CD4~+CD25~+调节性T细胞的研究进展

异基因造血干细胞移植技术是血液系统恶性肿瘤治疗上的一个历史性突破,但移植排斥反应及移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)极大地限制该技术应用,而CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory Tcells,Tregs)的发现有可能解决该难题。Tregs是一类具有免疫调节功能的T淋巴细胞,通过细胞接触和分泌抑制性细胞因子等途径,在维持机体免疫自稳、调控免疫应答方面起重要作用。有动物实验表明Tregs能够预防移植排斥和GVHD的发生,同时保留移植物抗白血病作用的功能。该文综述了其特性、作用机制以及在移植免疫耐受中的作用和应用前景。     

SLE患者CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3基因表达的研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD 4 CD 25 调节性T细胞及Foxp3基因的表达水平,了解它们在SLE发病机制中的作用。方法:分别收集25例SLE患者(SLE组)及健康人(对照组)外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。PE标记抗CD 4单抗,F ITC标记的抗CD 25单抗,作双色流式细胞术,分析SLE患者外周血CD 4 CD 25 调节性T细胞百分率,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA表达。结果:SLE组外周血CD 4 T、CD 4 CD 25 T细胞百分率及T细胞Foxp3 mRNA水平均低于对照组(P<0.01),并且CD 4 CD 25 T细胞百分率与Foxp3mRNA水平呈依赖关系(P<0.01)。结论:SLE患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD 4 CD 25 调节性T细胞数量减少和Foxp3mRNA表达下调可能与SLE的免疫学发病机制有关。     

AA肉鸡生长过程中血液CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化规律

为了进一步了解AA肉鸡血液T淋巴细胞及其CD4 、CD8 亚群所占比例的变化规律及对免疫系统中的重要作用,使用流式细胞仪对1、3、5、7、14、21、28、35、42、的日龄AA肉鸡血液CD3 T淋巴细胞和CD4 、CD8 T细胞亚群比例进行检测.结果表明,1～5日龄CD3 T淋巴细胞含量逐渐升高,7日龄突然下降,14～21日龄急速升高,并达到最高峰后急速下降至28日龄,35～49日龄时相对趋于平稳状态;CD4 T细胞含量1～3日龄明显低于其余日龄,3～5日龄急速上升,7～14日龄增加缓慢,21日龄时达到最高峰后急速下降至28日龄,35～49日龄时基本趋于平稳状态;CD8 T细胞含量1～5日龄缓慢上升,5～7日龄急速下降后,再急速上升到14日龄,14～28日龄再下降,此后直至49日龄均在此水平上处于平稳状态.CD4 /CD8 比例:1～7日龄缓慢增加,7～14日龄比例急速下降至最低,14～21日龄时比例增加到最高峰后急速下降至28日龄,但比例数值高于前1～7日龄,28～49日龄比例趋于平稳状态.表明AA雏鸡在1～7日龄时其免疫功能逐渐提高,14日龄时细胞免疫功能明显减弱,这可能与CD8 T淋巴细胞含量高有关,21日龄时机体细胞免疫水平达最高状态,在28日龄后肉鸡细胞免疫功能基本保持稳定状态,但仍需要加强饲养管理.     

猪圆环病毒2型感染猪肠上皮细胞对CD4+T细胞分化关键分子mRNA的影响

[目的]探讨猪圆环病毒2型感染的猪肠上皮细胞对CD4+T细胞分化关键分子mRNA的影响.[方法]利用免疫磁珠法分离猪外周血CD4+T细胞,与猪圆环病毒2型感染48 h的猪肠上皮细胞共培养,收集共培养后72 h的T细胞,荧光定量PCR检测CD4+T细胞分化关键分子变化.[结果]荧光定量PCR检测显示,细胞因子 IL-4、IL-17A、IFN-γ、TGF-β1 与转录因子 T-bet、GATA3、RORγt、Foxp3的 mRNA 水平均被显著下调,而IL-10的mRNA水平被显著上调.[结论]感染猪圆环病毒2型猪肠上皮细胞抑制CD4+T细胞分化关键分子mRNA水平,提示CD4+T细胞向Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞、调节性T细胞分化被抑制,而IL-10的上调激活CD4+T细胞向高分泌IL-10的CD4+T细胞分化.     

