抗BVDV卵黄抗体的制备

采用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)免疫产蛋母鸡,然后用水稀释法成功地从卵黄中分离出抗BVDV免疫球蛋白(抗-BVDV IgY)。建立起测定鸡蛋中特异性抗BVDV活性的间接ELISA方法,并采用此方法检测每次免疫后第10天的抗体滴度。结果表明,蛋鸡在首次免疫后第10天,卵黄中可以检测到抗-BVDV IgY;5次免疫后,抗体效价达到1:6400,半年后仍能维持在该水平。     

抗隐孢子虫卵黄抗体制备及间接ELISA方法建立

用纯化的隐孢子虫卵囊,经反复冻融、冰浴超声波处理制备免疫抗原,免疫产蛋鸡,收集免疫后的鸡蛋,采用水稀释二步硫酸铵法纯化IgY抗体,用棋盘滴定法建立的间接ELISA方法测得IgY抗体的效价为1∶12 800,经ELISA检测,该抗体特异性强、重复性好,可用于隐孢子虫抗体检测及流行病学调查。     

抗α-INF卵黄抗体的制备与鉴定

用人抑制素 ( 1 -2 6 )Tyr.Gly与KLH连接作免疫原 ,免疫本地良种母鸡 ,旨在获得大量抗抑制素卵黄抗体 (eIgY)。实验中 ,收集鸡蛋 ,观察了血清及卵黄中特异性抗体的应答 ,结果经免疫的鸡有免疫应答 ,所产卵的卵黄中可检出大量的有高度活性的抗体。综合运用pH值 ,非球蛋白沉淀法和球蛋白沉淀法 ,制得纯度较高的抗抑制素eIgY。采用阻断ELISA法证实所获得的eIgY具有高度的特异性。用eIgY被动免疫未成年昆明鼠 ,子宫重量明显增加。由此得出结论可以用鸡做生物反应器大量生产抗抑制素抗体 ,用于被动免疫家畜来提高家畜繁殖率     

抗牛多杀性巴氏杆菌高免卵黄抗体IgY的制备及间接血凝检测方法的建立

本研究通过自制牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋鸡,采用卡拉胶结合硫酸铵沉淀法提取卵黄抗体IgY,并采用间接血凝方法检测抗体效价。结果表明,抗原致敏红细胞的最佳浓度是800μg/mL,免疫后第7周抗体效价达到高峰,效价为1：1024,高效价持续5周开始下降,测定提取的IgY浓度为8.258mg/mL,无菌检测及动物安全性实验表明制备的卵黄抗体安全可靠。本研究制备了抗牛多杀性巴氏杆菌卵黄抗体,为防治由荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌所致的犊牛肺炎提供了新的手段。     

抗鸡新城疫卵黄抗体IgY的研制

产蛋母鸡经新城疫灭活抗原重复免疫后，所产生的高免卵黄中，特异性抗体的HI效价可达到12log2以上。从高免卵黄中分离提纯的特异性新城疫抗体，病毒中和试验结果表明，具有明显的中和病毒的作用，特异性病毒中和指数可达到630957以上。使用纯化后的高免卵黄抗体(IgY)安全、高效、无任何不良反应。     

抗BVDV Erns蛋白单克隆抗体制备及生物学特性鉴定

为制备抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns蛋白单克隆抗体,本试验用Erns重组蛋白免疫Balb/c鼠,刺激小鼠脾脏产生特异性免疫细胞;通过化学剂诱导剂PEG-4000诱导免疫细胞和骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞;间接ELISA方法结合亚克隆方法筛选阳性细胞孔;鉴定为稳定分泌抗体的细胞株做扩大培养,细胞悬液计数并无菌注...     

