巴氏消毒牛奶与羊奶粉中主要蛋白质组成的SDS-PAGE比较

采用SDS-PAGE凝胶电泳方法对相同蛋白质质量和相同样品体积的巴氏消毒牛奶和羊奶粉的蛋白质组成进行分析,分离后的凝胶经考马斯亮蓝染色得到巴氏消毒牛奶和羊奶的电泳图谱,比较了巴氏消毒牛奶和羊奶中蛋白质组成的差异。结果表明,在同等条件下,牛奶中的αs-酪蛋白和β-酪蛋白以及κ-酪蛋白含量均高于羊奶粉。     

黑麦属贮藏蛋白的SDS-PAGE分析

对72份黑麦属材料的贮藏蛋白进行了SDS-PAGE分析。结果表明,黑麦属贮藏蛋白与普通小麦不同,可明显区分为4种组分:HMW、-γ75k、ω和-γ40k。黑麦属72份材料共有54种贮藏蛋白带型,每个材料可分离出7~11条带,多数为9~10条。在HMW区检测到6种亚基,22种不同组合。-γ40k区多为3条带,其他区域均以2条带最为普遍。各区域均可反映一定程度的变异,但以HMW-GS和-γ45区变异最大,揭示的材料间的遗传相似系数(GS)分别为0.622和0.776。72份材料平均GS值为0.748,变幅为0.450~1.000。森林黑麦(S.sylvestre)种内的GS值最高,达0.970,而普通黑麦(S.cereale)种内的GS值最低,为0.797。森林黑麦与普通黑麦的种间GS值最低,为0.633,与其他2个种的种间GS值也均较低(<0.700)。瓦维洛夫黑麦(S.vavilovii)与森林黑麦(S.cereale)的种间GS值高达0.785。该结果说明,SDS-PAGE可以有效地揭示黑麦属贮藏蛋白丰富的遗传差异,并可在一定程度上反映黑麦属种间的亲缘关系。     

常乳中牛乳铁蛋白的纯化及抗菌活性研究

[目的]研究从常乳中纯化牛乳铁蛋白的工艺条件,探讨牛乳铁蛋白的抗菌活性。[方法]选用SP sepharose HP作为强阳离子交换介质,利用AKTApurifier10高效液相色谱仪纯化牛乳铁蛋白。[结果]结果表明,牛乳铁蛋白在pH值7.5、浓度0.85 mol/L的NaCl洗脱液中可以被洗脱下来,且产品纯度为90%以上。牛乳铁蛋白浓度为5 mg/ml时对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用。[结论]该研究建立了从常乳中纯化牛乳铁蛋白的方法,为大规模生产具有活性的牛乳铁蛋白奠定了基础。     

龙眼体胚发生过程中特异蛋白的IEF和SDS-PAGE分析

植物体细胞胚胎发生的机理研究是目前植物细胞工程的前沿和优先发展领域 [1] .体细胞胚胎发生被认为是分离胚胎发育相关基因的良好替代体系 ,同时 ,进行体细胞胚胎发生研究对于研究植物细胞全能性的机制、基因的表达和胚胎的发育具有重要意义 [2 ] .龙眼 ( Dimocarpuslongan Lour.)是我国南方的重要热带、亚热带特产果树 .在龙眼上已建立了木本植物中最为优良的体细胞胚胎发生系统 [3 ,4] .体细胞胚胎与合子胚在生化上具有相似性 .蛋白质是基因表达的产物 ,而体细胞胚胎发生是胚胎发生相关基因按一定时空顺序表达的结果 .在体细胞胚胎发生…     

青海不同基因型蚕豆蛋白组成及清蛋白和球蛋白亚基的SDS-PAGE分析

采用连续提取蛋白法和SDS-PAGE技术分析了青海省11个不同基因型蚕豆的蛋白质组成以及清蛋白、球蛋白亚基的差异.结果表明:蚕豆蛋白主要由清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白和其他蛋白组成,不同基因型蚕豆的蛋白质含量及其组成存在一定的变异,其中清蛋白和球蛋白是蚕豆蛋白主要组成部分,占总蛋白的75.08%.不同基因型蚕豆的清蛋白和球蛋白亚基存在一定的差异,蚕豆清蛋白亚基由97、66+67、63、50、45、38+41、22ku等7个基本亚基组成外,还有96ku特异亚基;球蛋白亚基由63、56、52、47、22ku等5个基本亚基组成外,还有46ku的特异亚基.     