人CD8~+T细胞基因调控网络研究

为研究CD8~+ T细胞的功能异常机制,对功能异常状态CD8~+ T细胞和3种正常CD8~+ T细胞亚型[中央记忆CD8~+ T细胞(HCM)、效应记忆CD8~+ T细胞(HEM)和na?ve CD8~+ T细胞(HW)]的ATAC-seq(Assay for transposase accessible chromatin with high-throughput sequencing)数据进行基因调控网络比较,结果表明,3种正常CD8~+ T细胞特异表达的基因参与维持相应T细胞正常功能的信号通路,功能异常CD8~+ T细胞特异的基因参与癌症相关通路。转录因子调控网络比较分析发现功能异常CD8~+ T细胞GMEB2转录因子表达关闭。细胞表面受体调控网络比较分析发现功能异常CD8~+ T细胞CD7和P4HB受体的表达关闭。采用基因调控网络的数据进行比较分析,发现CD8~+ T细胞功能异常机制可能与GMEB2转录因子、CD7和P4HB受体表达关闭有关,这为抗病育种寻找特定基因提供新思路。     

米糠多糖对不同免疫状态雏鸡外周血CD4^＋和CD8^＋ T淋巴细胞亚群的影响

为探讨米糠多糖对不同免疫状态雏鸡免疫功能的调节作用机理,采用流式细胞技术检测了健康雏鸡、环磷酰胺处理雏鸡和人工感染传染性法氏囊病毒雏鸡在服用米糠多糖（剂量150 mg/（kg.d））和不服用米糠多糖情况下,外周血CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群数量的动态变化。结果表明：米糠多糖能够提高健康雏鸡外周血CD4^＋T淋巴细胞比率,对CD8^＋T淋巴细胞作用不明显;能够提高环磷酰胺和传染性法氏囊病毒诱导免疫抑制雏鸡外周血中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞数量。     

轮状病毒肠炎患儿外周血CD4+CD29+T细胞表达及其与治疗关系

目的 了解轮状病毒(RV)肠炎患儿外周血CD4+CD29+T细胞表达及其与治疗关系.方法 69例RV肠炎患儿分为观察组及对照组,分别给予抗RV免疫球蛋白及常规抗病毒治疗;比较两组患儿治疗前后外周血CD4+CD29+T细胞、IL-2、IL-12水平变化,粪便内RV-RNA含量及腹泻天数差异.结果 观察组治疗后CD4+CD29+T细胞、IL-2及粪便内RV-RNA水平均显著低于治疗前及对照组(P＜0.01),而IL-12水平显著增高(P＜0.01).观察组腹泻天数明显少于对照组(P＜0.01).RV肠炎患儿粪便内RV-RNA、腹泻天数与外周血CD4+CD29+T细胞、IL-2水平呈正相关(P＜0.01或0.05),而与IL-12呈负相关(P＜0.05).结论 外周血CD4+CD29+T细胞、IL-2水平升高及IL-12水平降低是RV肠炎的细胞免疫特征,且与病毒数量及腹泻程度明显相关.     

CD4^＋T细胞表位预测及其应用

目前,运用生物软件预测CD4^＋T细胞表位的技术越来越成熟,为表位疫苗的研究提供了有利的条件。对T细胞表位预测技术及其应用进行了综述。     

子宫内膜异位症不孕患者手术前后CD4+CD29+T细胞变化与妊娠率的关系

目的 了解子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)不孕患者手术前后CD4+CD29+T细胞变化及其与妊娠率的关系.方法 收集具有手术指征的EMS致不孕患者36例(手术组),无手术指征EMS患者38例(非手术组),同时选取38例健康女性作对照(健康组).观察EMS患者治疗前后外周血CD4+CD29+T细胞及其细胞因子白介素1(IL-1)、白介素4(IL-4)及CA125水平的变化,并将其与妊娠率进行相关性分析.结果 EMS不孕患者CD4+CD29+T细胞、IL-1、IL-4及CA125水平均显著高于健康女性(P＜0.01).治疗后,手术组和非手术组的CD4+CD29+T细胞、IL-1及CA125水平均显著低于治疗前,且手术组明显低于非手术组(P＜0.01);手术组的妊娠率明显高于非手术组(P＜0.05).CD4+CD29+T细胞、IL-1及IL-4与CA125均呈显著正相关,而与妊娠率呈显著负相关(P＜0.05或0.01).结论 CD4+CD29+T细胞升高是EMS不孕患者的重要免疫学表现,手术可显著降低该细胞及其细胞因子水平,提高妊娠率.     

