苜蓿花药悬浮培养体系的建立

以苜蓿花药愈伤组织为材料建立悬浮细胞系,对悬浮细胞系建立的适宜培养基进行筛选,并对培养液的pH值及细胞活力进行研究.结果表明,参试苜蓿品种在NB液体培养基中愈伤组织诱导率较高;同一激素水平下,NB培养基愈伤组织诱导率明显高于MS液体培养基.培养液pH值出现下降-上升-平稳的趋势.接种第3 d悬浮细胞活力最强.     

家蚕悬浮培养细胞系的建立及悬浮培养

通过对家蚕细胞系BmN进行多轮选育 ,选拔出具有较好悬浮性能的细胞株 ,命名为BmN ZJ S ;并在自制转瓶系统中对其进行悬浮培养。实验表明 ,家蚕细胞BmN ZJ S在悬浮培养条件下的细胞扩增倍数为 2 9,最高细胞密度为 4 3 5× 1 0 5个 /mL(细胞活性大于 98%) ,对数生长期延长 2 4h,接近或优于贴壁培养条件下的相应值。     

北细辛悬浮培养体系的建立及优化

以北细辛(Asarum heterotropoides)幼嫩叶柄诱导的愈伤组织为材料,初步建立悬浮培养体系,同时探讨接种量、光照、培养液量、转速、蔗糖浓度、激素配比等因素对细胞生物量的影响。结果表明,100mL的1/2MS液体培养基中,2g愈伤组织是最适接种量,蔗糖浓度为30g·L~(-1),摇床转速150r·min~(-1),0.6mg·L~(-1) 6-BA+0.3mg·L~(-1) NAA,全天光照培养时细胞生长量最大。北细辛悬浮细胞生长曲线大致为"S"型,悬浮细胞的最佳收获周期为15d。经悬浮培养后可快速获得细胞团及多种形态的单细胞,可为北细辛悬浮细胞的大规模生产提供依据,并进一步提升北细辛的应用价值。     

不同培养方法对苜蓿种子发芽率的影响

利用持续光照、温度25～28℃、及时补充水分的植物培养箱培养和室温培养(8～22 ℃),对8种苜蓿品种种子进行发芽率测定.结果表明:培养方法影响种子的发芽率;同一年份采种的苜蓿品种间差异不显著(P>0.05);不同年份采种的苜蓿品种,除2008年和2005年采种的各2个苜蓿品种问差异不显著外(P>0.05),其余各品种间差异极显著(P<0.01).说明:随着贮存年限的延长,苜蓿种子的发芽率逐年降低;种子的发芽效果受遗传特性和环境条件的影响.     

全悬浮培养LMH细胞制备FAdV-4灭活疫苗的研究

通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10⁶/mL～1×10⁶/mL接种,细胞密度最高达6×10⁶/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-S细胞制备FAdV-4抗原的最优参数为：接毒时细胞密度2×10⁶/mL～3×10⁶/mL、接毒量0.1MOI～1MOI、接毒后48 h～72 h收毒,所获抗原病毒含量不低于10^9.25TCID₅₀/mL。试验鸡分别免疫0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.3 mL疫苗,攻毒保护率分别为9/10、10/10、10/10、10/10,表明疫苗有效性良好。本试验成功建立了LMH全悬浮培养细胞株,确定了FAdV-4抗原的生物反应器悬浮培养工艺,验证了悬浮培养抗原的免疫原性,为高效FAdV-4灭活疫苗的研制奠定了基础。     

荒漠肉苁蓉组织培养和细胞悬浮培养体系的建立

为了获得稳定的肉苁蓉资源,采用植物组织培养技术和细胞培养技术,以肉苁蓉（Cistanche deserticola Y.C. Ma）的肉质茎为研究材料,诱导出愈伤组织并继代培养,建立一种稳定的肉苁蓉细胞悬浮培养体系。研究结果表明：①肉苁蓉愈伤组织的最佳培养体系为：MS+PVP 2 000 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+GA₃ 1.0 mg/L+蔗糖30 g+琼脂7.0 g/L,pH值为5.8,培养条件为：光照12 h/d、温度（25±1）℃;其中,淡黄色的肉苁蓉愈伤组织为高产细胞株系。②肉苁蓉细胞的悬浮培养体系为：B5+ GA₃ 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L,pH值为5.8,培养条件为：光照18 h/d、培养温度（25±1）℃、摇床转速110 r/min。③细胞接种浓度为4.0 gDW/L时,细胞干重达到最大值,为12.350 gDW/L,该体系为最佳培养体系。该研究建立了肉苁蓉愈伤组织培养体系和稳定的肉苁蓉细胞悬浮培养体系。     

