犬腺病毒2型的致弱和狐脑炎弱毒疫苗的研究

将犬腺病毒2型(CAV—2),用PK_(15)细胞继代53代后毒力减弱,然后用A_(72)细胞继续继代20代。经对继代毒的毒力测定和稳定性试验证明,53—73代毒对狐无致病性,而且毒力稳定,我们选用60—69代毒作制苗种毒成功地研制出狐狸脑炎弱毒苗。试验表明,该苗具有制造技术先进、使用安全、免疫原性好等优点。狐免疫10~(4.5)TCID_(50)/ml接种疫苗,保护率可达100％。该苗免疫21天后能耐受10~(-2)CAV—l强毒的攻击,免疫期为一年。现场应用26754头份均取得良好的免疫效果.     

狐犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎三联疫苗免疫试验

用CDV弱毒、FPV-A弱毒和CAV-2型弱毒研制成功了狐三联疫苗。该三联疫苗安全可靠，免疫原性强，免疫期6个月以上，该三联疫苗免疫剂量为3ml/只，CDV、FPV-A和CAV-2型弱毒疫苗效价分别为10^6.0～10^8.0，现场应用100余万只狐，抗体阳转率93%。     

猪喘气病弱毒疫苗的研究 猪肺炎霉形体兔化弱毒株的培育

 用5株猪肺炎霉形体分别人工感染乳兔，仅济南株适应于乳兔。经过长期继代，培育出1株毒力显著减弱并保持良好免疫原性的兔化弱毒株。该株对乳兔的最佳接种部位是胸腔，最小感染量为0.5×10#+（-5）克，在乳兔体内存活14天左右。在成兔体内可产生血凝抗体，其最小感染量为2×10#+（-5）至2×10#+（-6）克。扫描电镜观察表明，兔化弱毒株在乳兔支气管内繁殖，纤毛未见明显损伤。该株对猪的潜伏期的几何平均值为27.9天，对支气管纤毛损伤轻微，不发生同居感染，不影响增重，保护率为70-80%，免疫期6个月以上，最小免疫剂量为5×10#+（-2）克，气管、胸腔、滴鼻、气溶胶接种均可产生免疫力。用兔化弱毒株作种子制造大兔冻干苗15批，先后在北京、广东、福建、浙江、江西、湖南、宁夏、河北等8个省（市）自治区的30个猪场，接种20个不同品种、不同年龄的10363头猪，证明安全有效。兔化弱毒株的培养成功，为今后开展猪喘气病的预防工作创造了有利条件。     

狐源犬Ⅰ型腺病毒分离与鉴定

在研究山东地区狐狸传染性脑炎流行情况的过程中,从潍坊某养狐场送检的9份疑似狐狸传染性脑炎病死狐脏器中分离到一株病毒。对所分离到的病毒进行形态学观察、病毒核酸型鉴定、特异性试验、PCR检测及动物感染试验的系统鉴定,并通过耐热性试验,耐酸性试验,脂溶剂敏感试验,血凝实验对其主要生物学特性进行研究,试验结果显示该病毒能在DK细胞中生长,引起"葡萄串样"细胞病变效应(CPE),抗犬Ⅰ型腺病毒抗体能够特异性地抑制所分离病毒在DK细胞内的增殖。形态为20面体立体对称、直径约80nm的腺病毒样粒子,对5-IUDR敏感,对56℃、pH3.0的酸、氯仿有一定抵抗力,能凝集鸡、豚鼠和人O型红细胞,用E3区特异性引物能扩增出CAV-1特异性核酸片段,能感染狐狸引起狐狸传染性脑炎症状。结果表明所分离到的病毒为犬Ⅰ型腺病毒(Canine adenovirus type 1,CAV-1),将其命名为CAV-1-FOX/WF株。     