蒲公英多糖对雏鸡外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的影响

为研究蒲公英多糖对雏鸡免疫功能的调节作用机制,采用流式细胞技术检测了健康雏鸡、环磷酰胺处理雏鸡在服用蒲公英多糖[剂量80 mg/(kg·d)]和不服用蒲公英多糖情况下,外周血CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴细胞数量的动态变化.结果发现蒲公英多糖能显著提高健康雏鸡外周血CD4<'+>T淋巴细胞数量(P<0.05),但对CD8<'+>T淋巴细胞数量及CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴细胞比值作用不显著(P>0.05);能够提高环磷酰胺诱导免疫抑制雏鸡外周血中CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴细胞数量(P<0.05),且对环磷酰胺诱导免疫抑制雏鸡外周血中CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴细胞比值降低效果显著(P<0.05).本研究表明蒲公英多糖通过上调雏鸡血液中CD4<'+>T淋巴细胞水平,增强机体对抗原的免疫应答反应,从而增加机体免疫抵抗力,促进动物的生长和发育.     

鸡CD4和CD8α基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建

用Trizol提取6周龄白莱航鸡胸腺组织的总RNA．再用Oligo—dT纤维素富集mRNA后，用RT—PCR分别扩增出鸡CD4和CD8α基因cDNA。PCR产物切胶回收后连入T载体，测序正确后再连入pcDNA3．1( )。将重组质粒pcDNA3．1-CD4和pcDNA3．1一CD8分别转染COS-7细胞，用已知的抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体检测到转染细胞中CD4和CD8α分子的表达，这说明构建的真核表达质粒正确，为下一步用DNA免疫方法研制抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体以及研究鸡CD4和CD8分子的结构和功能打下基础。     

生姜油对关节炎小鼠细胞因子和T细胞亚群的影响

目的：观察生姜油对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA）小鼠血清细胞因子和T细胞亚群的影响。方法：将小鼠随机分成5组,即正常对照组、AA模型组、生姜油高剂量（1．0ml／kg）组、生姜油低剂量（0．5ml／kg）组、地塞米松（1．0mg／kg）组。除正常对照组外,每只小鼠右后足跖皮下注射弗氏完全佐剂（FCA）制备AA小鼠模型。致琰后第8天起开始灌胃（ig）给药,1次／d,连续14d。分别在致炎后第8、12、16、20天测量小鼠足肿胀度,并于第21天处死小鼠,ELISA法测血清中IL-1β和IL-4,流式细胞仪测血液中CD4^＋和CD8^＋结果：生姜油0．5、lml／kg均能明显减轻小鼠足肿胀（P〈0．05,P〈0．01）,生姜油1ml／kg可显著降低AA小鼠血清IL-10（P〈0．05）,但对IL-4无明显的影响,并阻止CD4^＋／CD8^＋升高。结论：生姜油对AA有抑制作用,其抗炎机制之一可能与降低血清IL-1β水平,抑制T细胞亚群CD4^＋／CD8^＋比例上升有关。     

人外周血CD4+ T细胞F-actin的超分辨SIM成像

通过合成lifeact序列,将其克隆到pEGFP-C1载体上,构建了pEGFP-C1-Lifeact质粒,转染原代CD4+T细胞,实现对CD4+T细胞F-actin的荧光标记,结合超分辨3D-SIM荧光成像技术,研究人外周血CD4+T细胞F-actin的精细结构,并对其动力学过程进行连续观察。结果表明,CD4+T细胞F-actin分布在细胞膜周围,处于解聚和聚合的动态平衡状态,与普通荧光显微镜相比,超分辩SIM成像F-actin结构更加清晰,分辨率提高2~4倍。     