抗幽门螺杆菌UreB蛋白免疫乳的制备

诱导UreB蛋白克隆菌株表达UreB蛋白,并制备成亚单位疫苗,免疫正常泌乳奶牛,测定乳清中特异性抗体效价以及牛乳常规成分、血清常规成分等健康指标.结果表明:UreB蛋白表达浓度为0.39 mg/mL;乳清特异性抗体IgG和IgM效价显著高于对照组(P＜0.05),IgA效价有所上升,但未达到显著水平(P＞0.05);奶...     

凝胶色谱法测定乳清中主要蛋白的相对分子量及其分布

本研究采用凝胶色谱分析技术,以牛乳乳清为研究对象,建立一种简便、快速的测定α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量的方法。通过一系列的试验,确定最佳凝胶色谱试验条件:采用PBS缓冲液作为流动相,柱温为35℃,检测器为示差折光检测器,流速1 m L/min,进样量为20μL。在该工艺条件下,牛乳乳清中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白被有效地分离纯化,蛋白的回收率在90%以上。本方法具有良好的重复性和稳定性,为短时间内对乳制品中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白进行分离和定量检测提供一种新的方法,满足了科研和生产的需求。     

消除乳清蛋白中β-乳球蛋白致敏性的研究进展

现阶段的婴儿配方奶粉添加脱盐牛乳清粉以调节乳清与酪蛋白的比例,而乳清粉中含有大量的β-乳球蛋白,β-乳球蛋白可能引起婴幼儿的食物过敏,文章就消除乳清中β-乳球蛋白致敏性的研究进展进行了详尽阐述。     

一种改进的双色SDS-PAGE凝胶和可视化上样电泳方法

SDS-PAGE电泳是蛋白质分析和研究中的重要高效手段．由于分离胶、浓缩胶与电泳缓冲液以及空气都是无色透明的物质,在胶的制作和点样过程中仅仅通过浓缩胶相与缓冲液水相或空气相对光的折射来准确判断点样孔的位置并进行点样操作,因而比较困难．该文介绍1种在浓缩胶中添加颜色染料,使浓缩胶显现颜色,以此可视化区分浓缩胶中点样孔（井）位置的方法,可以准确而高效完成点样操作,使传统的SDS-PAGE点样过程通过折光性来判断变为可视化准确判断,提高点样效率和电泳质量．      

免疫乳对断奶仔猪免疫功能的影响

[目的]研究免疫乳对断奶仔猪免疫功能的影响。[方法]将30头断奶仔猪随机分为3组,即抗大肠杆菌免疫乳组、抗沙门氏菌免疫乳组和对照组,10头/组,分别饲喂抗体滴度均为28抗大肠杆菌免疫乳、抗沙门氏菌免疫乳和普通常乳。饲喂方法为经口灌服,20ml/次,2次/d,持续2周。2周后,测定血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白、IgA、IgM和IgG含量、血清抗体水平和淋巴细胞转化率。[结果]免疫乳能显著提高断奶仔猪血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白、IgA、IgM和IgG的含量,血清中抗体水平以及淋巴细胞转化率（P〈0.05）。[结论]口服免疫乳可明显增强仔猪免疫力。     