抗金黄色葡萄球菌卵黄抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

本试验通过矩阵法对最佳包被抗原量及其他ELISA条件进行优化,建立一种检测抗金黄色葡萄球菌卵黄抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）方法,用于免疫后卵黄抗体水平的监测。并将该方法与试管凝集法进行敏感性比较。结果表明,本ELISA法抗原最佳包被量为105个/孔,抗体最佳使用稀释倍数为1：100,酶标兔抗鸡二抗工作浓度为1：2000。通过本试验建立的ELISA方法检测卵黄抗体的水平,发现卵黄抗体在三免后第20天左右达到高峰,阳性水平至少持续到初免后的120d。     

鸡卵黄抗体IgY研究进展

鸡卵黄抗体(immunoglobulin of egg yolk,IgY)是卵黄中存在的免疫球蛋白,是由鸡血液中的IgG经过受体介导转移至卵黄中的球蛋白,对新生个体具有重要的保护作用。IgY因具有一些特殊结构和生物学性质,在某些疾病的防治中有着比哺乳动物IgG等更大的优势,从而被称为一种新生代抗体。本文就近些年来对鸡卵黄IgY理化特性、分离纯化方法、受体以及其在一些疾病防治中应用的研究作一概述。     

两种纯化羊驼BVDV抗体血清的方法

为了纯化2种用于不同用途的羊驼牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体血清,笔者分别使用(A|")KTAavant纯化柱直接纯化和抗原偶联亲和层析纯化特异性BVDV抗体,用ELISA测定抗体效价,SDS-PAGE分析抗体纯度,Western blot分析抗体的特异性。结果表明,2种方法纯化的抗体特异性均较好,可根据后续具体试验选择纯化方法。     

抗CP型、NCP型牛病毒性腹泻病毒高免卵黄抗体的制备

本研究采用致细胞病变（cytopathic,CP）型牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）标准毒和非致细胞病变（noncytopathic,NCP）型新疆优势毒株免疫产蛋鸡,用改良PEG法提取卵黄抗体(IgY),并对提取的IgY采用SDS-PAGE检测纯度,间接ELISA检测免疫后每隔7 d的抗体效价,并测定所得抗体对NCP型BVDV的中和效价。结果表明,用该法提取的IgY纯度较高;间接ELISA结果证明,经过4次免疫后,抗CP型BVDV的效价达到1∶32000,抗NCP型BVDV的效价达到1∶40000,3个月后再次检测,卵黄抗体效价未见明显下降。最后一次免疫14 d的抗体对NCP型BVDV的中和效价达到1×10_^-3。     

牛病毒性腹泻病毒研究进展

牛病毒性腹泻病毒是黄病毒科瘟病毒属的代表种,主要感染牛并引发疾病,造成严重的经济损失.自该病毒发现至今,已有60余年研究历史,随着生物学理论及技术不断发展,特别是反向遗传技术以及蛋白组学在病毒研究领域的应用,人们对该病毒产生了一些新的认识.论文从牛病毒性腹泻病毒的病毒粒子结构组成及功能、病毒复制周期及蛋白裂解过程、细胞损伤及免疫逃逸机制三个方面阐述了近几年牛病毒性腹泻病毒分子生物学研究的进展,重点讨论了病毒复制周期、多聚蛋白裂解、致细胞病变效应和免疫逃逸机制.     

牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测

采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100％,最低为55.0％,平均为86.7％.检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律.根据ELISA检测结果,从...     

