禽脑脊髓炎琼脂扩散沉淀抗原制备与应用的研究

应用禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）Ｖａｎ Ｒｏｅｋｅｌ株和内蒙古禽脑脊髓炎（ＡＥ）自然病鸡分离毒株分别接种鸡胚，制出ＡＥ琼扩沉淀抗原。经经验和部分鸡场应用结果表明，该抗原具有良好的特异性。抗原效价为１：３２，可检出不同日龄、品种和不同发病期的人工感染鸡和自然发病鸡血清中的ＡＥ抗体，结果可靠，方法简便，可以推广应用。     

山东省禽脑脊髓炎血清学调查

用自制禽脑脊髓炎（ＡＥ）琼扩抗原检测鸡血清中ＡＥ病毒抗体，对山东省九个地区十四个鸡群进行调查，结果表明：山东省存在禽脑脊髓炎病毒的感染，不同地区有差异，阳性率０－８５％，平均感染率２２％。调查中还发现，产蛋种鸡感染ＡＥＶ后，除在两周内表现产蛋下降外，其他无任何症状，仅发现一例父母代种鸡孵出的雏鸡连续发生禽脑脊髓炎     

禽流感RT-PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查     

应用生物素标记的NDV—cDNA探针检测感染尿囊液中DNV—RNA的初…

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＤＮＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体－Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐ ｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后，即成ＤＮＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＤＮＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ，而不与ＩＢＤＶ－ｄｓＲＮＡ，ＡＩＢＶ－ｓｓＲＮＡ，ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ０ｄｓＤＮＡ、Ｆ     

鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Dot─ELISA诊断法的建立及应用

以醋酸纤维素膜作为固相载体，辣根过氧化物酶标记鸡抗传染性法氏囊病病毒抗体（ＩＢＤ—ＩｇＧ），饱和二氨基联苯胺为底物显色，建立了鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ诊断法。经方阵实验确定最佳反应条件为：ＩｇＧ的包被液为０．０５ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ９．６）碳酸盐缓冲液，包被浓度为１：５０；酶标抗体的工作浓度为１：１００；洗涤液为含０．０５％吐温—８０的０．０２ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．４）磷酸盐缓冲液；封闭液为含０．２％明胶的洗涤液；封闭时间、抗原及酶标抗体的作用时间均为３７℃３０ｍｉｎ。应用本方法和琼扩试验同步检测２０份已知阳性病料、１２０份待检病料和胚毒尿囊液、１０份正常鸡样品，结果表明，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ阳性率为９０％，而琼扩试验为４０％；凡琼扩试验阳性者，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ均呈强阳性，而在Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ阳性样品中，只有４４％呈琼扩试验阳性，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ的敏感度为琼扩试验的１００倍。     

鸡眼区相关淋巴组织对ND疫苗的点眼免疫应答 Ⅰ.局部体液免疫应答

本研究采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ、免疫组织化学方法、病理组织学方法对鸡眼区相关淋巴组织在鸡新城疫（ Ｎｅｗ ｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ｎ Ｄ）疫苗点眼免疫后的局部体液免疫应答进行了研究。研究发现， Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ 疫苗点眼免疫后鸡眼区相关淋巴组织（ Ｈｅａｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍ ｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ， Ｈ Ａ Ｌ Ｔ）对 Ｎ Ｄ 疫苗可产生高效的局部体液免疫应答：①免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 抗体及哈氏腺（ Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｉａｎｄ， Ｈ Ｇ）中 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 型浆细胞出现较对照组早，且抗体滴度及浆细胞数量均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１）。免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ｇ 抗体滴度及哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞数量也均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１），且哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞的出现早于对照组；②点眼免疫后泪液中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ抗体出现较血清中的早，且抗体滴度也显著高于血清中（ Ｐ＜ ０．０５）；③ Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ苗点眼免疫后可使结膜相关淋巴组织的形成和发育明显提前，免疫组结膜相关淋巴组织中的淋巴滤泡数量极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．     

