苯甲酰胺类磷酸二酯酶-4抑制剂的设计与合成

目的 合成6个苯甲酰胺类磷酸二酯酶-4抑制剂。方法 以异香兰素为原料,经过成醚反应、氧化反应、Schotten-Baumann反应等制备目标化合物。结果 成功制备了6个目标化合物：Benzoic acid,4-[[3-（isobutoxy）-4-methoxybenzoyl]amino]（T1）,Benzamide,4-[[3-（isobutoxy）-4-methoxybenzoyl]amino]（T2）,Benzamide,4-（isobutoxy）-3-methoxy-N-[4-[[（1-methylethyl）amino]sulfonyl]phenyl]（T3）,Benzoicacid,4-[[3-（cyclopentyloxy）-4-methoxybenzoyl]amino]（T4）,Benzamide,4-[[3-（cyclopentyloxy）-4-methoxybenzoyl]amino]（T5）,Benzamide,4-（cyclopentyloxy）-3-methoxy-N-[4-[[（1-methylethyl）amino]sulfonyl]phenyl]（T6）,收率分别为66.7%、65.7%、18.4%、46.7%、76.8%和12.4%,其中化合物T1、T2、T3、T5、T6为新化合物。结论 所得产物的化学结构经¹H-NMR、MS谱确证,与目标化合物相符。     

大鼠肺及其微血管内皮细胞磷酸二酯酶4表达及活性与清热药影响

通过检测肺与肺微血管内皮细胞（PMVEC）Ⅳ型磷酸二酯酶（PDE4）的表达及其活性,探讨入肺经中药对PMVEC环腺苷酸（cAMP）磷酸二酯酶（PDE）活性的影响,为筛选作用于PMVEC的PDE4抑制剂类抗炎药积累资料。本试验采用RT-PCR测定PDE4的表达,应用高效液相色谱（HPLC）检测酶反应前后大鼠肺组织与PMVEC的cAMP变化,计算PDE活性。结果显示：PDE4A、4B、4C、4D在肺与PMVEC内均有表达;17味入肺经清热药均对肺组织cAMP-PDE酶活性有不同程度的抑制作用,其中黄芩、黄药子、青蒿抑制率较高对肺组织酶分别为：75.37%、72%、61.26%,对PMVEC分别为：66.1%、63.54%、59.39%。由此可见,PDE4所有亚型在肺与PMVEC内均有表达;黄芩、黄药子、青蒿等入肺经的清热药能够抑制肺组织和PMVEC内cAMP-PDE活性;以cAMP-PDE活性为指标,有望筛选出其特异性PDE4抑制剂,并揭示入肺经清热药的作用机制。     

犬中枢神经不同部位磷酸二酯酶基因表达和活性测定

为探明磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)在犬中枢神经活动中的作用,采用反转录聚合酶链反应检测18个PDE亚型在犬中枢神经不同部位中(大脑、小脑、延髓和脊髓各段)的表达分布,以高效液相色谱法检测环核苷酸在酶反应前后的含量变化,计算PDE活性。结果显示:在所测18个PDE亚型中,犬中枢神经的8个测定部位均有PDE1A,PDE1B,PDE1C,PDE2A,PDE3A,PDE3B,PDE4A,PDE4B,PDE4C,PDE4D,PDE5A,PDE7A,PDE7B,PDE8A,PDE8B,PDE9A,PDE11A表达,PDE10A均呈阴性表达,不同部位之间表达量差异较大,其中PDE4在各部位均呈优势表达;8个测定部位cAMP-PDE活性均高于cGMP-PDE活性,且不同部位PDE活性存在差异,其中脑组织cAMP-PDE活性和cGMP-PDE活性均高于脊髓各段。结果提示PDE可能在由cAMP和cGMP介导的中枢神经经信号传导中发挥着重要作用。     

猪中性粒细胞磷酸二酯酶基因表达及活性研究

 【目的】通过对猪中性粒细胞磷酸二酯酶（PDE）基因表达、活性及特异性抑制剂实验检测，研究其存在的主要PDE亚型及在体外的活性，为探讨PDE在中性粒细胞的分布、活性变化及对cAMP、cGMP调节与中性粒细胞功能关系提供依据。【方法】采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PDE基因在猪中性粒细胞的表达，以高效液相色谱（HPLC）检测环核苷酸在PDE反应前后的含量变化，计算PDE活性。【结果】在检测的18个PDE亚型中，PDE1B、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、11A 共15个PDE mRNA在猪中性粒细胞表达，特异性抑制剂实验表明PDE4、PDE5分别为水解cAMP、cGMP的主要PDE亚型；cAMP/cGMP-PDE在10～40 μl范围内，与其活性存在良好的线性关系（r＝0.9929/0.9992）。【结论】猪中性粒细胞至少存在15个PDE亚型，其中PDE4、PDE5为主要存在的2个亚型，PDE样品量在一定范围内与其活性存在良好的线性关系，可作为筛选PDE型中性粒细胞功能调节剂的方法。     

