犬腺病毒2型的致弱和狐脑炎弱毒疫苗的研究

将犬腺病毒2型(CAV—2),用PK_(15)细胞继代53代后毒力减弱,然后用A_(72)细胞继续继代20代。经对继代毒的毒力测定和稳定性试验证明,53—73代毒对狐无致病性,而且毒力稳定,我们选用60—69代毒作制苗种毒成功地研制出狐狸脑炎弱毒苗。试验表明,该苗具有制造技术先进、使用安全、免疫原性好等优点。狐免疫10~(4.5)TCID_(50)/ml接种疫苗,保护率可达100％。该苗免疫21天后能耐受10~(-2)CAV—l强毒的攻击,免疫期为一年。现场应用26754头份均取得良好的免疫效果.     

狐狸脑炎的防治

目前,我们一些地区狐场经常发生传染性脑炎（肝炎）,该病是犬的一种病毒性传染病。除犬外还发生于北极狐、彩狐、银黑狐,本病最早发现于狐（流行性脑炎）曾认为是沙门氏菌病的一种类型,1930年才确定其病原为一种病毒,并可传染犬狐。1949年证明传染性肝炎和狐流行性脑炎病原是同一种病毒,在病毒分类上属于腺病毒。狐传染性肝炎是由犬腺病毒引起的一种急性、败血性、接触性传染病。     

Ⅱ型犬腺病毒C株E1、E3区克隆测序及E3区标记载体瞬时表达

设计4对引物，对犬Ⅱ型腺病毒2C（CAV-2C）株E1、E3区进行了扩增，将片段进行T克隆、测序，并构建了E3区缺失、标记EGFP的转移载体，在MDCK和293-T细胞上成功表达，但在MDCK细胞中的转染效率较低。本研究为犬腺病毒活病毒载体构建的研究提供基础。     

犬瘟热、细小病毒性肠炎、犬传染性肝炎(狐狸脑炎)三联弱毒疫苗的研究

犬瘟热、细小病毒性肠炎、腺病毒性犬肝炎(狐狸脑炎),是危害犬科及鼬科动物较严重的传染性疫病,幼兽的发病致死率可达100%.随着特种养殖业的发展,几种疫病的发生呈上升趋势,注射疫苗是有效防治的关键.     

狐源犬Ⅰ型腺病毒分离与鉴定

在研究山东地区狐狸传染性脑炎流行情况的过程中,从潍坊某养狐场送检的9份疑似狐狸传染性脑炎病死狐脏器中分离到一株病毒。对所分离到的病毒进行形态学观察、病毒核酸型鉴定、特异性试验、PCR检测及动物感染试验的系统鉴定,并通过耐热性试验,耐酸性试验,脂溶剂敏感试验,血凝实验对其主要生物学特性进行研究,试验结果显示该病毒能在DK细胞中生长,引起"葡萄串样"细胞病变效应(CPE),抗犬Ⅰ型腺病毒抗体能够特异性地抑制所分离病毒在DK细胞内的增殖。形态为20面体立体对称、直径约80nm的腺病毒样粒子,对5-IUDR敏感,对56℃、pH3.0的酸、氯仿有一定抵抗力,能凝集鸡、豚鼠和人O型红细胞,用E3区特异性引物能扩增出CAV-1特异性核酸片段,能感染狐狸引起狐狸传染性脑炎症状。结果表明所分离到的病毒为犬Ⅰ型腺病毒(Canine adenovirus type 1,CAV-1),将其命名为CAV-1-FOX/WF株。     

猪细小病毒N株弱毒苗的保存温度和时间对豚鼠抗体反应的影响

用不同保存温度和时间的猪细小病毒Ｎ株弱毒苗注射豚鼠,检测ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗的保存期,结果为４℃至少能保存一年,－２０℃至少能保存３年。根据抗体反应的规律性,证明豚鼠可用作ＰＰＶ弱毒苗抗体检测的试验动物。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒鸡胚致弱毒MY株的培育及实验研究

将I型鸭肝炎分离株XC-1适应鸡胚,培育成1株毒力弱而稳定、免疫原性良好的鸭肝炎鸡胚化MY弱毒株.该毒株毒力为1011.40ELD50/0.1mL,1013.62TCID50/0.1mL;对雏鸭无致病性;在雏鸭体内连续盲传5代未见毒力返强;1日龄雏鸭用8,000 ELD)50/0.1mL的MY株致弱毒腿部肌注0.2ml免疫后3d强毒原液0.5mL/只攻击,可产生2/5的保护,第6d-21d产生完全保护,免疫后第3d、5d、6d、7d、9d、14d、21d抗DHV I的中和抗体滴度分别为10-1.38、10-1.55、10-1.64、10-1.65、10-1.68、10-1.8、10-1.89,表明MY是1株理想的鸡胚弱毒疫苗后备株;通过MY株的鸡胚的繁殖规律观察,确定该病毒的最佳收毒时间为接胚后的72h～84h,为疫苗生产条件的建立提供了依据.     