抗原浓度和DC数量对OT-I小鼠CD8+ T细胞分化与增殖的影响

【目的】探讨细胞毒性T细胞(CTL)表位肽SIINFEKL浓度和树突状细胞(DC)数量对CD8+T细胞活化和增殖的影响。【方法】用小鼠重组粒细胞集落刺激性生物因子(GM-CSF)和IL-4诱导骨髓细胞来源的DC增殖和分化,将所得成熟树突状细胞(maDC)和SIINFEKL抗原肽,与免疫磁珠法分离的OT-I小鼠CD8+T细胞共培养。用不同质量浓度的SIINFEKL(100,10,1,0.1,0.01和0.001 ng/mL)或不同数量的DC(DC/T比例分别为1/20和1/5)与CD8+T细胞共培养,刺激CD8+T细胞增殖分化。于共培养不同时间收集细胞,流式细胞术测定CD8+T细胞的数量、分裂速度、细胞表面活化分子的表达丰度,碘化丙叮(PI)染色测定细胞活力。【结果】在任一DC/T比例下,SIINFEKL浓度过低,均不能引起CD8+T细胞的充分增殖,而高于CD8+T细胞最佳增殖浓度的SIINFEKL则导致CD8+T细胞数量减少;在SIINFEKL质量浓度为0.001~0.1 ng/mL时,增加DC数量能促进CD8+T细胞的扩增;而SIINFEKL质量浓度为1~100 ng/mL时,提高DC数量反而导致CD8+T细胞数量减少;高浓度抗原和DC数量能有效诱导CD8+T细胞的活化和分裂增殖,但过量刺激会使细胞死亡,导致CD8+T细胞数量减少。【结论】CD8+T细胞的增殖受DC数量和抗原肽浓度的共同调节,要获得持久有效的CD8+T细胞免疫,必须保证CD8+T细胞得到足够的抗原信号,同时避免抗原信号过强导致的细胞活化后死亡。     

麻鸭和樱桃谷鸭的CD3ε、CD4、CD8α基因ORF克隆及序列分析

 【目的】分析比较中国部分品种鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列,为研究CD3ε链、CD4和CD8α链的结构和功能及其抗体的应用提供依据。【方法】利用RT-PCR,对麻鸭、樱桃谷鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列克隆测定,应用ClustalX（1.83）和DNAstar生物学软件分别与GenBank上公布的北京鸭CD3ε（AF378704）、CD4（AF378701）和CD8α（AF378373）基因ORF序列进行序列分析。【结果】麻鸭、樱桃谷鸭、北京鸭CD3ε和CD4基因ORF序列及所编码的氨基酸同源性为99%;北京鸭和麻鸭CD8α基因ORF序列同源性为99%,与樱桃谷鸭的同源性为95%。麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序基因编码的氨基酸完全一致,与樱桃谷鸭的CD8α存在16处位点差异,其中胞外区有15个氨基酸的差异,使亲水性、抗原性以及此区域位于蛋白质表面的可能性都有明显差异。从遗传发生树得出樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列相互之间的遗传关系近;樱桃谷鸭、麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序列之间的遗传关系较远。【结论】樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列遗传变异性低,樱桃谷鸭与麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF之间具有较高遗传变异性。     

鼻息肉患者T淋巴细胞的活化状态及其细胞因子的分泌

目的分析T淋巴细胞膜表面标志的表达及其细胞因子的分泌,了解人鼻息肉T淋巴细胞的活化状态及Th1/Th2反应的特点。方法采用流式细胞术检测45例鼻息肉患者鼻息肉组织、外周血中T细胞膜表面标志CD3、CD69的表达和Th1代表性细胞因子IFN-γ、Th2代表性细胞因子IL-4的分泌水平,并与正常人下鼻甲黏膜及外周血的相应指标进行比较。结果（1）患者鼻息肉组织及外周血T细胞均表达CD69分子,在鼻息肉组织局部CD69分子的表达更高（P〈0.01）。而在正常人下鼻甲黏膜中几乎未见CD3^＋CD69^＋细胞。（2）鼻息肉组织及患者外周血T细胞中均检测到IL-4、IFN-γ的表达,而在正常人下鼻甲黏膜中几乎未见CD3^＋IL-4^＋和CD3^＋IFN-γ^＋细胞。与正常人相比,患者外周血中IL-4、IFN-γ的含量均升高（P〈0.01）;与同一患者外周血相比,鼻息肉组织中IL-4的含量增高（P〈0.01）而IFN-γ的含量降低（P〈0.01）。结论鼻息肉组织中的T细胞高度表达CD69分子,处于免疫活化状态,产生Th1/Th2混合模式的细胞因子,与外周血相比Th细胞因子分泌优势发生改变,可能与鼻息肉＂微环境＂形成及黏膜免疫系统有关。     

杨树皮类脂对感染鸡传染性贫血病毒鸡外周血T细胞亚群含量的影响

[目的]从细胞免疫学角度探讨杨树皮类脂(PBL)对改善感染鸡传染性贫血病毒(CIAV)鸡的免疫器官的细胞免疫水平的影响。[方法]以人工感染与未感染CIAV的1日龄SPF鸡作为试验模型,分别连续饲喂PBL 7 d,在第7、27、47天采用流式细胞术检测外周血中CD4+和CD8+的含量,并计算CD4+/CD8+。[结果]PBL能够增加健康SPF雏鸡外周血的CD4+T淋巴细胞的数量,提高非特异性细胞免疫功能和体液免疫功能。[结论]杨树皮类脂对CIAV诱导的免疫抑制雏鸡外周血的CD4+和CD8+T细胞水平的降低具有一定抑制作用。     