异于肼弱毒鼻疽杆菌的变异性与对小动物的免疫试验

关于鼻疽予防的研究试验,从本世纪初到现在50余年来,曾进行了许多工作,其中一个主要方向是应用不同环境条件培育弱毒的鼻疽杆菌.所采用的方法可概括为: 1.通过含有各种特殊成分的培养基:??用甘油与马铃薯培育出有一定程度抗原性的Ⅰ苗和Ⅱ苗,??氏用牛胆汁培育出毒力致弱的鼻疽杆菌. 2.通过各种动物继代接种方法:??氏用鸽体继代接种;Nicolli氏用豚     

鸡传染性支气管炎弱毒苗的毒力返强检测

将鸡传染性支气管炎疫苗毒接种10日龄鸡胚,并传至12代,观察鸡胚病变,于72 h收集尿囊液进行负染电镜观察和血凝试验.透射电镜观察到典型的冠状病毒颗粒,致鸡胚的典型病变作用和血凝活性随培养代次的增加显著增强.结果表明,该弱毒苗病毒毒力返强,存在安全隐患.     

Ⅰ型鸭肝炎病毒鸡胚致弱毒MY株的培育及实验研究

将I型鸭肝炎分离株XC-1适应鸡胚,培育成1株毒力弱而稳定、免疫原性良好的鸭肝炎鸡胚化MY弱毒株.该毒株毒力为1011.40ELD50/0.1mL,1013.62TCID50/0.1mL;对雏鸭无致病性;在雏鸭体内连续盲传5代未见毒力返强;1日龄雏鸭用8,000 ELD)50/0.1mL的MY株致弱毒腿部肌注0.2ml免疫后3d强毒原液0.5mL/只攻击,可产生2/5的保护,第6d-21d产生完全保护,免疫后第3d、5d、6d、7d、9d、14d、21d抗DHV I的中和抗体滴度分别为10-1.38、10-1.55、10-1.64、10-1.65、10-1.68、10-1.8、10-1.89,表明MY是1株理想的鸡胚弱毒疫苗后备株;通过MY株的鸡胚的繁殖规律观察,确定该病毒的最佳收毒时间为接胚后的72h～84h,为疫苗生产条件的建立提供了依据.     

鸭副粘病毒弱毒株的选育

应用SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)连续传代培育出鸭副粘病毒弱毒疫苗株,并测定该弱毒株的部分生物学特性.结果显示:该弱毒株已失去对无母源抗体番鸭的致病性,在雏番鸭体内连续肓传5代,未见毒力返强现象;对CEF的TCID50稳定在10-6.0～10-6.5·(0.1 mL)-1;无母源抗体的番鸭免疫不同代次弱毒后7 d攻击鸭副粘病毒强毒,保护率均在90％以上.结果表明该弱毒株安全性好、遗传性稳定、免疫原性强,可用于制备鸭副粘病毒病疫苗.     

鸭肝炎病毒A_(66)弱毒株的研究

鸭肝炎病毒I型A_(66)鸡胚化弱毒株,对雏鸭安全、稳定.鸡胚混合毒滴度为10~(7.36-8.09)CELD50/0.1毫升.以1.8万DLD50/0.1毫升的强毒攻击,其半数免疫量为10~(6.16)MID50/0.1毫升;皮下注射的免疫产生期为接种后48小时.免疫持续期测至45天,全部保护.用本弱毒苗免疫雏鸭,可预防I型鸭病毒性肝炎的发生.以该弱毒苗高度免疫成年鸭或猪血制备的抗血清,对雏鸭能产生坚强的被动免疫力.     

淮北狐传染性脑炎混感大肠杆菌的试验研究

[目的]明确淮北狐急性、大量死亡的原因。[方法]结合病死淮北狐的流行病学材料和临床症状,对该狐进行了病理剖检、病毒检测、细菌分离及生化鉴定。[结果]初步判定导致该淮北狐急性、大量死亡的原因为狐狸传染性脑炎混合感染大肠杆菌。对有临床症状的病狐紧急注射康复狐狸的血清和丙种球蛋白,并全群使用经药敏试验筛选的敏感药物治疗大肠杆菌,10 d内基本上控制了疫情。[结论]广大狐狸养殖户应提高警惕,对幼狐进行传染性脑炎病毒的疫苗免疫。     