Ⅰ型鸭病毒性肝炎弱毒疫苗对比试验

为了解自主研发的Ⅰ型鸭病毒性肝炎弱毒疫苗（简称：自Ⅰ型）免疫效果,将自Ⅰ型与目前使用的上海某公司生产的Ⅰ型鸭病毒性肝弱毒疫苗进行对比试验．分别对1日龄雏鸭进行免疫接种,通过动物攻毒保护试验结果评估疫苗免疫效果。结果显示．自Ⅰ型比对比品对早期野毒感染预防效果更好．     

猪蓝耳病灭活苗与弱毒苗免疫效价试验

繁殖与呼吸综合症（PRRS）又称蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起.主要是猪群发生以繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的一种急性、高度传染的病毒性传染病,发病率和死亡率高,给养猪业造成巨大的经济损失.为了积极预防和有效控制PRRS的发生和蔓延,目前用于预防PRRS的疫苗主要是灭活苗和弱毒活疫苗,到底哪种效果好应该在何时注射才能取得好的效果呢？本试验对高致病性PRRS弱毒苗和灭活苗的免疫效价进行对比,为更好的预防和控制PRRS提供依据.     

鸡毒霉形体S6株的致弱研究

鸡毒霉形体（ＭＧ）中毒株Ｓ６在固体平板上的３次克隆后，在无细胞培养上基上传１００代以上进行致弱培养，用ＭＧＳ６Ｆ１０８株培养物在雏物和ＳＰＦ鸡胚上作６次回归感染，证明ＭＧＳ６Ｆ１０８不返强，通过气管环培养，纤毛运动损伤试验及对鸡点眼，滴鼻，工胸气囊注射不同代培养物（Ｆ１０８，Ｆ１４３，Ｆ１２１，Ｆ１５０，Ｆ１５３）检查气囊病变和病原体再分离，结果证明Ｆ１０８以上代次的菌株低毒，安全，且有较强的免疫     

我国家禽耐热型弱毒活疫苗的研究进展

综述了近几年国内研究禽用耐热型新城疫冻干活疫苗 ,传染性法氏囊病冻干活疫苗 ,传染性支气管炎冻干活疫苗 ,鸡痘冻干活疫苗和鸡马立克氏病冻干活疫苗的概况 ,并对各种疫苗的质量标准 (参数 )进行了分析。     

传染性法氏囊病病毒变异株二价弱毒疫苗的研究

选用传染性法氏囊病病毒变异株JD1、NB、HZ1弱毒株配制成JN（JD1+NB毒株组成）和JH（JD1+HZ1毒株组成）两种二价弱毒疫苗。分别在14日龄首免和28日龄二免SPF鸡,并于一免后14 d、21 d,二免后12 d分别用强毒株传染性法氏囊病病毒（IBDV）BC6/85株攻击;同时观察疫苗的安全性。结果表明JN和JH疫苗均能诱导SPF免疫鸡产生优良的免疫应答反应,并能使免疫鸡对IBDV-BC6/85株的攻击产生100%的保护。JN和JH疫苗的最佳免疫剂量分别为6 000 TCID₅₀和10 000 TCID₅₀。     

猪Ⅱ型圆环病毒Cap基因重组腺病毒表达载体的构建

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)衣壳蛋白Cap基因的重组腺病毒表达载体。首先将Cap基因亚克隆连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV上,再将重组质粒pAdTrack-CMV／Cap用Pme Ⅰ线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAdEasy-Cap。为进一步研究PCV2腺病毒活载体疫苗奠定了基础。     

一株禽腺病毒4型病毒分离与鉴定

为了对某肉鸡场暴发的疾病进行确诊,对送检的病死鸡进行解剖、细菌分离和荧光PCR检测,并进一步进行鸡胚半数致死量(ELD₅₀)、动物回归试验和组织灭活疫苗研制。结果显示：病死鸡剖检可见肝脏肿大、出血,心包胶冻样积液,肾脏肿大,病料未分离到细菌。PCR检测禽腺病毒4型(FAV4)阳性,用处理液进行病毒分离,成功分离到一株FAV4病毒,扩增所分离病毒hexon基因部分序列,测序结果与GenBank上的FAV4 hexon基因(登录号：EF554403)相似性为100%。分离病毒盲传3代,测定的ELD₅₀为104.5/0.2 mL,以0.2 mL·只^-1的剂量胸部肌肉注射30日龄SPF鸡5只,4 d内鸡只全部死亡,病变与临床剖检病死鸡相似。取病死鸡肝脏制备组织灭活疫苗,免疫SPF鸡,能抵抗所分离FAV4病毒攻击。研究成功分离鉴定出一株FAV4病毒,并进行初步研究,丰富了毒种库,为FAV4病毒疫苗研制奠定了基础。     

板蓝根多糖对PRRS弱毒苗免疫猪抗体和T细胞亚群的影响

研究板蓝根多糖对PRRSV弱毒苗免疫抗体和猪外周血T细胞亚群的影响。35日龄断奶仔猪16只随机分为4组,将多糖分别以高、低两个剂量和猪PRRSV弱毒苗同时注射,于免疫后不同的时间点采血,ELISA方法检测猪PRRSV抗体水平,流式细胞术检测猪外周血中T淋巴细胞亚群的变化。弱毒苗免疫后7d,板蓝根多糖高剂量组即可检测到PRRSV阳性抗体,而其它组在免疫后14d,均可检测到PRRS阳性抗体,板蓝根多糖对PRRS弱毒苗产生抗体的影响是和剂量密切相关的,高剂量能提高抗体水平,低剂量会阻碍PRRSV抗体的产生。板蓝根多糖和PRRS弱毒苗联合使用对猪外周血CD3^＋和CD4^＋细胞数量的影响不显著,在早期可促进猪外周血CD8^＋细胞的增殖。合适剂量的板蓝根多糖可以作为免疫增强剂与PRRSV弱毒苗联合使用。