荷斯坦奶牛初乳与常乳代谢物差异分析

【目的】基于非靶向代谢组学技术,对荷斯坦奶牛初乳和常乳中的代谢物进行鉴定与分析。【方法】选择年龄、体况及预产期相近、胎次相同的健康围产期经产荷斯坦奶牛12头,分别于分娩后1 h和21 d采集乳汁,离心并收集乳清,依次记为初乳组（C_0）和常乳组（C_21）。采用代谢组学技术对初乳组和常乳组乳清进行分析,结合正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）和学生t检验,以变量投影重要度(variable importance in the projection,VIP)＞1,P＜0.05为标准筛选差异代谢物,并对筛选出的差异代谢物进行聚类分析、显著差异代谢物筛选和KEGG通路分析。【结果】在荷斯坦奶牛初乳组（C_0）和常乳组（C_21）共筛选到97种差异代谢物,通过聚类热图可以看出,大多数代谢物在初乳组的含量高于常乳组;差异代谢物随机森林图显示,排名靠前的9种显著差异代谢物分别为乌头酸、柠康酸、龙胆酸、泛酸、牛磺酸、氧戊二酸、柠檬酸、6’唾液酸乳糖和精胺。KEGG通路富集分析显示,8条主要的代谢通路分别为酮体的合成与降解、牛磺酸与次黄嘌呤代谢、丙酮酸代谢、嘌呤代谢、嘧啶代谢、氨基糖与核苷酸糖代谢、三羧酸循环和丁酸代谢。【结论】荷斯坦奶牛初乳中脂质、氨基酸和核苷酸代谢物的含量高于常乳,而常乳中糖类代谢物含量高于初乳,初乳与常乳中代谢物水平的差异为后续代谢物机制的研究奠定了理论基础。     

奶牛初乳SIgA的提纯与电泳分析

为了建立提取奶牛初乳中SIgA的方法，本试验取分娩当日的奶牛乳汁，经10000 r/min离心10min，0.2mol/L（PH=6.0）PBS透析，上清液加0.06 mol/L硫酸锌处理后，调PH值为6.8-6.9，加入饱和硫酸铵，取沉淀溶于水，并在0.02mol/L（PH=8.0）PBS中透析至无NH4+，样品浓缩后上DEAE Sepharose (Fast Flow)柱，用0.02mol/L（PH=8.0）至0.3mol/L（PH=8.0）PBS梯度洗脱；收集峰蛋白上葡聚糖凝胶-200层析柱，用0.01mol/L（PH=7.4）PBS洗脱；收集出现蛋白峰的洗脱液，经SDS-PAGE电泳鉴定，为SIgA单体。经初步测定奶牛初乳中SIgA含量为3.47mg/ml。本试验已成功建立提取奶牛初乳中SIgA的方法。     

妊娠后期母猪饲喂大豆黄酮对泌乳性能及初乳中激素水平的影响

选用１６头预产期和胎次基本一致的大二杂交（大约克×二花脸）经产母猪,随机分成对照和试验两组。试验组母猪于预产期前一个月开始在日粮中添加０．００５ｍｇ／ｋｇ大豆黄酮,产后一周停喂。结果发现：饲喂大豆黄酮２３ｄ后,母猪血液中胰岛素水平下降（Ｐ＜０．０５）,胰岛素样生长因子（ＩＧＦ－１）水平上升（Ｐ＜０．０１）;仔猪初生窝重和２０日龄窝重显著地高于对照组（Ｐ＜０．０５）;母猪第１０天和第２０天的每次泌乳量分别比对照组提高１０．５７％（Ｐ＜０．０５）和１４．６７％（Ｐ＜０．０１）。与对照组相比,初乳中生长激素（ＧＨ）、ＩＧＦ－１和促甲状腺素（ＴＳＨ）含量均明显提高（Ｐ＜０．０５）,但蛋白质含量无明显变化     

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定壳斗科植物种质资源

通过对5个壳斗科植物盐溶蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析,为壳斗科植物的种质资源鉴定提供科学依据.以栗属(板栗、锥粟、茅栗)和栎属(麻栎)5个壳斗科植物为试验材料,分别提取种子内盐溶蛋白,并进行PAGE电泳检测.结果表明,茅粟(Castanea seguinii Dode)的盐溶蛋白种类最丰富,有19条,而麻栎(Quercus acutissima Carr)最少,有11条.对每条谱带进行相似性比较,发现茅栗与板栗(Castanea mollissima Bl)的相似程度最高,其次是锥栗[Castanea henryi(Skan)Rehd.et.Wils]和麻栎,再次是茅栗与锥栗,而板栗与麻栎的差异性最大.从而推断出它们之间进化关系:麻栎→锥栗→茅栗→板栗.袁明利用SDS-PAGE技术可用于鉴定壳斗科植物之间的进化关系和亲缘关系.     