胡黄连与牛蒡子有效成分对猪磷酸二酯酶7A2活性的影响

从牛蒡子、胡黄连中筛选对猪磷酸二酯酶（PDE） 7A2具有抑制作用的中药单体成分,为PDE亚型抑制剂研究积累资料.使用高效液相色谱法（HPLC）测定绿原酸、牛蒡子苷、β-谷甾醇和胡黄连苷-Ⅱ对体外原核表达的猪PDE7A2的抑制作用.结果表明：在反应质量浓度为1,5,10,50,100 μmol/L时,绿原酸对猪PDE7A2的活性抑制率分别为12.55％,46.29％,56.17％,68.52％,47.12％;牛蒡子苷抑制率分别为21.60％,41.35％,70.16％,88.27％,80.07％;β-谷甾醇抑制率分别为40.53％,54.52％,71.81％,96.50％,94.86％;胡黄连苷-Ⅱ抑制率分别为69.34％,94.03％,96.50％,103.09％,101.44％.绿原酸、牛蒡子苷、β-谷甾醇和胡黄连苷-Ⅱ对体外表达的猪PDE7A2均有抑制作用,其中胡黄连苷-Ⅱ对猪PDE7A2的抑制作用最强.     

3种磷酸二酯酶对小鼠卵母细胞自发成熟的影响

为探讨和比较磷酸二酯酶(PDE)3、4和5对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响,将小鼠卵丘卵母细胞复合体(COCs)和裸卵(DOs)分别培养在含有或不含有PDE 3、4和5特异性抑制剂的M-199培养液中。结果表明:PDE3的特异性抑制剂cilostamide和PDE5的特异性抑制剂zaprinast均能显著抑制小鼠COCs和DOs的自发成熟,且其抑制效应不随培养时间的延长而减弱,但却是可逆的;而PDE4的特异性抑制剂rolipram对小鼠COCs和DOs没有影响。上述结果提示,不同亚型的PDE在小鼠卵母细胞减数分裂过程中具有不同的调节作用。     

猪嗜中性粒细胞cAMP磷酸二酯酶的提取与活性检测

目的:提取动物体的cAMP磷酸二酯酶(PDE),并检测其活性,为兽医临床研究PDE活性的生理病理变化和中西药物对PDE活性调节作用建立实验方法。方法:猪血经过葡聚糖沉降,淋巴细胞分离液分离,特殊分离液洗涤和红细胞溶胀后,获得嗜中性白细胞。嗜中性白细胞破碎后释放PDE,通过反相高效液相色谱(RP HPLC)法测定反应体系中cAMP的含量,根据底物(cAMP)的减少量,确定嗜中性白细胞中PDE活性。结果:经显微镜计数嗜中性粒细胞纯度达95%;酶量在10～40μl间对cAMP的分解率为9 90%～31 39%,与PDE活性之间存在直线相关关系(r=0 99)。结论:猪嗜中性粒细胞中含有高纯度、高活性的cAMP PDE;高效液相色谱法可以准确测定PDE反应前后cAMP含量的变化;两种方法结合可以作为兽医临床研究机体PDE活性变化和中西药物对PDE活性调节作用的新方法。     

磷酸二酯酶亚型抑制剂与细胞周期蛋白抑制剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

选用磷酸二酯酶3（PDE3）特异性抑制剂Milrinone和PDE4特异性抑制剂Rolipram以及细胞周期蛋白依赖性激酶（cdk）抑制剂Roscovitine（ROSC）对绵羊卵丘卵母细胞复合物（COCs）的体外自发成熟进行研究，拟建立一种模拟体内卵泡环境的绵羊卵母细胞体外培养模型。以M-199为基础培养液，绵羊COGs在含有50μmol／L的Milrinone、Rolipram、ROSC或不含上述任何抑制剂的培养液中分别培养24h。COCs在含有50μmol／LROSC的培养液中培养24h，转移到含有20IU／L FSH的培养液继续培养24h检查核相。结果表明：COGs在M-199基础培养液和含有Rolipram的培养液中都可以自发恢复减数分裂，但是在含有Milrinone或ROSC的培养液中减数分裂受到阻滞；并且ROSC对绵羊COCs体外自发成熟的抑制作用要远高于Milrinone（P〈0．05）。当COGs从ROSC转移到含有20Iu／LFSH的培养液继续培养24h后．90．4％卵母细胞恢复到第2次减数分裂中期（MⅡ）。上述结果表明PDE3和cdk在绵羊减数分裂恢复中具有重要的作用。     