低温预处理和低温预培养对苜蓿新品系花药愈伤组织诱导的影响

对低温预处理和低温预培养苜蓿新品系花药培养的效应进行研究,4℃低温预处理和15℃低温预培养小孢子发育处于单核中期到单核靠边期的花药,以提高苜蓿花药愈伤组织诱导率。结果表明,4℃低温预处理2～4d和15℃低温预培养3d,均可以显著提高愈伤组织诱导率。     

苜蓿蛋白质及影响苜蓿粗蛋白含量的主要因素

作为一种重要的豆科牧草,苜蓿具有营养丰富、粗蛋白含量高的显著特点,在我国农业体系中扮演着重要的角色.本文综述了近年来关于苜蓿蛋白质,不同因素对苜蓿粗蛋白含量的影响这两方面的研究进展.     

苜蓿蛋白质及影响苜蓿粗蛋白含量的主要因素

作为一种重要的豆科牧草,苜蓿具有营养丰富、粗蛋白含量高的显著特点,在我国农业体系中扮演着重要的角色。本文综述了近年来关于苜蓿蛋白质,不同因素对苜蓿粗蛋白含量的影响这两方面的研究进展。     

苜蓿花药愈伤组织胚状体诱导因素的研究

以7个基因型的苜蓿花药愈伤组织为材料,进行了基因型、愈伤组织生长率、培养温度、培养基碳源等因素对苜蓿花药培养诱导胚状体影响的研究.结果表明:不同基因型苜蓿花药愈伤组织生长率、胚状体诱导率都存在显著性差异,两者的相关系数r=-0.326 1(P＜0.01),两者没有明显的相关性;低温处理可促进花药愈伤组织的分化,4℃低温...     

影响紫花苜蓿花药培养因素的探讨与分析

从外植体的选取时期及处理、培养基及激素组合、培养条件等多方面分析,影响紫花苜蓿花药培养的因素,并对花粉植株倍性鉴定、驯化移栽和花粉植株的遗传稳定性进行了初步探讨.     

影响紫花苜蓿花药培养因素的探讨与分析

从外植体的选取时期及处理、培养基及激素组合、培养条件等多方面分析,影响紫花苜蓿花药培养的因素,并对花粉植株倍性鉴定、驯化移栽和花粉植株的遗传稳定性进行了初步探讨。     

苜蓿根瘤菌有效性及其影响因子分析

以阿尔冈金(Medicago sativa L. cv. Algonquin)和陇东苜蓿(M.sativa L. cv. Longdong)为材料,在甘肃省5个生态区系统调查了春、夏、秋根瘤菌(Rhizobium)有效性及其影响因子。结果表明:阿尔冈金的总根瘤数、总根瘤重极显著高于陇东苜蓿;但有效根瘤数和有效根瘤重在品种间差异不显著;两个苜蓿品种主要在春季结瘤,其总根瘤数占春、夏、秋3季的63.3%,总根瘤重占52.2%,有效根瘤数占55.6%,有效根瘤重占51.2%;春季根瘤菌的有效性比夏、秋季高;苜蓿根瘤菌的有效性以黑垆土最好,其次为灰钙土和灌淤土,而亚高山草甸土和褐土的有效性较差。     

谷氨酰胺、脯氨酸和激素对苜蓿花药培养的影响

为提高苜蓿(Medicago sativa L.)花药培养效率,以小孢子发育处于单核中期到单核靠边期的花药为材料,对谷氨酰胺、脯氨酸和激素配比对花药培养的影响进行研究。结果表明:培养基中附加谷氨酰胺或脯氨酸对苜蓿花药愈伤组织诱导、增殖和分化都是有益的,其中谷氨酰胺700 mg/L或脯氨酸600 mg/L的效果较佳;增殖培养基中附加2 mg/L 2,4-D和0.5mg/L 6-BA配合使用较单独使用更有利于愈伤组织增殖和后期绿苗分化;分化培养基中附加0.5 mg/L NAA和2 mg/L KT的绿苗分化率较高。     

