GPC3在肝癌患者血清、癌组织和肝癌细胞株中的表达

目的探讨GPC3在肝癌患者血清、组织和肝癌细胞株中的表达。方法荧光定量PCR检测GPC3基因在HepG2、Huh7、LM3肝癌细胞株及HL7702正常肝细胞株中的表达;免疫组化S-P法检测肝癌患者癌组织、癌旁组织及良性病变中Glypican-3蛋白的表达;Western blot检测肝癌、慢性肝炎患者和正常人血清中Glypican-3蛋白的表达。结果 GPC3基因在肝癌细胞系HepG2、Huh7、LM3中的表达分别为35.38、11.82、35.77,在正常肝细胞系HL7702中不表达;Glypican-3蛋白在肝癌组织、癌旁组织及良性病变中的表达率分别为72.9%、0%、0%;肝癌、慢性肝炎患者和正常人血清中Glypican-3蛋白阳性率分别为51.6%、0%、0%。结论 GPC3在肝癌患者血清、组织和肝癌细胞株中均呈高表达。     

羟基喜树碱(HCPT)对乳腺癌细胞中TIMP-3表达及细胞侵袭能力的影响

目的:探索羟基喜树碱对乳腺癌细胞MCF-7细胞信号转导相关基因金属蛋白酶组织抑制剂-3(TIMP-3)表达的影响,寻找羟基喜树碱(HCPT)在乳腺癌治疗中的潜在新靶点.方法:分别采用Q-PCR,Western-blot和免疫细胞化学等方法验证不同剂量组HCPT诱导MCF-7细胞的TIMP-3表达特征.结果:不同质量浓度的HCPT均可在mRNA水平和蛋白水平诱导MCF-7细胞的TIMP-3表达上调,且具有统计学意义,与前期的基因芯片研究结果相符合;实验同时观察了HCPT对细胞侵袭迁移能力的影响,结果亦显示HCPT可在TIMP-3表达上调的同时抑制细胞侵袭迁移能力.结论:HCPT可诱导乳腺癌细胞的TIMP-3上调表达,抑制细胞侵袭能力.     

survivin与PTEN、PCNA在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的观察survivin、PTEN、增殖细胞核抗原(PCNA)在子宫内膜癌(EMC)中的表达及临床意义。方法运用免疫组化S-P法检测survivin、PTEN、PCNA蛋白在48例EMC、19例子宫内膜不典型增生、23例正常子宫内膜组织中表达情况,及其在EMC不同临床分期、组织学分级、肌层浸润程度表达。结果survivin、PCNA和PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生及EMC中的表达不同,不典型增生组、EMC组与正常子宫内膜组比较,差异有统计学意义(P<0.05或0.01),不典型增生组与EMC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EMC临床Ⅱ期、ⅢⅣ期survivin表达与Ⅰ期有不同,Ⅲ~Ⅳ期PTEN、PCNA表达与Ⅰ期有不同,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同组织学G2、G3 survivin、PTEN、PCNA表达与G1有不同,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。无肌层浸润或浸润程度≤1/2组PTEN、PCNA表达与浸润程度>1/2组不同,差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测survivin、PTEN、PCNA三者的表达水平对判断EMC的恶性程度及预测预后具有一定的临床参考价值。     

抑癌基因PTEN在乳腺浸润性小叶癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨乳腺浸润性小叶癌组织中PTEN的表达及临床意义.方法 免疫组化检测46例乳腺浸润性小叶癌组织、癌旁组织及50例乳腺增生组织中PTEN表达,并分析PTEN表达与临床病理特征的关系.结果 PTEN在浸润性小叶癌组织中表达明显低于癌旁组织和乳腺增生组织(P＜0.01).PTEN表达与病理分期、组织学分级、淋巴结转移...     