小鼠黑色素瘤功能异常CD8~+T细胞基因调控网络构建与分析

疾病是全球范围内危害畜禽健康的主要问题,解析免疫系统调控相关基因成为当前抗病分子育种的研究热点。为研究小鼠黑色素瘤模型功能异常CD8~+T细胞对免疫抗体处理的应答机制,通过基因调控网络方法筛选功能异常CD8~+T细胞在Ig G和PD1抗体处理的特定基因、转录因子和细胞表面受体。结果发现对照组、PD1抗体与Ig G抗体处理组分别有28、17、33个特定表达基因。与对照组相比,Ig G和PD1处理组有2个转录因子Zfx、Zfhx3关闭表达,PD1处理组细胞表面受体Raet1b表达。Raet1b基因的表达可能使小鼠黑色素瘤功能异常CD8~+T细胞恢复功能,结果为抗病育种的相关基因研究提供理论基础。     

免疫功能在大鼠骨质疏松发病环节中的作用

目的研究免疫功能在大鼠骨质疏松发病环节中的作用。方法 36只新生雌性SD大鼠随机等分为6组,A、B、C、D、E、F组分别用生理盐水、谷氨酸单钠(MSG)、MSG+低剂量胸腺肽、MSG+高剂量胸腺肽、MSG+低剂量环孢素、MSG+高剂量环孢素灌胃,每周1次,连续7周。测定CD3、CD4、CD8和NK细胞数和体外T淋巴细胞转化功能,并进行骨组织形态学观察。结果 B组CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、NK细胞及T淋巴细胞转化能力明显低于A组(P<0.01)。与B组比较,C、D组CD3、CD4、CD4/CD8、NK细胞及T淋巴细胞转化能力明显升高(P<0.01),骨质疏松明显减轻;而E、F组CD3、CD4、CD4/CD8、NK细胞及T淋巴细胞转化能力明显降低(P<0.01),骨质疏松明显加重。结论免疫功能低下诱发骨质疏松,而增强免疫功能减轻骨质疏松。     

猪CD127流式单克隆抗体的研制

[目的]研制出猪CD127(调节因子IL-7受体α链)流式单克隆抗体,为研究分析猪淋巴细胞亚群,尤其是猪Treg细胞亚群提供流式细胞分析抗体,也为进一步探究猪抗病性状与免疫机制间的关系打下基础.[方法]克隆猪CD127基因片段,通过原核载体诱导表达出相应的融合蛋白,以纯化后的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,然后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,综合ELISA和流式细胞仪检测筛选出亚克隆抗体,并采用Western blotting验证所得亚克隆抗体能否与猪淋巴细胞上的CD127特异性结合.[结果]猪CD127基因cDNA全长1999 bp,第49~1428 bp为开放阅读框(ORF),编码459个氨基酸,其中前21位氨基酸为信号肽,成熟肽N端第1~219位氨基酸为胞外蛋白,第220~242位氨基酸为跨膜蛋白,第243~459位氨基酸为胞内蛋白.以pET28a和pET32a原核载体诱导表达CD127胞外片段可获得大小介于34~43 kD的融合蛋白,经Ni亲和层析柱纯化后用于免疫Balb/c小鼠,6只免疫小鼠血清中的多克隆抗体均能对猪淋巴细胞中的CD3阳性细胞(CD3+)进行共标记,其中以M2和M4两只免疫小鼠抗血清对CD3+的共标记效果较优,分群清晰;但流式细胞仪检测发现,仅2.3%的CD3+能与M2混合池培养基上清液中的分泌抗体共标记,而67.0%的CD3+能与M4混合池培养基上清液中的分泌抗体共标记,且分群清晰.从M4混合池中筛选出6株效价稳定的亚克隆细胞株(1E2、1D8、2F3、2F8、3C6和4E1),且以1D8、2F3、2F8和3C6亚克隆抗体标记的CD3+较多,其培养基上清液中的分泌抗体在猪胸腺和肌肉样品中均能检测出大小约50 kD的单一目的条带.[结论]制备获得的猪CD127流式单克隆抗体可与T淋巴细胞表面的IL-7受体特异性结合,同时在流式细胞仪检测过程中可用于猪Treg细胞亚群检测.