哺乳动物血液基因组DNA提取方法的比较研究

<正>随着现代分子生物学技术的迅速发展,用于提取高纯度DNA的试剂盒已经商品化生产,但是价格较高,在实验室普及使用尚有难度。目前,各地实验室常用的提取哺乳动物血液基因组DNA的方法有CTAB法、传统DNA提取方法、酚-氯仿法及试剂盒法,这些方法都是经过大量试验证明其可行性,但并不是所有方法都能提取到纯度较高的血液基因组     

鹅血液基因组DNA的简单快速提取方法研究

本研究针对家禽血液红细胞有细胞核的特点,研究适合鹅血液基因组DNA的廉价、简便、快速的DNA提取方法,并为其它禽(鸟)类相关操作提供参考。通过裂解细胞,利用简便快速的操作方法将蛋白质和核酸分离,去除杂质,沉淀核酸,获得大量基因组DNA,并通过基因扩增检测其质量和效果。该方法提取的基因组DNA电泳检测条带明量,无拖尾,含量及纯度均较高,能够用于分子生物学实验研究。与传统的酚-氯仿DNA抽提方法相比,本实验建立的血液基因组DNA提取方法具有成本低、操作步骤简便和快速的特点,特别是对大量样品的提取更为实用。     

东北林蛙基因组DNA不同提取方法的比较

为了研究不同方法提取东北林蛙基因组DNA的纯度差异,试验以东北林蛙为研究对象,采用高盐浓度抽提法、苯酚/氯仿抽提法、十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)、十二烷基磺酸钠法(SDS法)提取基因组DNA,进行PCR验证。结果表明:4种提取方法均能获得完整的基因组DNA,可以用于PCR扩增。高盐浓度抽提法提取的DNA纯度和制得率最高,成本低,安全系数高,操作简单,能够满足提取大量DNA的需求;其他3种方法需使用有毒、有害的有机试剂且时间较长。     

对猪肝脏基因组DNA提取与纯化的研究

对血液中提取基因组DNA的方法加以改进,获得了一种提取猪肾组织中DNA的有效方法.试验表明,利用SDS裂解,氯仿、异戊醇抽提母猪肝脏中基因组DNA,得到的DNA纯度较高,可用来进一步进行RAPD分析和PCR扩增,用于各种分子生物学实验.     

褐马鸡非损伤性取样、微量取样DNA提取的初步研究

褐马鸡是中国特有的国家Ⅰ级保护濒危鸟类,为了解决野生褐马鸡分子生物学研究中存在的取样局限性,采用非伤害性取样和非损伤性取样,对褐马鸡微量血液、皮、脚垫、指甲、羽毛、陈旧标本的皮以及粪便的DNA提取进行了初步研究。结果表明,从褐马鸡微量血液（10μL）中可以提取到浓度和纯度高的基因组DNA（41.85μg）;从褐马鸡的皮、脚垫、指甲、羽毛中可以提取出基因组DNA并扩增出目标片断;陈旧标本的皮能够提取到基因组DNA。该研究将拓宽褐马鸡分子生物学研究的采样范围,并可以提高野外非损伤性取样在保护遗传学中的应用。     

磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究

为确定一种稳定高效的鸡血液DNA提取方法,满足基因组检测对DNA的要求,研究应用磁珠法、酚-氯仿法和试剂盒法。分别对抗凝血和凝血状态的鸡血液样品进行基因组DNA提取,通过超分光光度计和1%琼脂糖凝胶电泳评价所获得的DNA质量,并对三种提取方法所需成本进行估算和比较。结果显示：三种方法均能从两种不同状态血液样本中提取出基因组DNA,酚-氯仿法最为经济,但耗时长且需要使用危险化学品,磁珠法与试剂盒法具有耗时短和环保的优点,且磁珠法较试剂盒法更经济。研究表明磁珠法使用的试剂量少、操作简单、耗时短、日提取样本数目远大于其他两种方法,是三种方法中最为快捷的方法,可以满足实际生产中大批量鸡血液基因组DNA提取的要求。     

蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较

本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。     

一种禽类血液基因组DNA高效提取通用方法的建立

为了建立一种适合禽类血液的廉价、高效、通用的基因组DNA提取方法,试验采用鸡、鸭、鹅、鸽、火鸡、麻雀6种禽类血液为材料,提取的禽类血液DNA经微量分光光度计分析、基因组DNA凝胶成像分析以及PCR扩增效果检测。结果表明:提取的6种禽类血液DNA质量较好(OD260/OD280值范围为1.80~1.84,OD260/OD230值范围为2.21~2.30),基因组DNA电泳主条带和PCR扩增产物条带清晰、整齐、无拖带。说明本方法能够完全适用于大批量禽类血液基因组DNA的提取,且DNA纯度较好,满足后续相关分子生物学试验要求。     

鸡基因组DNA不同提取方法的比较

为选择适合鸡全血DNA提取的方法,满足鸡育种中基因检测对DNA的要求,试验研究了酚-氯仿、试剂盒和优化盐析法提取鸡全血DNA。优化盐析法提取鸡血液基因组DNA,经核酸蛋白定量仪检测,优化盐析法所得DNA的纯度OD_(260)/OD_(280)达1.855±0.036,所提DNA质量较好,利用DNA样本为模板进行PCR扩增,可以得到满意的扩增效果。与酚-氯仿、试剂盒的方法相比,优化盐析法节约了时间和成本,所需仪器简单,是一种较好的提取鸡全血DNA的方法,适合生产中大批量鸡血液基因组DNA提取。     

牛凝固血基因组DNA提取方法的比较及优化

为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。     

栗蚕基因组DNA提取方法比较试验

栗蚕蛹中含有大量的脂肪和蛋白质类物质,这些物质易与DNA结合形成粘稠的胶状物,影响栗蚕基因组DNA的提取。针对上述问题,本研究采用十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)消化法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取栗蚕基因组总DNA进行比较试验。结果表明:CTAB法提取的DNA产量高;SDS-PK法提取的DNA质量好。     

一种提取梨组织高质量基因组DNA的新方法

高质量DNA的提取是开展分子生物学研究的重要环节。针对梨组织中含有大量多糖、多酚等影响DNA提取质量的次生代谢产物的特点,本研究以梨叶片、果皮和果肉为材料,开发了一种新的基因组DNA提取方法——N-月桂酰肌氨酸钠法,并分别与常用的试剂盒及CTAB法进行比较分析。对三种方法提取DNA的总量、浓度及OD值等进行检测分析,结果表明：相比试剂盒及CTAB法,N-月桂酰肌氨酸钠法不需水浴加热,步骤少,操作简单,提取的DNA纯度、浓度均有较大提高,并且适用于大片段DNA的提取。因此,N-月桂酰肌氨酸钠法是一种可靠的高效获得梨基因组高质量DNA的新方法。     

小鼠基因组DNA提取方法比较研究

脱氧核糖核酸(DNA)作为大部分有机体和病毒的遗传物质,与生物的遗传与变异息息相关。很多研究都是基于核酸分析的基础开展的,对核酸的纯度要求很高。本研究采用4种常用方法提取小鼠基因组DNA,以探讨不同提取方法对DNA质量的影响。结果表明,酚/氯仿抽提法获得的DNA纯度较好,无RNA污染,但有少许蛋白质未剔除;试剂盒法提取到的DNA纯度高、核酸浓度大且无污染,但片段较小,可进行常规的PCR等核酸水平研究。     