GPC3过表达载体的构建和表达检测

目的构建并检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican-3,GPC3）真核表达重组质粒。方法提取肾组织RNA进行逆转录,扩增GPC3基因的编码区,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,酶切鉴定并测序;将克隆成功的质粒转染至Huh7细胞,用荧光定量PCR和Western blot检测GPC3的表达水平。结果成功扩增GPC3编码区,并克隆至载体pcDNA3.1中;GPC3过表达载体转染至Huh7细胞后,荧光定量PCR和Western Blotting检测结果显示GPC3mRNA和蛋白表达水平均明显增加。结论成功构建GPC3过表达载体可用于后续研究。     

子宫内膜癌组织雌激素受体、孕激素受体和PTEN的检测及临床意义

目的了解雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和抑癌基因PTEN在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法采用S-P免疫组织化学法对107例子宫内膜癌组织中的ER、PR和PTEN基因表达进行检测,并结合其临床表现结果作统计学分析。结果不同临床分期、组织学分级、肌层浸润深度的子宫内膜癌组织中ER、PR的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01),有或无盆腔淋巴结转移的子宫内膜癌组织中的ER、PR表达差异均无统计学意义(P>0.05);不同组织学分级的子宫内膜癌组织中PTEN表达差异有统计学意义(P=0.05),而不同临床分期、肌层浸润深度及盆腔淋巴结转移情况的子宫内膜癌组织中的PTEN表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论检测ER、PR有助于了解子宫内膜癌的生物学行为,可作为子宫内膜癌术前或(和)术后的治疗参考。     

Runx3基因在肝癌手术前后血浆中异常甲基化检测及临床意义

目的:研究肝细胞癌组织及手术前后外周血浆中Runx3基因启动子区异常甲基化状态,探讨其在肝癌早期诊断及疗效评估中的价值;方法:采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术分别对肝癌患者肿瘤组织及相应血浆进行Runx3异常甲基化检测。结果:在81例肝癌组织中,Runx3异常甲基化率为43.2%(35/81),相应血浆中Runx3甲基化检出率为39.5%(32/81),血浆中Runx3基因甲基化改变与肿瘤组织甲基化状况显著相关(P<0.05);其中15例手术治疗患者手术前组织及血浆中Runx3甲基化检出率均为40%(6/15),术后只有1例患者血浆中Runx3基因异常甲基化。结论:血浆Runx3基因异常甲基化检测在肝细胞癌早期诊断及疗效评估方面有一定应用价值。     

野生型PTEN基因重组腺病毒表达载体构建的改进及其鉴定

目的为改进构建野生型抑癌基因PTEN重组腺病毒表达载体的方法。方法用抑癌基因PTEN与带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV重组后转化含腺病毒骨架载体pAdEasy1的E.coliBJ5183(Ad-1 cells),以获得重组腺病毒质粒,经限制酶PacⅠ线性化后,转染293细胞,检测PTEN蛋白的表达,并以Ad-PTEN感染人乳腺癌MCF-7细胞后,测其感染率。结果获得PTEN基因的重组腺病毒表达载体(Ad-PTEN),受Ad-PTEN转染的293细胞发生肿胀或圆缩的形态改变,经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因PTEN,荧光显微镜下能观察到293细胞内有绿色荧光。通过Western blot可检测到293细胞中PTEN蛋白高效表达。Ad-PTEN感染的人乳腺癌MCF-7细胞,感染率达80%~90%。结论PTEN重组腺病毒表达载体可在细菌体内进行同源重组而构建,方法较简便、快速,且生成的病毒滴度高、感染率高。     

