棉花蛋白提取方法及其蛋白质组学研究进展

棉花是一种重要的纤维作物。综述了棉花蛋白的提取方法、棉纤维发育和棉花抗逆性蛋白质组学研究进展,并对蛋白质组学研究在棉花中的应用进行了展望。     

热硼酸盐法提取梨雌蕊RNA方法改进及提取效果

提取梨雌蕊的总RNA;方法:修改后的热硼酸盐法。采用电泳检测RNA的完整性、并测定了提取物的浓度和纯度、根据S基因设计引物对提取的总RNA进行3'-RACE实验等方法对提取产物进行检测。结果:修改后的整个提取过程可以在1 d内完成,提取的总RNA电泳条带清晰,总RNA提取液的浓度为1.925μg/L,OD260/OD280值为1.926,3'-RACE实验得到了预期的条带。结论:经过改进后的热硼酸盐法适合提取梨雌蕊的RNA。     

响应面法优化草莓总黄酮提取工艺

以草莓为试验材料,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计,利用响应面分析法探讨乙醇体积分数、提取温度、液料比、提取时间4个因素对草莓总黄酮提取得率的影响。结果表明,各因素对草莓总黄酮提取得率影响大小顺序为液料比乙醇体积分数提取时间提取温度;建立了草莓总黄酮提取工艺参数的二次多项式回归模型,由该模型优化、修正的草莓总黄酮提取条件为:乙醇体积分数60%、提取温度53℃、液料比47∶1(体积质量比)、提取时间120 min,在此条件下,草莓总黄酮得率达到5.89 mg/g,与模型预测结果相近。本研究结果为草莓总黄酮类物质工业化生产的后续研究提供了参考。     

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。     

超声波辅助提取草莓多酚的工艺优化

[目的]采用响应面分析法优化草莓多酚的超声波辅助提取工艺参数,为草莓多酚的产业化生产提供参考。[方法]考查了料液比、乙醇浓度、超声功率及超声时间对草莓中多酚得率的影响,在单因素试验结果的基础上用Box-Benhnken法进行3因素3水平的试验设计,以多酚得率为响应值,对所得数据进行整理分析,并建立二次多项回归数学模型,优化草莓多酚的提取工艺。[结果]超声波辅助乙醇提取草莓中总多酚最佳工艺为:当料液比为1∶30g·mL~(-1)时,乙醇浓度60%,超声功率585W、超声时间25min,在此条件下草莓多酚得率为10.959mg·g~(-1)。[结论]与常规提取法相比,超声波辅助提取工艺提取率具有提取时间短,提取溶剂用量少,提取效率高的优点。     

一种高效的草莓总核酸提取方法

探索一种新的适合草莓组培苗、大田苗总DNA的快速高效提取方法。试验以草莓叶片为材料,用改良CTAB法对其DNA进行提取,并对提取的DNA进行了电泳检测、浓度测定。结果表明,提取的DNA具有清晰的条带,且无明显降解。D260/D280为1.79～1.96,具有较高的纯度,且含量高。用该法提取的DNA可满足进一步的分子生物学试验要求。     

超声波辅助提取草莓花色苷的研究

以鲜草莓为原料,探究超声波作用时间、料液比、提取液浓度、功率对提取草莓花色苷效果的影响。根据单因素试验结果,设计正交试验,确定草莓花色苷提取的最佳条件。结果表明,对超声辅助提取草莓花色苷的影响从大到小为：提取液浓度＞料液比＞超声波作用时间＞超声波功率。超声波辅助提取草莓花色苷的最佳工艺条件为：超声波作用时间30 min,料液比1：15,提取液浓度60%,超声波功率300 W。在该最佳工艺条件下,提取液的草莓花色苷的含量为33.247 mg/100 g,比不用超声波辅助的溶剂提取提高了1.3倍。     