牛病毒性腹泻病毒致病机理研究进展

牛病毒性腹泻病毒（BVDV）是危害养牛业的重要病原之一。BVDV感染能够引起广泛的临床症状，包括牛病毒性腹泻、粘膜病、持续感染与免疫耐受、繁殖障碍、血小板减少与出血综合征等，其相应的致病机理也非常复杂。持续感染是妊娠母畜在怀孕早期通过子宫内感染非致细胞病变（NCP)型BVDV引起的，是BVDV在自然环境中维持存在的一种重要形式。当持续感染动物再次感染抗原性相似或同源的致细胞病变（CP）型病毒时就会发生粘膜病。本文将粘膜病发生过程中CP型病毒的来源机制概括为五点：①外源细胞序列的插入；②病毒基因的重排和拷贝；③外源细胞序列插入同时伴有病毒基因的复制；④缺陷干扰粒子；⑤点突变。BVDV感染导致奶牛繁殖力下降的机制可能有两条：一是造成卵母细胞的质量下降，二是使性腺类固醇激素生成机制受到破坏，导致血浆中雌二醇、黄体酮等激素紊乱。血小板减少和出血性综合征是BVDV感染引起的又一重要临床症状，其致病机理主要有两种：①BVDV进入到外周循环，使外周循环中血小板受损程度增加，病理检查表现为血小板体积平均值较正常有明显增大；②BVDV感染造成骨髓生成血小板的能力下降，病理检查表现为血小板的体积平均值较正常减少。     

1株牛病毒性腹泻病毒分离毒株的基因组特征

旨在从宁夏某奶牛群持续感染牛分离牛源牛病毒性腹泻病毒（BVDV）,并解析其基因组特征,为研究我国不同地区BVDV分离株遗传演化规律提供理论依据。利用BVDV抗原检测试剂盒检测宁夏回族自治区银川市某示范区的240头高产奶牛间隔两周的双份抗凝血,筛选持续感染牛,分离血液淋巴细胞制备裂解液接种牛肾细胞（MDBK）,分离鉴定获得BVDV株,克隆测序获得全基因组序列,比较分析其遗传演化关系。从该示范区高产奶牛筛选获得2头持续感染牛,分离获得1株非致细胞病变型BVDV,命名为NX2019/01。测序获得基因组全序列（12 107 nt）,其中ORF长11 703 nt,编码3 898个氨基酸。在基因组水平,NX2019/01株与我国SD-15、ZM-95、XC、LN-1等1m亚型分离株相似性较高（92.17%~93.84%）,但E^rns、E1以及E2基因存在较大差异。示范区同群牛急性感染BVDV时,毒株E2蛋白N端编码区核苷酸突变可导致第9位或第67位氨基酸变异。重组分析表明,NX2019/01株E2基因179—288位核苷酸区段以及ZM-95株E1基因168位—E2基因332位核苷酸区段存在相似的重组信号,可能由主要亲本SD-15株与次要亲本LN-1株重组形成,表明NX2019/01株、ZM-95株在演化进程中与SD-15株以及LN-1株或早期流行的高度相似毒株存在密切关联。本研究从持续感染高产奶牛分离获得了牛源BVDV-1m亚型毒株,在基因组水平厘清了BVDV-1m亚型毒株的进化关系,并首次发现同亚型BVDV毒株基因同源重组,为进一步研究BVDV在我国的演化规律奠定了基础。     

牛病毒性腹泻病毒检测技术研究进展

牛病毒性腹泻(BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)所致牛的一种接触性传染病,呈世界性流行,该病主要表现为腹泻、急慢性黏膜感染、繁殖障碍等,对畜牧业危害严重,是国际贸易中动物检疫的重要疫病之一。快速准确的检测手段,有利于该传染病的早期发现和及时控制。目前,用于检测牛病毒性腹泻病毒的方法很多,论文对近年来国内外应用的等温核酸扩增技术(IAT)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、指数富集配体系统进化技术(SELEX)、多重PCR技术、多重连接探针扩增技术(MLPA)、RT-PCR抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光试验(IFA)等进行简要介绍,为我国动物检疫工作提供参考。     

The Properties and Classification of Bovine Viral Diarrhea Virus

Examination of the C24V (Oregon) and MAC A (Ontario) strains of bovine viral diarrhea viruses have shown them to be ribonucleic acid containing viruses, with essential lipid and having compound helical symmetry with the diameter of the helix being in the neighbourhood of 180 A. Because of these properties it is suggested that the virus should be considered a member of the Myxovirus group. Hog cholera virus is related to bovine viral diarrhea virus by means of a “soluble” antigen, and also possesses essential lipid. It is therefore suggested that hog cholera virus represents still another veterinary myxovirus.