P<0.01）,100 μg/mL甘肃棘豆黄酮组极显著高于200 μg/mL甘肃棘豆黄酮组（P<0.01）。综上所述,甘肃棘豆黄酮具有较好的抗氧化活性及免疫活性。     

迈士通防除黄花棘豆的药效试验

对迈士通防除黄花棘豆的效果进行了试验。结果表明,迈士通药剂的2种处理在施药30 d和60 d后对草原黄花棘豆的防控效果较明显,均达到70%以上。尤其是迈士通500 mL/hm2处理对草原黄花棘豆的防除效果为80%以上。2种浓度药剂均对牧草安全,可作为防除黄花棘豆的有效药剂推广使用。     

刚察县哈尔盖乡甘肃棘豆调查与灭治

哈尔盖乡冬春草场上，甘肃棘豆平均密度为８０．８株丛／ｍ￣２，平均盖度为６１．３％，空间分布为集群型（Ｓ￣２＞ｍ），其株丛平均直径与根直径呈显著的正相关（Ｐ＜０．０５），根直径、营养枝数量、生殖枝数量和株丛平均直径与根长之间呈极显著的正相关（Ｐ＜０．０１）。利用草甘膦灭除１６７５ｈｍ￣２，平均灭效达９５．３％，取得了显著的生态和经济效益。