草莓酚类物质提取工艺条件的优化

【目的】对草莓酚类物质的提取工艺条件进行优化,为研究开发草莓中的活性成分提供参考。【方法】以日本引进的＂丰香＂草莓为试材,采用有机溶剂法进行酚类物质提取,探讨提取温度、乙醇浓度、料液比、提取时间等因素对草莓酚类物质提取率的影响,并通过L9（34）正交试验对各影响因素进行优化分析。【结果】提取温度、乙醇浓度、料液比、浸提时间对草莓酚类物质提取率的影响显著,显著性大小依次为：料液比〉提取温度〉乙醇浓度〉提取时间。草莓酚类物质的最佳提取工艺条件为：提取温度40℃,乙醇浓度70%,料液比1∶20,提取时间40min,在此工艺条件下草莓酚类物质提取率平均水平达0.845mg/g。【结论】优化后的提取工艺适合于工业生产,可为草莓精深加工产品的进一步开发打下基础。     

丰香和红颜草莓原生质体提取与细胞融合的条件优化

为给草莓品种改良提供参考,分别以生长旺盛期的草莓愈伤组织、嫩叶和嫩茎为材料,采用酶解细胞壁提取原生质体和聚乙二醇(PEG)促细胞融合的方法,对草莓原生质体提取和融合的最佳条件进行研究。结果表明:愈伤组织在培养基MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA上长势良好;2种草莓的嫩叶都是提取草莓原生质体的最佳材料;在30℃、2.5mg纤维素酶+5mg果胶酶+1.25mg半纤维素酶条件下,用45%的PEG 5000促融酶解5h的效果最好,提取的原生质体数最高,丰香嫩叶为7.5×106个/mL,红颜嫩茎为6.7×106个/mL,且原生质体活性最高。     

基于生物质谱技术的蛋白质组学研究

随着现代生物科学技术的不断发展,有关蛋白质组学的研究逐渐深入,已经从最初的细胞鉴定及组织内基因表达上升到对整个蛋白组水平的研究,其中过程涉及对蛋白质的翻译修饰、生物大分子的相互作用等,充分表现出蛋白质功能层次特点。通过利用生物质谱技术能够为蛋白质组学研究提供支持,在将质谱技术和蛋白质组学相联系后,可以更深层次地探索生命系统分子本质,为生命科学研究拓展更为广阔的空间。本研究从分析生物质谱技术的原理出发,说明生物质谱技术在蛋白质组学的应用情况。     

草莓低醇饮料发酵工艺优化研究

[目的]研究草莓低醇饮料生产工艺并优化其参数,为我国草莓深加工产品的开发及草莓产业化发展提供理论依据.[方法]以速冻草莓为原料,利用酵母对酶解获得的草莓汁进行厌氧发酵,并对发酵温度、酵母用量、含糖量、发酵时间、初始pH、振荡频率等工艺参数进行优化.[结果]优化后的最佳草莓低醇饮料发酵工艺参数为:草莓汁初始pH 3.5,含糖量9.0%,葡萄酒活性干酵母添加量0.05%,发酵温度20℃,发酵时间60 h.[结论]在最佳发酵工艺条件下发酵获得的草莓低醇饮料色泽亮丽、醇厚甘冽、果香浓郁、风味独特,其糖度3.4%、pH 3.55、酒精度3.26%vol、感官质量评分95.0分.     

适合草莓倍性鉴定的流式细胞术方法的建立

比较了3种提取液制备红颊、川九1号、吉林草莓细胞核悬液流式细胞术检测效果,结果显示,提取液Ⅲ主峰粒子团清晰而集中,背景碎片少,试剂配方简单配制容易,且3种草莓材料倍性差异区分明显,优于其他2种提取液。对红颊草莓不同部位或不同来源的材料进行流式细胞术检测效果比较,结果表明,组培苗的检测效果明显优于大田试材,组培苗叶片因取材容易、主峰清晰、杂峰少、细胞碎片少而成为最佳试材。     

草莓采后真菌病害控制研究进展

草莓采后极易受病原真菌的侵染,使果实腐烂变质、品质下降,给生产带来重大的经济损失。随着我国草莓种植面积的扩大,草莓采后的防腐保鲜已经成为急需解决的问题。本文从物理途径、化学途径、生物途径等方面对草莓采后真菌病害控制方法的研究进展进行综述,为有效控制草莓采后真菌病害和延长货架期提供思路。     