牛初乳提取物(BCE)对成骨细胞增殖及胎鼠骨骼发育的影响

ＮＩＨ小鼠孕期连续服用牛初乳提取物（ＢＣＥ）、活性钙和蒸馏水,孕后第１８天解剖母鼠,检查胎鼠骨骼发育情况。结果表明,ＢＣＥ能显著促进胎鼠骨骼的生长发育,比单纯补钙更有效。用离体培养的新生大鼠头盖骨成骨细胞检测不同浓度的ＢＣＥ和表皮生长因子（ＥＧＦ）的促细胞增殖作用时发现,ＢＣＥ浓度在２μｇ／ｍＬ至２０ｍｇ／ｍＬ之间递增时,其促细胞增殖作用随之加强,继续提高浓度则对细胞增殖产生抑制作用;不同浓度的ＥＧＦ也有促细胞增殖作用,但ＥＧＦ的剂量曲线比较平缓,提示ＢＣＥ的促细胞增殖作用是多种生长因子协同作用的结果。实验结果表明ＢＣＥ具有促进骨骼发育的作用。     

SDS－PAGE电泳在鉴别用牛乳掺伪的新疆特种乳中的应用

[目的]采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴别一定比例掺伪的特种乳中所含的牛乳成分及确定最低检测掺伪比例。[方法]按一定的比例(1∶1、1∶4、1∶10、1∶20、1∶100、1∶200和1∶400(V牛乳/V特种乳))掺伪,离心分离乳清蛋白,SDS-PAGE电泳,确定掺伪差异性蛋白并进行灰度分析。[结果]SDS-PAGE可以快速、有效地分离各乳乳清蛋白以及掺伪的牛乳乳清蛋白。[结论]SDS-PAGE鉴别掺伪的最低比例为1∶10(V_(牛乳_/V_(特种乳))。     

牛奶中牛DNA提取试剂盒法的建立

【目的】提高牛奶中牛DNA的分离提取效率,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒法。【方法】以从牧场中采集的新鲜牛奶为材料,在前期建立的牛奶中牛DNA提取方法基础上,针对消化温度(55,60,65℃)、消化时间(10,60,120,180,240 min)、质量分数20%十二烷基硫酸钠(SDS)裂解液用量(20,35,50,65,80μL)、20 mg/mL蛋白酶K用量(0,10,30,50,70μL)等重要参数依次进行优化,通过DNA品质测定筛选最佳的DNA提取条件,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒方法,并用深加工的奶粉和高低温液态奶制品对试剂盒方法进行验证。【结果】不同消化温度和消化时间从牛奶中提取的总DNA、线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的完整性均表现良好,但不同消化温度和消化时间的DNA质量浓度和纯度存在差异,在消化温度为60℃、消化时间为10 min、SDS裂解液用量为50μL、蛋白酶K用量为50μL时,提取的DNA品质较优,是最佳的DNA提取条件,该条件下DNA平均质量浓度为97 ng/μL,平均纯度为1.44。对优化指标后建立的试剂盒方法进行验证,结果表明该方法不仅适用于生鲜牛奶,而且还适用于液态和固态奶制品。【结论】在所获得的最佳DNA提取条件下,牛奶体细胞裂解充分、完全,所提DNA质量浓度和纯度较高,完整性较好,PCR扩增性能较强。建立的牛奶中牛DNA提取试剂盒法适用范围较广。     

适于SDSPAGE分析的高粱叶片蛋白质提取方法

为了探索适于高粱叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,对TCA/丙酮沉淀后的蛋白质分别用裂解液Ⅰ(尿素+硫脲+CHAPS+DTT)和裂解液Ⅱ(尿素+DTT)2种裂解液进行裂解,用改良的Bradford法进行定量分析,并进行SDS-PAGE分离检测。结果表明,裂解液Ⅰ所得蛋白质质量浓度(2.538g/L)高于裂解液Ⅱ所得蛋白质质量浓度(1.905g/L),且两者呈极显著差异(P<0.05),但裂解液Ⅰ所得蛋白质电泳条带出现1条杂带;而裂解液Ⅱ所得蛋白质能满足上样要求且电泳条带清晰无杂带。因此,TCA/丙酮沉淀并用裂解液Ⅱ进行裂解的方法适用于高粱叶片的SDS-PAGE分析。