苯酚/氯仿抽提法提取牛血与鸡血DNA部分条件的比较研究

为了探讨苯酚/氯仿抽提法中加入血液和红细胞裂解液(PBS)的量对DNA提取效果的影响以及找到针对牛血和鸡血最合适的DNA提取条件,试验以安格斯牛和静原鸡为研究对象,采用苯酚/氯仿抽提法提取血液基因组DNA。结果表明:在试验第1步加入200μL鸡血1次,用1 500μL PBS重复裂解2次,可以得到高质量鸡的基因组DNA。当加入鸡血的量过大时,提取的DNA浓度过高且不纯,蛋白质等外源核酸的污染较严重。在试验第1步加入500μL牛血1次,用1 500μL PBS裂解,重复2次,可以得到高质量牛的基因组DNA。苯酚/氯仿抽提法可以节省时间,还可以避免血液的浪费。     

一种快速鸡血样DNA提取方法的研究

本试验优化了鸡血样DNA提取方法,通过分光光度仪检测浓度达到216.35±100.02 ng/μL,OD260/OD280值1.83±0.28,与血液基因组提取试剂盒提取的DNA比较,差异显著(P0.05)。DNA样品经琼脂糖凝胶电泳检测带型清晰、整齐,无拖尾现象。结果显示,本法提取的鸡血样DNA在纯度和浓度上能够满足鸡分子基因检测的需求。     

绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的比较研究

本研究旨在比较5种DNA提取方法对绵羊血液中布氏杆菌DNA的提取效果及对PCR检测的影响。将不同浓度的疫苗株布氏杆菌加入绵羊全血中,采用3种DNA提取试剂盒和酚/氯仿法以及碘化钠法等5种方法提取模拟的绵羊血液样品中的DNA,评价所获得DNA的浓度、纯度和完整性,并采用布氏杆菌特异性PCR进行检测。同时,对各提取方法所需时间及经济成本进行了比较。结果表明,各方法均能提取获得绵羊全血中布氏杆菌DNA,3种试剂盒和碘化钠法获取布氏杆菌DNA的效果相同,而酚/氯仿法获取布氏杆菌DNA的效率最低或存在PCR抑制剂而不适合用于绵羊血液中布氏杆菌的PCR检测。碘化钠法具有耗时较短、成本低、方便的优点,是从绵羊血液中提取布氏杆菌DNA的良好方法。本研究结果为临床绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的选择提供了参考。     

家蚕核型多角体病毒多角体的快速提取方法

本文采用一种新的病毒多角体提取方法,对BmNPV和PcrNPV的多角体进行了提取,提取出的多角体分别用光学和电子扫描两种显微镜进行观察并拍照.同时从提取出的BmNPV多角体中提取其基因组DNA并电泳检测.发现DNA纯度较好.结果表明,可以用此方法大量制备病毒多角体.     

辽东栎基因组DNA提取方法比较与优化

针对辽东栎叶片组织中多糖含量高严重影响基因组DNA的提取问题,比较了改良SDS法、改良CTAB法1和改良CTAB法2等3种方法的处理效果。结果表明：用改良SDS法提取DNA多糖杂质多,易降解、褐化严重;用改良CTAB法1提取DNA难以去除植物组织中的多糖类杂质;而改良CTAB法2提取的DNA,杂质少,纯度高。     

全血中DNA的5种不同提取方法比较研究

比较几种从血液中提取DNA方法所需要的时间、样本量、提取的DNA纯度、产量以及成本等。结果表明,几种方法所提取的DNA质量都能达到分子生物学的试验要求,但在DNA的纯度、产量、试验时间和价格等方面存在差别。实验人员可根据自己的实验要求、实验室以及经济条件等选择适当的方法。     

两种动物组织DNA提取方法的比较

本试验以猪耳组织为试验样本,采用酚-氯仿抽提方法[1]和DNA提取试剂盒方法进行DNA提取的对比试验,并通过核酸蛋白定量仪测量了DNA浓度和纯度,并进行了PCR扩增实验。试验表明,两种提取方法都可以进行PCR扩增试验,但采用试剂盒提取方法提取DNA可以直接进行PCR扩增,而酚-氯仿提取法需放置一段时间后效果好,并且采用试剂盒提取的DNA纯度高、速度快、节省耗材、结果稳定、重复性强,适合大量DNA提取试验。