绵羊进行性肺炎病毒与山羊关节炎一脑炎病毒的血清学交叉反应的研究

本实验用琼脂凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤＴ）和免疫印迹试验（ＩＢＡ）对实验感染绵羊进行性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）的山羊血清与山羊关节炎—脑炎病毒（ＣＡＥＶ）抗原以及实验感染ＣＡＥＶ的绵羊血清与ＯＰＰＶ抗原的交叉反应进行了研究。４只接种ＯＰＰＶ的山羊中有一只山羊的血清可与ＣＡＥＶ琼扩抗原发生交叉反应,并在免疫印迹试验中可识别ＣＡＥＶ的ｇｐ４４、ｐ３５和ｐ２８。２只接种ＣＡＥＶ的绵羊中有一只绵羊的血清可与ＯＰＰＶ琼扩抗原发生交叉反应,并在免疫印迹试验中可识别ＯＰＰＶ的ｇｐ４４和ｐ２８。以上的交叉反应结果表明ＯＰＰＶ与ＣＡＥＶ的抗原之间具有密切的相关性,这对于ＯＰＰＶ通过山羊和ＣＡＥＶ通过绵羊的传代研究是非常重要的,并对将来的免疫预防策略具有重要的指导意义。     

山羊关节炎─脑炎的研究 3．CAEV89－GB1026毒株的人工感染试验

用ＣＡＥＶ８９─ＧＢ１０２６培养物的澄清液及其超速离心的病毒悬液，经关节—静脉、关节、脑内和口服途径接种土种山羊１９只。以琼扩检测其病毒抗体。感染羊，分别于接种后的第３、５、６和１２周发生血清阳转。４只羊的抗体持续２３周后宰杀，其他羊继续监测。感染羊血清与含犊牛血清的细胞培养液不发生沉淀反应，而与美国ＣＡＥ、国产ＯＰＰ和自制ＣＡＥ琼扩抗原发生沉淀反应。部分羊于接种后５个月出现关节肿大。被宰杀感染羊的关节滑膜、肺脏、乳腹等出现ＣＡＥ的特征性病理组织学变化，而对照羊则未见血清学和组织学变化。感染羊的关节滑液接种滑膜细胞单层，其培养液制成琼扩抗原，与感染羊血清又发生了特异性沉淀反应。     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体。这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和其它禽病毒（ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应。腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０－５—１０－７，琼扩沉淀效价达１∶２０—１∶５１２，鹅胚中和效价达１∶３０—１∶１２２，鹅体中和效价为１∶５４—１∶９６。ＧＰＡ１和ＧＰＣ５２株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良好防治效果。     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体的研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体。这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和禽病毒（ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应。腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０－５～１０－７，琼扩沉淀效价达１２０～１５１２，鹅胚中和效价达１３０～１１２２，鹅体中和效价为１５４～１９６。ＧＰＡ１和ＧＰＣ５两株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良好防治效果。     

传染性法氏囊病疫苗免疫母鸡后子代雏鸡外周血液的B细胞和免疫球蛋白含量变化

应用免疫SPA菌体花环法和间接ELISE法对传染性法氏囊病（IBD）疫苗免疫母鸡后，其子代雏鸡外周血液B细胞数量和IgG、IgM、IgA含量进行了动态研究。结果发现：IBD疫苗免疫后，其子代雏鸡外周血液B细胞数量和IgG、IgM、IgA含量均不同程度地高于未免疫的相应对照雏鸡，表明IBD疫苗免疫母鸡后，其子代雏鸡外周血液的体液免疫功能明显增强。而传染性法氏囊病超强毒株攻击子代雏鸡后，未免疫子代雏鸡外周血液的上述各项指标均明显低于疫苗免疫的子代雏鸡，这与IBDV感染雏鸡后，其体液免疫中枢器官法氏囊严重损害，淋巴细胞变性坏死等有关，也是导致感染雏鸡免疫抑制的基础。     

