用蔗糖密度梯度离心法纯化小球隐孢子虫卵囊试验

用蔗糖密度梯度离心法从接种犊牛粪便中纯化小球隐孢子虫卵囊，该方法操作简便、快速、经济、获得的卵囊纯度高，回收率达92．0％适合于国内普通实验室使用。     

PCR方法检测奶牛粪便中鼠隐孢子虫

从含有鼠隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取 Ｄ Ｎ Ａ 用作 Ｐ Ｃ Ｒ 模板,用 １ 对人工合成的寡核苷酸作为 Ｐ Ｃ Ｒ 引物,扩增大小为 ５４０ ｂｐ 的特异片段。 Ｐ Ｃ Ｒ 产物经电泳鉴定,表明可从含隐孢子卵囊的奶牛粪便标本 Ｄ Ｎ Ａ 抽提物中扩增出目的片段,而其他几种寄生虫及阴性对照均不能扩增出特异片段。本方法的敏感性最低可检测到含卵囊 ４００ 个／ｍ Ｌ 的样本,具有敏感性高、特异性强的特点。     

Nested PCR检测微量隐孢子虫卵囊

根据隐孢子虫18SrDNA序列，设计出隐孢子虫属和鼠隐孢子虫种的特异性引物，进行PCR和Nested PCR反应，先后分剐扩增出1条540bp和1条250bp的条带。研究表明，NestedPCR具有高度的特异性和敏感性。应用NestedPCR可检测1～10个鼠隐孢子虫卵囊，其敏感性是饱和蔗糖漂浮法的10^5倍以上。     

隐孢子虫卵囊部分特性研究

本试验对小球隐孢子虫卵囊、鼠隐孢子虫卵囊以及新发现的隐孢子虫亚型卵囊的抗酸染色特性进行了观察，发现只有小球隐孢子虫卵囊具有酸染色特性。     

离心速度与时间对牛隐孢子虫卵囊浮集率的影响

离心速度与时间对牛隐孢子虫卵囊浮集率的影响韩先桢（广东省国营海鸥农场畜牧公司,徐闻５２４１３２）隐孢子虫病是由隐孢子虫寄生于鸟类、啮齿类、爬行类、哺乳类动物及人呼吸道、消化道上皮引起的一种原虫性寄生虫病。该病流行较广,造成的经济损失严重。目前,国内家...     

牛隐孢子虫卵囊分离和纯化方法的比较试验

运用3种粪便漂浮法、3种染色法和2种分离提纯法对10头犊牛的粪便进行卵囊检查、分离纯化，对这些方法进行比较。试验结果显示：饱和硫酸锌漂浮法结合姬姆萨氏染色法检查隐孢子虫卵囊，检出率最高、效果最佳；蔗糖密度梯度离心法分离纯化隐孢子虫卵囊。收集的卵囊最多，效果最好。     

隐孢子虫卵囊形态学观察及动物交叉感染试验

作者观察了从湖南６种动物分离出的隐孢子虫卵囊的光镜下形态，并以鸡源、牛源和猪源隐孢子虫卵囊人工感染实验动物作交叉感染性研究。结果鉴定出隐孢子虫３个种，即贝氏隐孢子虫（Ｃ．ｂａｉｌｅｙｉ），寄生于鸡、鸭；微小隐孢子虫（Ｃ．Ｐａｒｖｕｍ），寄生于牛、山羊、猪、家兔和小鼠；鼠隐孢子虫（Ｃ．ｍｕｒｉｓ），寄生于牛。交叉感染结果表明，来自鸡的隐孢子虫可以感染雏鸡和雏鸭，而不能感染小鼠和家兔；来自牛的隐孢子虫可以感染小鼠和家兔而不能感染雏鸡，来自猪的隐孢子虫可以感染小鼠而对雏鸡无感染性。作者认为，哺乳类和鸟类的隐孢子虫可能在宿主纲的水平上具有宿主持异性。     

牛隐孢子虫卵囊排出规律的研究

比较研究了3头隐孢子虫感染强阳性牛3天早、中、晚粪中卵囊数目。结果表明,牛的排卵囊数无个体差异,但有昼夜时间差异:晚上明显高于早上。据此,对带虫牛舍进行清扫及消毒工作和采集检查的样均宜在早上进行。     

套式PCR检测奶牛粪便中隐孢子虫

为了检测样品中的微量隐孢子虫，从含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA用作初始PCR（Initial-PCR）模板，以稀释的初始PCR的产物为模板进行套式PCR（Nested-PCR），用两对人工合成寡核苷酸分别作为两PCR的引物，扩增大小分别为540pb、258pb的特异片段。PCR产物经电泳鉴定，可从阳性粪便标本DNA抽提物中扩增出目的片段，而阴性对照不能扩增目的片段；初始PCR、套式PCR的敏感小生最低可分别检测到含卵囊100、5个／g粪便。初步应用结果表明某奶牛场的奶牛自然感染率为16.4％。试验表明套式PCR的敏感性比普通PCR约高100倍，能用于奶牛隐孢子虫感染情况的调查。     