14种中草药粗提物对菜青虫幼虫的拒食活性研究

[目的]测定14种中草药粗提物对菜青虫幼虫的拒食活性,为开发新的杀虫植物提供理论依据。[方法]以乙醇为提取溶剂提取14种中药植物中的活性成分,并通过叶碟法测定14种中草药粗提物对菜青虫3龄幼虫的非选择性和选择性拒食活性。[结果]14种中药植物中,厚朴、小茴香、吴茱萸和黄柏的乙醇提取率较高,分别为12.80%、11.45%1、0.54%和10.24%。14种中药粗提物对菜青虫3龄幼虫有不同的拒食活性,其中半枝莲、吴茱萸、黄柏效果较好,选择拒食试验中它们的平均拒食率分别为100%、96.07%和84.46%,而非选择性拒食试验中其平均拒食率分别为100%8、4.01%和76.20%。[结论]半枝莲对菜青虫具有很好的拒食作用,其分布广泛,可为菜青虫的生物防治提供充足的原材料。     

7种中草药抑菌活性研究

采用生长速率法测定了7种中草药乙醇提取物对5种病原菌的离体抑菌活性.测定结果表明,在供试干样0.1 g/mL浓度下,鱼腥草、龙牙草、半边莲、丹参具有较好的抑菌活性,对多种供试菌种的抑制率达到100％;腺梗豨莶茎和叶的提取物的抑菌作用较差;接骨草茎和叶的提取物抑菌效果最差,对供试5种病菌的抑制作用均低于70％.     

几种中草药提取物对植物病原菌的抗菌活性研究

以苹果炭疽病菌、梨黑星病菌、番茄枯萎病菌为供试病菌,对7种中草药95%乙醇的提取物进行抑菌活性筛选研究.结果表明,中草药蛇床子、虎仗对苹果炭疽病菌、番茄枯萎病菌有较好的抑制作用,其对番茄枯萎病菌的EC50分别为0.8817 g/L 、0.4696 g/L,对苹果炭疽病菌的EC50分别为0.8046 g/L、0.3877 g/L.     

5种中草药对凡纳滨对虾生长及非特异性免疫功能的影响

[目的]筛选促进生长和调节凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)非特异性免疫功能的中草药免疫调节剂。[方法]分别采用质量分数为2%的鱼腥草、黄芪、大黄、甘草和黄芩的水提取物饵料连续28d饲喂凡纳滨对虾,在不同时间取样,测定血清中的酚氧化酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶和血清蛋白含量等免疫因子的活性。[结果]结果表明:饲喂黄芪、大黄和甘草的各组增长率和相对增重率显著高于对照组(P<0.05);除个别情况外,黄芪、大黄、甘草和黄芩组的酚氧化酶活力、溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力和血清蛋白含量均极显著高于对照组(P<0.01);黄芪、大黄和甘草能够促进凡纳滨对虾的生长及非特异性免疫功能,鱼腥草则相反;饲养试验结束后第7天,腹腔注射鳗弧菌进行攻毒试验,在7d内,鱼腥草组累计死亡率高于对照组;黄芩组累计死亡率与对照组相同,黄芪、大黄和甘草的累计死亡率均低于对照组,免疫保护率为37%～46%。[结论]从促进生长、提高免疫功能这两方面考虑,黄芪、大黄和甘草是适合凡纳滨对虾的中草药免疫调节剂。     

猪链球菌2型c-di-AMP水解蛋白基因gdpP的表达与活性分析

为研究猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)环二腺苷酸(c-di-AMP)水解蛋白GdpP的生化特性,根据已公布的SS2中国强致病株98HAH33全基因组中的gdpP序列信息设计引物,以SS2强致病株HA9801基因组为模板,通过PCR方法克隆获得了SS2的c-di-AMP水解蛋白基因gdpP完整序列,其阅读框由1 965个核苷酸组成,编码654个氨基酸。应用大肠杆菌重组表达系统,表达、纯化了GdpP,进而分析了其体外生物活性,结果显示纯化的重组蛋白可以在体外水解c-di-AMP形成pApA。其水解酶活性在碱性环境条件下(pH 8.0)相对较强,而在酸性环境下(pH 6.0,6.5)未检测到活性;同时,水解酶活性还依赖于二价金属离子Mg2+、Mn2+以及Co2+的存在,且在Mn2+存在的条件下相对活性最强,而在Ca2+、Fe2+和Cu2+存在的条件下则均未表现出活性。上述结果为进一步深入研究c-di-AMP在猪链球菌2型中发挥的生物学功能奠定了基础。     