番鸭呼肠孤病毒弱毒株选育研究

应用番鸭胚成纤维细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF)交替传代选育出适应CEF繁殖的番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗株。该弱毒株已失去对1日龄雏番鸭的致病性,对CEF的TCID50稳定在10-5~10-5.5;在雏番鸭体内连续盲传5代,未见毒力返强现象;1日龄雏番鸭免疫不同代次弱毒后7 d攻击番鸭呼肠孤病毒强毒,保护率均在88%以上,且不同代次弱毒的外源病毒检验结果均为阴性。上述结果表明该弱毒株无外源病毒污染、安全性好、遗传性稳定、免疫原性强,可用于制备番鸭呼肠孤病毒病活疫苗。     

猪轮状病毒免疫初探——Ⅰ.用强毒进行非肠道途径免疫

根据何家惠等试验证实,猪轮状病毒经肌肉或腹腔注射不会引起肠道排毒。为了加快免疫工作的进展,在弱毒株未培育成功之前,用强毒通过非肠道途径对母猪及仔猪进行了免疫试验。 材料和方法 1.猪轮状病毒株 用本组从自然病例中分离到的南86号毒株MA104细胞上连续传代繁殖至35～37代。 2.猪轮状病毒苗的组成 (1)母猪免疫疫苗:用南86号毒株的35代或37代MA104细胞培养毒(MA86F_(35)或MA86F_(37)),蚀斑滴度10~(-7),临用前,加入20%氢氧化铝及0.05％皂素,充分混合。     

湖南小鹅瘟防治的研究——Ⅴ.不同毒力疫苗和不同免疫程序与雏鹅保护率的关系

1990～1992年,在湖南省武冈、岳阳、芷江和湖北省公安等县,用不同毒力的小鹅瘟疫苗,采用不同的免疫程序免疫母鹅.同时,采用免疫后175～188 d 内的母鹅产蛋所孵化的雏鹅进行攻毒试验.田间试验结果表明:用小鹅瘟鸭胚苗或鹅胚苗采用一次免疫法,母鹅免疫后175～182 d内,其后代的保护率为81.7%～87.0%;两次免疫法,首次用鸭胚苗或鹅胚苗,第2次用毒力较强的鹅胚苗,其后代的保护率为89.3%～94%.在攻毒试验中前一种方法对雏鹅的保护率只有60%～81.8%,而后一种方法则达到了86.6%～90.4%.     

猪轮状病毒的分离及弱毒株的培育

从济宁地区猪场采集表现有腹泻症状的病猪粪便 ,经胰蛋白酶 (2 0 μg/ml)处理 ,接种已长满单层的PK15细胞 ,培养至第 3代细胞边缘变模糊 ,细胞融合、堆积、变圆 ,最后细胞脱落。经过动物回归试验、电子显微镜观察、血清学等试验结果表明 ,分离获得的病毒为猪轮状病毒 (PRV) ,命名为SD2 2毒株。将分离的PRV经PK15细胞连续传 10 0代 ,获得 1株免疫原性好的弱毒株 ,免疫仔猪 ,强毒攻击保护率为 90 %。     

马传贫驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株免疫马后病毒囊膜蛋白特异性抗体参数的测定

为研究马传贫驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株(FDDV-EIAV)免疫马后体液免疫在免疫保护中的作用,将6匹EIAV阴性马分为2组,第1组(6#,7#,8#,9#),分别接种1mL 1000TCID50 EIAV FDDV11,第2组(4#,5#)接种1mL驴胎皮肤细胞培养上清作为对照组,定期采集免疫接种后210d内的血清,利用ELISA方法测定试验马血清中针对EIAV囊膜蛋白特异抗体参数.通过测定囊膜蛋白特异性抗体滴度、抗体亲和力和抗体构象变化,发现该疫苗免疫马18d后出现针对囊膜蛋白的特异性抗体,整个监测期内其抗体水平较低;抗体亲和力虽有波动,但亲和力水平较高;抗体构象指数都在2.0附近波动,表示囊膜蛋白特异性抗体主要为构象性抗体.免疫210d后,所有马均用1mL 1×10-5血清稀释的EIAV强毒辽宁株(EIAV L21)进行攻击,攻毒后,对照马分别在第10天、第13天出现发热,第16天,第18天死亡,其它所有免疫马未见体温升高和其它临床症状,表明FDDV11能够产生良好的免疫保护作用.抗体参数分析表明FDDV11产生的体液免疫与马传贫致病株感染马后产生体液免疫截然不同,暗示体液免疫在EIAV感染马免疫保护中的可能起着重要作用.     