苜蓿雄性不育系花药愈伤形成及分化培养条件的研究

以苜蓿雄性不育株系及其可育株系的花药为外植体,研究取材时间和不同激素配比对其愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,雄性不育株系花药培养时,以现蕾初期取材、MS为基本培养基的条件下出愈率较理想。愈伤组织诱导的适宜培养基为:MS+0.5mg/L 2,4-D+0.25mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+3mg/L KT+3%蔗糖+0.7%琼脂(出愈率66.7%);不育与可育植株花药愈伤适宜的分化培养基分别为:MS+1mg/L KT+0.2mg/L NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂(分化率75%)和MS+4mg/L KT+0.2mg/L NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂(分化率79%)。     

不同紫花苜蓿品种的氮效率比较及差异机制研究

为探讨紫花苜蓿氮效率差异及其差异机制,以8个紫花苜蓿品种(‘LW6010’、‘甘农5号’、‘甘农3号’、‘新牧1号’、‘甘农7号’和‘龙牧801’、‘陇东’苜蓿和‘金皇后’)为试验材料,采用营养液砂培法,设3个氮水平(21 mg·L^-1,210 mg·L^-1,420 mg·L^-1),测定其生长特性和氮素固定、吸收及转化特性相关指标,并采用主成分分析法来探讨以上特性对氮效率的影响。结果表明：低氮、适宜氮和高氮下,氮高效型紫花苜蓿(‘LW6010’、‘甘农5号’)的生长特性和氮素固定、吸收、转化特性均优于氮低效型紫花苜蓿(‘陇东’苜蓿和‘金皇后’),而氮常效型紫花苜蓿(‘甘农3号’和‘新牧1号’)和氮反效性紫花苜蓿(‘甘农7号’、‘龙牧801’)则介于二者之间,且在不同氮水平下表现相反;又根据隶属函数综合评价,‘LW6010’和‘甘农5号’的隶属函数综合值达到最大;主成分分析表明,根瘤数和根瘤重对紫花苜蓿的氮效率贡献率最大,分别达到了8.82%和8.43%。     

苜蓿外植体再生系统的建立研究

以5个品种的下胚轴、叶片和子叶为外植体研究了不同培养基、不同激素种类和配比以及脯氨酸、谷胱甘肽和蔗糖对苜蓿胚性愈伤组织和胚状体诱导、成苗和移栽的影响,结果表明:中苜1号叶片外植体胚性愈伤组织诱导率和胚状体诱导率最高;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH+2,4-D4.0mg·L-1+BA0.5mg·L-1;最佳胚状体诱导和成苗培养基均为MSO;脯氨酸对胚状体诱导无明显作用;谷胱甘肽为15mg·L-1、蔗糖为2%时诱导率最大。筛选出的5个基因型的胚状体诱导率为58%～77%,平均胚状体数目25～60个,胚状体再生率16%～72%,生根率为93%,移栽成活率为94%。另外,还建立了苜蓿高频再生组织培养体系,为今后的基因转化改良苜蓿性状打下了基础。     

紫花苜蓿组织培养再生体系的建立

以紫花苜蓿无菌苗的下胚轴、子叶、叶片和叶柄为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对胚性愈伤组织诱导的影响以及不同分化培养基对胚状体分化的影响.结果表明:下胚轴外植体胚性愈伤组织诱导率最高;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH 2.0mg/L 2,4-D 0.5 mg/L 6-BA;最佳胚状体诱导培养基为MSO 2.0 mg/L 6-BA 0.5mg/L NAA;成苗培养基为1/2 MS 1% 蔗糖 0.7%琼脂.     

紫花苜蓿ISSR-PCR反应体系的建立与优化

通过优化影响紫花苜蓿(Medicago sativa L.)ISSR-PCR的主要参数,建立适于紫花苜蓿的ISSR反应体系和扩增程序。在20μL体系中各反应物的最适含量为:15 ng模板DNA,0.2 mmol/L dNTP,0.4μmol/L ISSR引物,0.8 U Taq DNA聚合酶,2μL 10×PCR Buffer,1.5 mmol/L MgCl₂,2.5%去离子甲酰胺。PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,62℃(62℃~58℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共11个循环,每个循环退火温度降1℃;94℃变性30 s,52℃(52℃~48℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共24个循环;72℃延伸5 min,25℃保温。