鸡传染性贫血病疫苗免疫母鸡后子代雏鸡外周血液T细胞数量及免疫球蛋白含量变化

应用免疫SPA菌体不法和间接ELISE法对鸡传染性贫血病（CIA）疫苗免疫母鸡后，其子代雏鸡外周血液T细胞数量和血清IgG,IgM,IgA含量进行了动态研究。结果发现：CIA疫苗免疫母鸡后，其子代雏鸡外周血液T细胞数量和IgG,IgM,IgA含量均不同和蔼地高于未免疫的相对照雏鸡，表明CIA疫苗免疫母后，其子代雏鸡全身的体液上述各项指标均明显低于疫苗免疫的子代雏鸡，这与CIAV强毒攻击子代雏鸡后，未免疫的子代雏鸡外周血液上述各项指标均明显低于疫苗免疫的子代雏鸡，这与CIAV强毒感染雏鸡后，其免疫器官组织，尤其是胸腺严重损害，淋巴细胞变性坏死子等密切相关，是导致感染鸡免疫功能低下的基础。     

CIA免疫母鸡后子代雏鸡免疫器官T细胞变化的研究

鸡传染性贫血病（CIA）疫苗免疫母鸡后，对其子雏鸡免疫器官的T细胞变化进行了动态研究。结果发现，CIA疫苗免疫母鸡后，子代雏鸡免疫器官T细胞数量较未免疫对照子代雏鸡明显增加；强毒攻击子代雏鸡后，免疫攻毒组雏鸡免疫器官T细胞数量在13日龄内明显高于未免疫攻毒组雏鸡。表明CIA疫苗可使子代雏鸡免疫器官的细胞免疫功能增强，能抵卸强毒攻击。     

雏鸡感染毒害艾美耳球虫后免疫器官T细胞亚群的动态变化

采用ABC法检测了毒害艾美耳球虫（Eimeria necatrix）初次、二次感染雏鸡后，其免疫器官T细胞亚群的动态变化。结果发现：雏鸡初次感染E．necatrix后，其胸腺和脾脏的CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞于感染后4～21d不同程度高于未感染的对照雏鸡，14～16d达峰值，随后缓慢下降。其中CD4^＋T细胞较CD8^＋T细胞增殖辐度大，持续时间也较长。Enecatrix二次感染雏鸡后，上述免疫器官的CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞数量在感染后2～7d呈下降趋势，随后回升，至10～14d明显高于对照和初次感染雏鸡。其中CD8^＋T细胞在二次感染后降幅较小，回升更迅速，增殖幅度也较大。表明鸡CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞在抵抗E．necatrix感染的不同时期发挥不同的作用。     

鸡传染性贫血病免疫母鸡后子代雏鸡免疫器官抗体生成细胞变化

鸡传染性贫血病疫苗免疫母鸡后，对其于代雏鸡免疫器官的抗体生成细胞变化进行了动态研究。结果发现，CIA疫苗免疫母鸡后，于代雏鸡免疫器官抗体生成细胞数量较未免疫对照于代雏鸡明显增加；强毒攻击于代雏鸡后，免疫攻毒组雏鸡免疫器官抗体生成细胞数量在27日龄内明显高于未免疫攻毒组雏鸡。表明CIA疫苗可使于代雏鸡免疫器官的体液免疫功能增强，能抵御强毒攻击。     

鸡贫血病-法氏囊病联合免疫母鸡后子代雏鸡外周血液T细胞数量及免疫球蛋白含量变化

应用免疫SRA菌体花环法和间接ELISE法对鸡传染性贫血病 (CIA) -传染性法氏囊病 (IBD)联合免疫母鸡后 ,其子代雏鸡外周血液T细胞数量和免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量变化进行了动态研究。结果发现 ,CM -IBD联合免疫母鸡后 ,其子代雏鸡外周血液T细胞数量和IgG、IgM、IgA含量均不同程度地高于未免疫的相应对照雏鸡 ,表明CIA-IBD联合免疫母鸡后 ,其子代雏鸡外周血液体液免疫和细胞免疫功能明显增强。而CIAV、IBDY强毒攻击后 ,未免疫的子代雏鸡 ,其外周血液的上述指标均明显低于疫苗免疫的子代雏鸡 ,表明未免疫的子代雏鸡外周血液的免疫机能降低 ,这与未免疫雏鸡缺乏特异性抗体 ,强毒攻击后 ,雏鸡免疫器官组织广泛损害 ,淋巴细胞变性坏死等有关     