白芍制剂对中性粒细胞相关功能及磷酸二酯酶活性的影响

 【目的】以猪中性粒细胞为靶细胞,研究白芍制剂对其相关功能（呼吸爆发和弹性蛋白酶释放）及磷酸二酯酶活性的影响。【方法】中性粒细胞分离纯化后,以细胞色素C还原法检测中性粒细胞呼吸爆发,以弹性蛋白酶底物的减少反映弹性蛋白酶的释放量,以HPLC检测底物cAMP的变化反映磷酸二酯酶的活性等。【结果】白芍制剂呈剂量依赖性抑制中性粒细胞的呼吸爆发（P＜0.001）,3个不同浓度的抑制率分别为33.15%、45.96%和62.22%;对弹性蛋白酶的释放在低浓度时表现抑制作用（P＜0.05）,抑制率为23.22%,在高浓度时表现促进作用;对中性粒细胞磷酸二酯酶活性具有抑制作用,低、高浓度抑制率分别为13.24%和25.87%（P＜0.01）;HPLC指纹图谱分析表明白芍制剂主要存在5种成分。【结论】白芍制剂对猪中性粒细胞呼吸爆发具有明显的抑制作用,对弹性蛋白酶释放在低浓度有显著抑制作用,其作用机制可能与白芍制剂对磷酸二酯酶活性的抑制有关。     

荔枝草农用活性初步研究

研究了荔枝草乙醇提取物及其萃取物的抑菌、除草活性。结果表明,荔枝草乙醇提取物对27种供试病原真菌均有一定抑制作用。乙醇提取物在浓度为0．03g／mL（以干材料计）时,对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌、瓜果腐霉病菌的抑制率分别达到89．09％、91．12％、92．59％;荔枝草乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌、瓜果腐霉病菌抑制效果最好,其EC50分别为0．24、0．29、0.12mg/mL;荔枝草乙醇提取物对几种杂草也有很好的抑制效果,在浓度为0．2g／mL时,对生菜、反枝苋、黄瓜的抑制率分别为93．65％、92．76％和97．57％。     

中药提取物对油菜菌核病菌抑制活性及丁香活性成分的研究

[目的]对中药提取物进行抑菌成分分析,为新型植物源农药的研制提供基础。[方法]以丁香等14种中药乙醇提取物为材料,测定各提取物对油菜菌核病菌的抑制活性,采用气相色谱-质谱联用法分析丁香提取物的化学成分,并测定其对油菜菌核病菌抑菌活性和油菜菌核病菌菌丝干重的影响。[结果]结果表明:丁香提取物对油菜菌核病菌菌丝生长抑制效果最好,抑制率为100%。[结论]初步证实丁香酚为丁香提取物的主要抑菌成分。     

29种中草药提取物对嗜水气单胞菌的抑菌活性研究

[目的]筛选对嗜水气单胞菌具有较强抑制作用的中草药,为该菌引起的爆发性鱼病防治提供用药依据。[方法]采用水提法和醇提法分别提取29种中草药的有效成分,并研究了29种中草药对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用。[结果]12种中草药提取物对嗜水气单胞菌有不同程度的抑制作用,其中诃子的水提物和醇提物的抑菌效果较好,其醇提物的最小抑菌浓度(MIC)为1.2 g/L。博落回、白屈菜、五倍子对嗜水气单胞菌也有较强的抑制作用,当其浓度为10.0 g/L时,抑菌圈直径均大于10 mm,其醇提物的最小抑菌浓度分别为2.4、4.8和4.8 g/L。[结论]博落回、白屈菜、五倍子可作为抗嗜水气单胞菌的筛选药物。     

大芽南蛇藤水解产物农药生物活性初探

对大芽南蛇藤水解产物的生物活性测定表明,水解产物各馏分浓度为50g·L-1时,对3龄粘虫(MythimnaseparateWalker)幼虫无明显的触杀和胃毒活性;浓度为500mg·L-1时,各馏分对小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)、烟草赤星病菌(Alternarialongipes)、苹果炭疽病菌(Glomerellacingulata)均具有一定抑制活性,其中,C3馏分对苹果炭疽病菌(G.cingulata)的抑制活性达86.7%,C5馏分对烟草赤星病菌(A.longipes)的抑制活性达85.1%;浓度为1000mg·L-1时,各馏分对反枝苋种子的主根、主茎生长均无明显抑制作用。     

绞股蓝提取物对自由基清除能力的初步研究

用NBT光还原反应 ,在体外对绞股蓝提取物清除超氧阴离子自由基 (O 2 )的能力进行评价 ,结果显示具有不同口味特征的绞股蓝干草清除O 2 的能力不同 ,以淡味的绞股蓝清除能力最强 ,其叶提取物的清除能力达 74.0 8%。但清除O 2 的能力易受到加热 ,尤其是活性碳和硅藻土处理等因素影响而降低