宫颈癌演变过程中PTEN、survivin基因的表达及其意义

应用qRT-PCR及Western blot技术检测不同阶段宫颈病变组织中PTEN和survivin的表达状况,探讨其临床意义。结果表明:①PTEN mRNA在宫颈癌、CINⅢ组织中的表达显著低于正常宫颈组织(P0.01),在CINⅡ及CINⅠ组织中的表达亦低于正常宫颈组织(P0.05);survivin mRNA在宫颈癌、CINⅢ组织中的表达显著高于正常宫颈组织(P0.01),在CINⅡ组织中的表达亦高于正常宫颈组织(P0.05),而CIN I组织中则与正常宫颈无差异(P0.05)。②PTEN蛋白在宫颈癌、CINⅢ、CINⅡ、CIN I组织中显著低于正常宫颈组织(P0.01),并随着病变程度的增加而减弱。survivin蛋白在宫颈癌、CINⅢ组织中显著高于正常宫颈组织(P0.01),在CINⅡ中的表达高于正常宫颈组织(P0.05),而在CINⅠ组织中则与正常宫颈无差异(P0.05)。说明PTEN和survivin基因在宫颈从癌前病变向宫颈癌演变过程中发挥重要作用,有望成为宫颈癌分子诊断与分子靶向治疗的新靶点。     

肝癌细胞系中Runx3基因表达及启动子区异常甲基化分析

目的：通过检测6种肝癌细胞中Runx3基因异常甲基化状态及表达情况,探讨药物5-aza-2＇-deoxycytidine（decitabine）激活Runx3基因重新表达的能力及对肝癌细胞生长的影响。方法：采用DNA甲基化特异性PCR（MSP）技术分别对6种肝细胞癌细胞系Runx3基因启动子区域甲基化状态进行检测,同时采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测5种肝癌细胞中Runx3的表达情况及药物5-aza-2＇-deoxycytidine处理其中3种肝癌细胞前后Runx3表达变化。结果：6种肝癌细胞系中,有3种细胞Runx3基因启动子区域存在甲基化异常,药物5-aza-2＇-deoxycytidine处理3种肝癌细胞后,Runx3基因明显表达或表达活性增强。结论：启动子区异常甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与肝细胞癌发生早期密切相关,可作为肝细胞癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。     

信号传导与转录活化因子3在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的 研究信号传导与转录活化因子3(STAT3)在肝细胞癌组织中的表达及其意义.方法 分别应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测肝癌组织、癌旁组织和良性病变肝组织中STAT3 mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学法检测Bcl-xL的蛋白表达情况.结果 肝癌组织、癌旁组织中STAT3 mRNA的相对表达量和蛋白阳性率均高于良性病变肝组织(P均<0.01或0.05).肝癌组织及癌旁组织中Bcl-xL蛋白表达率明显高于良性病变肝组织(P<0.05).肝癌组织中STAT3蛋白与Bcl-xL蛋白表达有密切关系(P<0.01).结论 STAT3高表达可能是肝癌发病机制中的早期事件;在癌旁肝组织中,那些STAT3蛋白阳性的肝细胞可能是潜在的癌前细胞.STAT3基因可能通过直接或间接促进Bcl-xL的表达,抑制细胞的凋亡,从而在肿瘤的发生发展过程中发生重要作用.     

端粒酶在原发性肝癌组织中的表达

目的：探讨端粒酶在原发性肝细胞癌(HCC)患者肝组织中的表达及临床意义。方法：用TRAP—ELISA法检测45例原发性肝细胞癌和26例癌旁组织以及7例正常肝组织的端粒酶活性。结果：45例原发性肝细胞癌组织中有38例显示端粒酶活性，其阳性率为84．4％，而26例癌旁组织只有2例具端粒酶活性，阳性率只为7．6％；7例正常肝组织端粒酶表达均为阴性；结果还显示肝癌组织端粒酶的表达与肿瘤病理分化程度无关。结论：端粒酶在绝大多数原发性肝细胞癌中表达，其活性可能在HCC的发生和发展中起重要作用，有希望成为诊断HCC的肿瘤标志物。     

p27基因在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的：探讨肿瘤抑制基因p27在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学方法（SP法）检测p27基因在62例官颈癌组织和20例正常官颈组织中的表达。结果：62例宫颈癌组织中,p27的阳性表达率为38．7％（24／62）;p27的阳性表达与宫颈病灶大小、临床分期、细胞分化程度、转移及预后有密切关系（P〈0．01或〈0．05）;与宫颈癌的病理类型及年龄无关（P〉0．05）。结论：p27基因的表达与宫颈癌的生长、浸润及淋巴结转移有关,其表达水平的高低可作为判断宫颈癌预后的重要指标之一。     