贝氏隐孢子虫不同感染剂量对樱桃谷鸭的致病性

为了确定贝氏隐孢子虫对鸭的致病性,本试验分为2×105、4×105、8×105、16×105、32×105、64×105个卵囊剂量组,实验感染2日龄樱桃谷品种雏鸭。从感染鸭的排卵囊情况、临床症状、组织病理学变化、病理形态学变化比较了不同剂量组的致病情况。结果表明,贝氏隐孢子虫主要引起呼吸困难症状,气管炎和法氏囊炎病变。其致病性与剂量有明显的相关性。贝氏隐孢子虫有较强致病性,而且病程较长,但其致死率较低。     

抗鼠隐孢子虫单克隆抗体的研究

利用鼠隐孢子虫卵囊脱囊物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，经过３￣４次有限稀释法克隆化，获得５株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株。所获抗体均属ＩｇＧ１。ＩＦＡ检测结果表明：２Ｇ７株单抗作用于卵囊壁抗原，而ＩＡ４、２Ｅ７、３Ｇ３、４Ａ７株单抗作用于子孢子表面抗原。诱生腹水经过反复冻融、冻干及硫酸铵沉淀后，抗体活性无明显变化。５株单抗均不与贝氏隐孢子虫及柔嫩艾美尔球虫产生交叉反应，与小孢隐     

隐孢子虫（Cryptosporidium）病毒的鉴定及其特性

根据已发表的隐孢子虫病毒的序列,设计合成2对引物,对小球隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)、鼠隐孢子虫(C.muris)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)进行RT-PCR扩增,结果发现仅小球隐孢子虫(C.parvum)含有大小约为1.7×103nt和1.3×103nt2个片段的dsRNA病毒.将其PCR产物连接到pMD18-T载体上进行克隆测序,经与GenBank比较,含这2个片段的dsRNA病毒与已发表的该虫病毒的同源性分别为96%和98%.电泳鉴定发现,该病毒对低浓度RNA酶不敏感,且不能被DNA酶降解.依赖RNA的RNA聚合酶活性测定结果表明,该病毒具有该聚合酶的活性.电镜观察未发现存在病毒样粒子.     

巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR(Primary PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325bp和820bp。优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验。建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2 86×103个/ml和≤2 86个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化,其起始PCR和巢式PCR粪便中卵囊最低检测值分别为2 86×107个/g和≤2 86个/g。有望发展为试剂盒。     

猴源人隐孢子虫的分离与鉴定

为了解感染不同灵长类动物的隐孢子虫种类以及与感染人的人隐孢子虫(C.hominis)之间的遗传差异,本研究采用形态学和分子生物学方法对猴源隐孢子虫进行分离和鉴定。利用常规方法分离猴粪便中的隐孢子虫卵囊,通过改良抗酸染色和荧光显微镜观察对其进行形态学鉴定;并采用PCR方法扩增其卵囊壁蛋白(COWP)基因和18SrRNA基因,扩增产物克隆至pMD-18-T载体中,对阳性克隆进行测序并作进化树分析。结果表明:抗酸染色和荧光检查结果与所报道的人隐孢子虫的结果一致。PCR扩增产物经电泳检测,明显地出现554bp和370bp大小的片段,与预期结果一致;两种基因的序列分析结果显示该猴源隐孢子虫与C.hominis的相似性均为100%。由此可认为本次分离的隐孢子虫为C.hominis。     

Investigation of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in a Public Water‐Treatment System

The objective of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in a public water‐treatment system and to relate the results to physical, chemical, bacteriological and climate parameters. From March to September 2006, 30 samples, 15 of raw water and 15 of treated water, were examined by membrane filtration and direct immunofluorescence (Merifluor). For each sample, a volume of 1000 l was collected. Of the raw‐water samples, 26.6% were positive for Cryptosporidium (mean concentration of 0.15 oocysts/l), and 6.66% were positive for Giardia (concentration of 0.2 cysts/l); 13.33% of the samples were positive for both (mean concentrations of 0.06 oocysts/l and 0.026 cysts/l respectively). All the samples of treated water were negative. There was no correlation (P < 0.05) between the presence of protozoans in the raw water and the parameters measured. The finding of Giardia and Cryptosporidium in raw water indicates that the water sources are contaminated. Considering that giardiasis is prevalent in the population and that Cryptosporidium has recognized zoonotic potential, long‐term monitoring at critical points of the system is necessary to guarantee that the water will not be a vehicle for transmission of these protozoans.     

猪源隐孢子虫对仔猪致病性研究

为确定我国猪源隐孢子虫的危害性，采用光镜、扫描电镜和透射电镜等技术研究了猪源隐孢子虫sucp株对5日龄仔猪的致病性。结果：感染仔猪出现水样腹泻和脱水，粪便中混有肠黏膜碎片，潜伏期为3～5d，排卵囊持续期33-43d，虫体寄生于盲肠、结肠和直肠，并且盲肠和结肠杯状细胞增生，有炎性细胞浸润，结肠和直肠黏膜微绒毛萎缩、倒伏和脱落。结果表明sucp株对新生仔猪有一定致病性。