延边黄牛白细胞介素2的基因克隆和序列分析

为建立延边黄牛白细胞介素2（IL-2）的基因克隆和序列分析的合理方法体系进行该研究．采集1月龄犊牛静脉血,用密度梯度离心法获取白细胞层,对白细胞进行总RNA的提取,并构建cDNA文库,根据Genbank牛IL-2基因序列（登录号：M12791．1）设计1对特异性引物,用反转录PCR（RT-PCR）技术扩增出目的基因片段,与克隆载体PMD18-T连接,并进行PCR和酶切鉴定,酶切结果为阳性的进行序列分析．结果表明：PCR扩增出大小为261bp的部分IL-2基因片断,与预期的片段大小一致;此序列与Genbank上牛IL-2从141～401bp片段的同源性为100％．     

延边黄牛产业发展的经济分析

对延边黄牛产业的生产状况和潜在的优势进行了分析,找出了存在的问题,并根据延边黄牛产业实际情况,提出进一步发展延边黄牛产业的相关建议。     

鹅催乳素受体基因克隆与表达

应用RACE-PCR技术,克隆了全长3 159 bp鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA.序列分析表明, cDNA含443 bp 5′-UTR、2 496 bp编码区(含终止密码子TAA)和220 bp 3′-UTR.比对鸡催乳素受体基因并将前330 bp看作第1外显子,则gPRLR基因可划分为14个外显子.推导的蛋白序列含831个氨基酸,与鸡、鸽及火鸡PRLR的同源性分别为87.7%、85.2%和84.8%,其N末端含24个氨基酸的信号肽,成熟蛋白含807个氨基酸.gPRLR mRNA在成年鹅睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达,其中以肾、睾丸、大肠及小肠中表达最为丰富.     

鹅催乳素受体基因克隆与表达

应用RACE-PCR技术,克隆了全长3 159 bp鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA.序列分析表明, cDNA含443 bp 5′-UTR、2 496 bp编码区(含终止密码子TAA)和220 bp 3′-UTR.比对鸡催乳素受体基因并将前330 bp看作第1外显子,则gPRLR基因可划分为14个外显子.推导的蛋白序列含831个氨基酸,与鸡、鸽及火鸡PRLR的同源性分别为87.7%、85.2%和84.8%,其N末端含24个氨基酸的信号肽,成熟蛋白含807个氨基酸.gPRLR mRNA在成年鹅睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达,其中以肾、睾丸、大肠及小肠中表达最为丰富.     

延边黄牛心脏的形态学观察

采用常规解剖学方法,测量20头延边黄牛的心室壁厚度、各瓣膜口的周径、心脏外部各径;对延边黄牛心脏的外部形态、位置关系、内部构造、血管分布、肉柱等进行观察．结果表明,延边黄牛心脏的重量为（1．17±0．27）kg,位于胸腔的纵隔内,呈倒置的圆锥状,分为右心房、右心室、左心房、左心室4个腔,外部有心包包被．心脏周径（36．31±3．13）cm,长径（12．71±0．57）cm;心脏的外形可分为心耳,心室,心尖和心底,表面有4条沟（冠状沟,锥旁室间沟,窦下室间沟和中间沟）;左心室心内膜光滑、平整,肉柱较右心室内的少;左心室内有2个乳头肌,即前乳头肌和后乳头肌,均发达,为附着型,标本中见右心室内有3个乳头肌,分别为隔后乳头肌、隔前乳头肌和侧壁乳头肌．     

延边黄牛产业化发展中的问题与政策建议

立足延边地区的实际情况,对黄牛产业发展中存在的问题进行深入分析,认为充分发挥企业、科研单位和政府的作用,利用延边地区的区位优势,并考虑黄牛产业发展的可持续性,是促进延边黄牛产业的快速健康发展的主要路径。     

延边黄牛饲养标准的研究

通过延边黄牛绝食、维持能量代谢试验、消化和代谢试验、饲养试验、泌乳性能试验、役用性能，并参照美国ＮＲＣ饲养标准、韩牛饲养标准及我国肉牛、奶牛饲养标准，制定了延边黄牛维持、妊娠、产奶、生长、育肥、役用牛的干物质采食量、能量、蛋白质、矿物质、维生素的需要量。     

关于延边黄牛产业化发展战略的探讨

阐述了延边黄牛产业化发展的现状和存在的问题,提出其以后发展对策。该文在延边黄牛产业化发展方面提出的一些建议,对于开发延边黄牛资源,促进延边黄牛产业纵深发展,提高延边畜牧业经济水平,都有着极其重要的意义。     

延边黄牛和延黄牛脂肪组织FASN基因mRNA表达水平与肉质的关系

为了探讨不同品种牛不同脂肪沉积部位FASN基因mRNA表达水平与肉质的关系,采用荧光定量PCR技术检测延边黄牛和延黄牛皮下脂肪、腹部脂肪、肾周脂肪与其他器官的FASN基因mRNA表达水平。结果表明,2个牛品种的FASN基因mRNA在不同脂肪组织中表达量均高于背最长肌,而延黄牛皮下脂肪和腹部脂肪中FASN基因mRNA表达量都高于延边黄牛。通过对肺、小肠、肾脏、肝脏和心脏中FASN基因mRNA研究发现,延边黄牛和延黄牛肺中FASN基因mRNA的表达量高于其他脏器。由此可见,FASN是影响脂肪酸合成的关键酶,与肉质相关,其中皮下脂肪和腹部脂肪是脂肪酸合成的主要部位。     