紫外诱变选育球孢白僵菌高产菌株

对球孢白僵菌403001进行了孢子紫外选育,获得一毒力较高、性能稳定的突变株403001-38.利用此突变株继代培养10代,得到的产孢量均高于诱变出发株,其毒力为出发菌株的2.1倍,这表明该菌株具有较好的遗传稳定性.     

鸭胚化小鹅瘟弱毒苗的培育及初步测定

本项研究,企图用鸭胚致弱的小鹅瘟弱毒苗直接免疫雏鹅以防止小鹅瘟的流行。材料和方法种毒:采用我院1961年分离的小鹅瘟疫苗毒株YG_(25),即扬州株小鹅瘟病毒鹅胚继代第25次的毒株。鸭胚:健康邵鸭或麻鸭蛋,孵化10—12天,发育良好。     

环磷酰胺免疫抑制法制备单克隆抗体的研究

 采用纯化的鸡IgG免疫环磷酰胺预处理BALB/c小鼠后，再用亲和层析纯化的鸡IgM进行免疫，运用淋巴细胞杂交瘤技术，以间接ELISA法筛选，获得了5株能稳定地分泌抗鸡IgMμ链特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经ELISA交叉反应性试验和羊抗鸡IgMμ链抗血清阻断试验，证明这5株单克隆抗体均是抗鸡IgMμ链特异性的。采用环磷酰胺免疫抑制法制备单克隆抗体，其杂交瘤细胞阳性率为8.696%,而用常规免疫法为4.032%,前者比后者杂交瘤细胞阳性率提高1倍以上。经两次有限稀释法克隆和比较后，免疫抑制法获得5株单克隆抗体，而常规免疫法只获得2株单克隆抗体，前者有3株单克隆抗体腹水ELISA效价达到10#+（-12）、10#+（-14）、10#+（-15）；后者单克隆抗体腹水ELISA效价为10#+（-5）和10#+（-6）。因此，与常规免疫法相比，环磷酰胺免疫抑制法制备单克隆抗体具有杂交瘤细胞阳性率高，分泌的单克隆抗体特异性强、滴度高等优点，值得推广。     

弓形虫紫外线弱毒虫株的培育及免疫研究（第二报）

本文报道了弓形虫NT强毒虫株,经紫外线全暴露垂直连续照射,通过细胞致弱培养筛选出抗辐射变异虫株NTA-Ⅲ系。本虫对猪、兔和小鼠的毒力均明显减弱。猪安全试验116头,21头出现弱反应,占18.1％,无重病或死亡;非带虫免疫试验36头,连续测35128天,均末查到虫体和包囊。用含虫数10~5/毫升弱毒虫苗每头猪接种1毫升,6个月免疫保护力为100％。     

雏鸡新城疫疫苗三种不同免疫程序的免疫效力

新城疫（ND）油乳剂灭活苗与LaSota株弱毒疫苗,采用三种不同方法对试验雏鸡进行免疫,依据HI抗体滴度的检测和攻毒试验,比较了雏鸡三种不同免疫程序的免疫效力,结果表明,3种程序免疫的雏鸡60日龄时对强毒攻击均得到完全保护,对母源抗体HI滴度5．2（log2HI值）的雏鸡,2日龄用ND油乳剂灭活苗和LaSota疫苗免疫优于2日龄用ND油乳剂灭活苗免疫或10日和20日龄用LaSota疫苗二次免疫。