大肠杆菌质粒DNA提取方法的优选

采用酚/氯仿少量提取法、异丙醇沉淀法、简便快速的煮沸法以及微波炉法提取细菌质粒,然后分别对各种方法所提取的质粒进行琼脂凝胶电泳分析,并用紫外分光光度计测定其OD值,对各种方法的优劣性进行全面分析,结果表明异丙醇提取法所提取的质粒DNA纯度和产量高(其DNA片段荧光较强,具有清晰的亮带,OD260/OD280约为1.77,DNA样品浓度约为195μg/mL),且重复性好,具有结果稳定的特点,达到了分子生物学试验要求,适合大多数试验室使用。     

基于RGB彩色模型的草莓图像色调分割算法

针对目前草莓采摘机器人草莓图像分割运算量大、耗时多等问题,根据CIE-XYZ颜色模型及其色度图,提出了一种在RGB彩模型中进行草莓图像色调分割的方法。该方法无需彩色模型转换,时间复杂性能较Lab彩色模型下a通道阈值分割算法与BP神经网络分割算法优越。对该算法进一步改进后,只需加减运算,无需乘除运算。试验结果表明:该算法能很好地实现成熟草莓果实与图像背景的分离,并较好的保存草莓轮廓信息,分割效率>85%;进一步对分割后的图像进行形态学处理,如膨胀、腐蚀等,有效消除了孔洞现象。     

草莓果实FaRIPK1蛋白的酵母外源表达及验证

[目的]类受体蛋白激酶在植物的生长发育及果实成熟过程中发挥重要作用,而植物中已鉴定的类受体激酶绝大多数属于LRR型.为了得到草莓中LRR型蛋白激酶FaRIPK1,从而进一步研究其功能.本实验采用真核表达的方法诱导表达FaRIPK1蛋白质,以期确定其最佳的诱导表达时间.[方法]以‘童子一号’草莓果实为试验材料,扩增出FaRIPK1基因的功能区序列,构建真核表达载体pPICZB-RIPK1后转入酵母表达菌株X-33诱导表达,通过在0,12,24,36 h处取样检测FaRIPK1蛋白质的表达情况并采用Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析柱纯化得到目的蛋白,纯化后的FaRIPK1蛋白质再进行Western-blot验证.[结果]重组表达菌株经过BMMY诱导培养基诱导24 h后FaRIPK1蛋白质的表达量达到最高值,此时最利于FaRIPK1蛋白质的纯化.Western-blot验证表明所得蛋白质确为FaRIPK1蛋白质.[结论]确定了诱导表达后24 h为FaRIPK1蛋白质真核表达的最佳时间,为进一步研究FaRIPK1蛋白质的功能奠定基础.     

草莓茎尖培养快繁体系的研究

以‘红颜’和‘甜查理’的匍匐茎茎尖为试材,诱导出丛生芽后进行增殖培养和生根培养,研究不同激素浓度及组合对茎尖增殖和生根的影响。结果表明,最适宜红颜增殖的培养基为M S+0.8 m g·L-1 6-B A+0.1 m g·L-1N A A;最适宜甜查理增殖的培养基为M S+0.3 m g·L-1 6-B A+0.5 m g·L-1 N A A。最适宜红颜草莓生根的培养基是1/2M S+0.8 m g·L-1I B A;最适宜甜查理草莓生根的培养基是1/2 M S+0.1 m g·L-1 I B A。     

AM真菌对草莓的接种效应研究

为了给草莓(Fragaria ananassa)菌根化育苗提供依据,以摩西球囊霉(Glomus mosseae)为接种剂,研究了在土壤灭菌和非灭菌条件下,AM真菌对草莓生长、果实品质、植株和土壤中氮、磷含量的影响。结果表明:接种AM真菌后,草莓叶片个数、根长、株高有明显提高,并且地上部分干重在灭菌和非灭菌条件下,分别提高了15.9%和2.77%;提早开花2~3 d,果实提前成熟4~5 d;果实的单果重和Vc含量明显提高,有机酸含量明显下降;组织中氮、磷含量均有提高;明显提高了土壤中碱解N、速效P的利用率。与对照组相比,土壤灭菌条件下,AM真菌对草莓的促生作用较非灭菌处理更明显。