延边黄牛GHR基因第8外显子一个新多态位点的发现

［目的］寻找可用于标记辅助选择的分子标记,为延边黄牛分子生物学选种提供依据。［方法］以46头纯种延边黄牛血样为试材,利用PCR-SSCP技术对GHR基因的第8外显子进行检测并测序,检测了延边黄牛群体内GHR的遗传变异。［结果］对扩增产物进行的SSCP检测发现,有3种基因型,分别为AA、BB、AB,其中AA、BB为纯合子,AB为杂合子。以AA和BB个体为样本的测序分析发现,有一个新多态性位点。GHR基因多态位点遗传分析表明,AA型个体较多,AB型和BB型个体较少。GHR基因的AA基因型效应在部分生长性状上优于其他基因型,差异达到显著水平。［结论］研究提示,GHR基因有可能作为延边黄牛生长性状的候选基因;在育种时应结合多个基因位点才能达到有效选育目的。     

延边黄牛体细胞克隆囊胚中总基因组RNA的提取

以延边黄牛体细胞克隆囊胚为试验材料,采用试剂盒GMS12106的使用方法提取试材的总基因组RNA,在琼脂糖凝胶电泳检测后,得到最适的囊胚数为5个。通过试验发现,生殖细胞的特殊生理结构限制了RNA提取的效果。为提取完整、纯度高的RNA,采用链蛋白酶对囊胚的透明带进行了消化处理,最终得出链蛋白酶处理的最适时间为10min,提取的RNA质量好,可为后续试验奠定基础。     

延边黄牛与韩延牛血液Exosome对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响

[目的]从延边黄牛和韩延牛血液中分离Exosome(外胞体),研究2种外胞体对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响。[方法]通过超高速离心等方法,从延边黄牛和韩延牛血液中分离Exosome,并以100 ng/m L的浓度分别转染给原代培养的延边黄牛垂体细胞培养12、24和48 h,对细胞上清液中GH含量进行检测。[结果]电镜下延边黄牛与韩延牛血液Exosome均呈圆形或椭圆形的双层膜小囊泡,直径均为30~100 nm,膜结构完整。韩延牛Exosome处理组的延边黄牛垂体细胞GH mRNA表达显著高于延边黄牛Exosome处理组(P0.05)。韩延牛血液Exosome处理组垂体中GH的含量显著高于延边黄牛血液Exosome处理组(P0.05)。[结论]延边黄牛和韩延牛血液中的Exosome对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响有明显差异。     

延边黄牛血液Exosome的提取和鉴定

[目的]从延边黄牛血液中分离并鉴定外胞体(Exosome).[方法]通过低速离心、高速离心、超滤及超高速离心等方法从延边黄牛血液中分离Exosome,用电子显微镜观察其形态特征,采用Lorry方法进行蛋白定量.[结果]延边黄牛血液中含有大量的Exosome,电镜下呈圆形或椭圆形的双层膜小囊泡,直径为30～100 nm,膜结构完整.蛋白定量为2 mg/ml.[结论]用离心的方法可以从延边黄牛血液中获得Exosome,为进一步研究Exosome对延边黄牛生长轴调控的分子机制奠定基础.     

延边黄牛与韩延F1幼牛生长发育规律分析

通过对延边黄牛和韩延F1牛体重和体尺的对比,分析其生长发育规律,结果表明,韩延F1牛各月龄体重均高于延边黄牛;延边黄牛公、母牛体长的生长发育速度在8月龄左右快于体高,而韩延F1公、母牛的体长的生长发育在4月龄左右就已经快于体高;韩延F1公牛坐骨宽的发育也早于延边黄牛公牛,按性别来说,6月龄前母牛的后躯宽度(腰角宽、坐骨宽)生长强度较公牛大,6~18月龄公牛逐渐超过母牛.     

延边黄牛体细胞克隆囊胚染色体标本制备的研究

[目的]探讨适合延边黄牛体细胞克隆胚胎染色体标本制备的方法。[方法]利用延边黄牛体细胞克隆产生的囊胚制备染色体标本,采用传统的细胞遗传学方法,将延边黄牛体细胞克隆囊胚分别在含有0.11、.0和10.0μg/ml浓度秋水仙素的CR1aa培养液中继续培养4或6 h,以使细胞分裂停留在中期。处理后的囊胚移入柠檬酸钠低渗液中,室温下处理15~20 min。将低渗后的单个胚胎转移至载玻片上,固定并用体积分数为25%的Giemsa溶液染色1~5 h,蒸馏水冲洗脱色,于室温干燥。显微镜下计算胚胎细胞数和有丝分裂指数以及标本制备质量。[结果]结果表明,1.0μg/ml秋水仙素处理6 h后的染色体标本制备效果较为理想。[结论]该研究为制备延边黄牛体细胞克隆囊胚染色体标本提供适宜的试验参数。     

延边地区延边黄牛布鲁氏菌病的流行病学调查

[目的]为布鲁氏菌病的防制与治疗提供科学依据。[方法]通过虎红平板凝集试验对延边地区延边黄牛进行布鲁氏菌病检测。[结果]对采集到的304份牛血清进行检测,其中43份血清呈阳性,阳性率达14.47%。[结论]延边地区延边黄牛中布鲁氏菌病得到了较好控制。