马立克氏病疫苗免疫后鸡免疫器官组织抗体生成细胞的变化

本实验分别用马立克氏病（ＭＤ）三价苗和ＨＶＴ疫苗肌肉注射免疫１日龄雏鸡，在１０、２０、４０、６０和９０日龄以兔抗鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ重链抗血清为一抗，用彩色免疫金银染色法检测法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体和哈德尔腺的ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ抗体生成细胞的动态变化。结果发现：雏鸡ＭＤ疫苗免疫后，法氏囊和脾脏的ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ抗体生成细胞较对照鸡显著增多，盲肠扁桃体以ＩｇＡ抗体生成细胞为主、哈德尔腺以ＩｇＧ抗体生成细胞居多的三种抗体生成细胞数量均明显升高；三价苗免疫鸡的抗体生成细胞显著多于ＨＶＴ疫苗免疫鸡。说明ＭＤ疫苗免疫鸡全身免疫器官、呼吸道和消化道相关局部免疫组织的体液免疫反应显著增强，三价苗免疫鸡的体液免疫应答水平明显高于ＨＶＴ疫苗免疫鸡。     

鸡贫血病—法氏囊病联合免疫母鸡后子代雏鸡免疫器官T细胞和抗体生成细胞数量的动态变化

对鸡传染性贫血病（CIA）－传染性法氏囊病（IBD）联合免疫母鸡后的子代雏鸡免疫器官的免疫学化变化进行了研究。结果发现,混合感染CIAV、IBDV雏鸡免疫器官T细胞和IgG,IgM,IgA抗体生成细胞数量在27日龄内明显未免疫对照组、联合免疫组和联合免疫攻毒组,表明感染CIAV、IBDV的雏鸡全身免疫功能显著下降,CAI－IBD联合免疫母鸡后,子代雏鸡T细胞胞和IgG,IgM,IgA抗体生成细胞数量在27日龄内,较未免疫对照组明显增加,表明CIA－IBD联合免疫母鸡可使子代雏鸡免疫器官的免疫功能增强,能抵御强毒攻击。     

雏鸡应用益生素后外周血液的体液免疫动态变化

应用免疫SPA菌体花环法和间接ELISA法系统地研究了雏鸡饲喂益生素后,其外周血液体液免疫学动态变化.研究结果发现:雏鸡饲喂相应数量和时间的益生素后,其血液中B细胞数量,IgG、IgM、IgA含量均较未饲喂益生素的对照雏鸡有不同程度的提高,其中B细胞数量、IgM、IgA含量于饲喂7天达到高峰,IgG含量于饲喂后10天达到高峰.表明益生素能够增强饲喂雏鸡外周血液的体液免疫功能.     

感染鸡传染性贫血病毒（CIAV）雏鸡免疫器官抗体生成细胞的动态变化

对１日龄雏鸡感染鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）后免疫器官法氏囊、脾脏和胸腺的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ抗体生成细胞数量的动态变化进行了检测。结果发现,感染雏鸡法氏囊、脾脏和胸腺的３种抗体生成细胞数量均程度不同地低于未感染对照雏鸡,其中法氏囊的ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体生成细胞和ＩｇＡ抗体生成细胞分别在感染后７～３５ｄ和１４～３５ｄ明显减少;脾脏红髓、白髓和淋巴小结的ＩｇＧ抗体生成细胞分别于７～３５ｄ、１４～３５ｄ和１４～２１ｄ明显减少,ＩｇＭ抗体生成细胞分别在７～４２ｄ、２８～３５ｄ和１４ｄ时明显减少,ＩｇＡ抗体生成细胞仅在红髓中（７～２８ｄ）明显减少;胸腺髓质的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ抗体生成细胞分别在１４～２８ｄ、７～２１ｄ和２１ｄ时明显减少。结果表明,ＣＩＡＶ感染雏鸡免疫器官的体液免疫功能明显降低。