肝细胞癌中miR-155与CD44v6表达及相关性研究

目的探讨mi R-155及CD44v6在肝细胞癌（HCC）中表达及其相关性。方法采用q RT-PCR检测32例HCC患者癌组织及癌旁组织中mi R-155及CD44v6 m RNA表达,用免疫组化法检测CD44v6蛋白表达,分析两者间相关性及其与HCC临床病理特征关系。结果 HCC癌组织CD44v6蛋白及CD44v6、mi R-155m RNA较癌旁组织表达升高（P〈0.05）,IIIIV级及侵犯脉管的癌组织中mi R-155和CD44v6 m RNA表达较高（P〈0.05）。mi R-155和CD44v6 m RNA表达呈正相关（P〈0.05）。结论 mi R-155和CD44v6均参与HCC发生及发展。     

血管内皮生长因子在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)的表达与宫颈癌生物学行为特征的关系。方法 :采用免疫组化法 (SP)检测 78例宫颈癌中 VEGF的表达 ,以 2 5例正常宫颈组织为对照。结果 :(1) VEGF在宫颈癌中的阳性表达率为 4 1.0 %(32 /78) ,明显高于对照组的 8.0 % (2 /2 5 ) (P<0 .0 1)。 (2 ) VEGF阳性表达率在宫颈癌临床分期≤ b期者 (18.6 % )明显低于≥ a期者 (6 8.6 % ) (P<0 .0 1) ;淋巴结无转移者 (30 .0 % )明显低于有转移者 (6 0 .7% ) (P<0 .0 5 ) ;并随病理分化程度 (高、中、低分化 )的降低 ,其阳性表达率显著升高 (P<0 .0 5 )。结论 :VEGF的表达与宫颈癌的浸润转移等生物学行为关系密切 ,在宫颈癌的发生发展过程中发挥着重要作用。     

Syk和VEGF在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的观察脾酪氨酸激酶（Syk）和血管内皮生长因子（VEGF）在胃癌组织中的表达情况,分析它们与胃癌病理临床特征之间的关系。方法应用免疫组化法检测100例胃癌患者手术切除的癌组织和癌周正常组织中Syk和VEGF表达水平。结果Syk在正常胃组织中表达率为100．0％（100／100）,在胃癌组织中的表达率为40．0％（40／100）;VEGF在正常胃组织中表达率为0．0％（0／100）,在胃癌组织中的表达率为50．0％（50／100）,两者比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。Syk蛋白表达水平与胃癌浆膜浸润、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）,VEGF蛋白表达水平与胃癌浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论同时检测胃癌组织中Syk与VEGF表达水平,对判断胃癌浸润转移潜能及评估患者预后有一定的参考价值。     

人胃腺癌上皮钙粘素的表达及其意义

目的 :探讨上皮钙粘素 ( E- cd)在人胃腺癌中的表达及其意义。方法 :应用免疫组化 S- P法检测 1 0例正常胃粘膜、1 0例异型增生、92例胃腺癌 E- cd的表达。结果 :E- cd在异型增生、早期和进展期胃癌阳性表达率分别为 80 % ( 8/1 0 )、61 .5 % ( 8/1 3)和 48.1 % ( 38/79) ,三者之间差异有显著性 ( P<0 .0 1 )。 E- cd阳性表达与胃癌生长方式、组织学类型、TNM分期及患者的预后显著相关。 E- cd的阳性表达率下降主要见于弥漫型胃癌。结论 :E- cd阳性表达同胃癌分化及生物学行为密切相关 ,是预测其侵袭转移和判断预后有价值的参考指标。