褪黑素对急性铅中毒小鼠卵母细胞体外成熟质量的影响

为探究褪黑素(melatonin)对铅中毒小鼠卵母细胞质量的的影响,以6～8周龄体况相近的ICR雌鼠卵母细胞为研究对象,将其分为5组,分别为生理盐水对照组及4个铅中毒组,并在铅中毒组的卵母细胞体外成熟培养液中分别添加浓度为0、10^-5、10^-7、10^-9mol·L^-1的褪黑素,根据第1极体排出率作为体外成熟的标志,筛选出最佳的褪黑素浓度,再检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、三磷酸腺苷(ATP)水平,最后通过细胞凋亡试验分析褪黑素对铅中毒卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：体外添加1×10^-7 mol·L^-1的褪黑素能显著降低铅中毒小鼠的ROS水平和早期细胞凋亡率,显著提高第1极体排出率及GSH、ATP含量。综上,在培养液中添加1×10^-7 mol·L^-1的褪黑素能在体外成熟过程中显著改善铅中毒雌鼠卵母细胞的质量。     

褪黑素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

[目的]本试验旨在探索不同浓度褪黑素(melatonin,MLT)对绵羊体外成熟卵母细胞发育的影响,以期优化绵羊卵母细胞体外成熟体系.[方法]本试验分别添加10-3、10-5、10-7、109、10-11、0 mol/L褪黑素,以检测褪黑素对绵羊体外成熟卵母细胞的极体率、孤雌激活后卵母细胞的卵裂率、囊胚率及bcl-2(抗凋亡基因)、bax(促凋亡基因)的表达水平的影响. [结果]10 7、10-9、10-11 mol/L MLT组的极体排出率(41.04％±3.37％、43.13％±3.82％、46.28％±0.36％)显著高于对照组(23.43±2.43％,P＜0.05),10-11-mol/L MLT组极体率最高.109、10-11mol/L MLT组(55.23％士3.19％、54.30％±0.85％)卵裂率显著高于对照组(40.9％1±4.67％,P＜0.05),且10-11 mol/L MLT卵裂率最高.10-9、10-11 mol/L MLT组(19.23％±4.31％、18.84％±5.35％),囊胚率显著高于对照组(7.51％±1.40％),10-9 mol/L MLT组囊胚率最高.10-9 mol/LMLT极显著上调卵母细胞中bcl-2 mRNA的表达量,10-7mol/L MLT可极显著下调卵母细胞中bax mRNA的表达量.在8、16h,10-9 mol/L MLT组的bcl-2与bax比值较大.[结论]在绵羊卵母细胞体外成熟培养基中添加10-7、10-9、10-11 mol/L的褪黑素可促进卵母细胞体外成熟以及孤雌激活后卵母细胞的胚胎发育,添加10-9mol/L褪黑素是促进绵羊卵母细胞体外成熟的最佳浓度.褪黑素通过上调bcl-2的表达,下调bax的表达,可促进绵羊卵母细胞体外成熟.     

褪黑素对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

褪黑素对生殖系统发挥着重要调节作用,本研究旨在探究褪黑素对牛卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育的影响及作用机制。本试验用化学激活法对牛卵母细胞孤雌激活,且在卵母细胞体外成熟液和胚胎体外培养液中添加不同浓度(0 pmol/ml、10 pmol/ml、20 pmol/ml、30 pmol/ml)的褪黑素,以检测牛卵母细胞成熟率和孤雌胚胎发育效果,同时利用DCHF-DA染色方法检测卵母细胞中ROS水平,采用免疫荧光技术检测褪黑素受体MT1在牛早期胚胎发育过程中的表达。结果表明,外源褪黑素可促进卵母细胞体外成熟,卵母细胞成熟率随褪黑素浓度的增加而升高。褪黑素显著降低了卵母细胞中的ROS水平(P0.05),且卵母细胞中的ROS水平随着褪黑素浓度增加而降低。褪黑素可显著提高孤雌胚胎的卵裂率、桑葚胚率和囊胚率(P0.05),促进胚胎发育。相比对照组,10pmol/ml褪黑素剂量更有利于胚胎发育,桑葚胚率和囊胚率都显著高于其他试验组。另外,本研究首次探究了褪黑素受体MT1在早期胚胎发育过程中的表达分布。MT1在未卵裂的激活卵母细胞中主要分布于细胞膜上,随着孤雌胚胎卵裂的进行,受体表达量逐渐增加,主要表达定位于细胞膜上,随着胚胎发育的进行,MT1在卵裂球内部开始表达和分布,退化胚胎中MT1表达水平较低。可见,褪黑素可促进卵母细胞成熟和胚胎发育,且褪黑素受体MT1在胚胎发育早期已开始表达。     

EGCG对水牛卵母细胞体外成熟的影响

[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对水牛卵母细胞体外成熟质量与早期胚胎发育能力的影响,为优化水牛体外胚胎生产体系及提高其体外胚胎生产效率提供参考.[方法]在水牛卵母细胞体外成熟液中添加不同浓度的EGCG,以排出第一极体为细胞核成熟标志,观察卵母细胞核成熟情况,检测MⅡ期卵母细胞内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)含量,并统计经孤雌激活及体外受精后早期胚胎的发育情况.[结果]在体外成熟液中添加10~20 μmol/L EGCG有利于水牛卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩展,卵丘扩展指数(CEI)分别为2.49%和2.42%,卵母细胞成熟率(59.31%和50.98%)显著高于未添加EGCG的CK组(P<0.05,下同),MⅡ期卵母细胞的GSH含量(3.21和3.25 pmol/枚)也显著高于CK组;添加20~30 μmol/L EGCG可显著降低水牛MⅡ期卵母细胞的ROS水平.以体外成熟培养获得的水牛MⅡ期卵母细胞分别进行孤雌激活及体外受精,结果发现以在体外成熟液中添加10μmol/LEGCG的效果最佳,其对应的卵裂率和囊胚发育率均显著高于CK组.[结论]EGCG可用于优化水牛卵母细胞体外成熟体系,能有效提高卵母细胞的成熟率和体外发育潜力,且以水牛体外成熟液中添加10μmol/LEGCG的效果最佳.     

外源褪黑素对牛卵母细胞体外成熟的影响

 【目的】探索外源褪黑素（melatonin,MT）处理对牛卵母细胞体外成熟的影响从而优化牛体外胚胎生产体系。【方法】在牛卵母细胞成熟过程中添加不同浓度的MT,观察并统计其体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。应用放射免疫分析法检测血清、卵泡液和成熟培养液内MT与孕酮（P）、雌激素（E2)、促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）水平的变化并检测卵母细胞的活力和活性氧（ROS）的浓度。【结果】存在于牛卵泡液中的MT浓度与血清中的相近,添加10-11 mol•L-1 MT组的P浓度（2.01±0.33）ng•mL-1显著高于对照组（（0.87±0.10）ng•mL-1,P＜0.05）。与对照组（（67.32±7.30）%）相比,10-9 mol•L-1 MT组卵裂率显著提高（（77.81±7.06）%,P＜0.05）,并能提高囊胚率且囊胚细胞数（（29.61±9.55）%,（90.30±28.74）个）,显著高于对照组（（19.64±9.22）%,（75.07±25.98）个,P＜0.05）;同时,10-9 mol•L-1 MT组卵母细胞的活力高于对照组,并能降低卵母细胞内的ROS含量但没有显著差异（P＞0.05）。【结论】牛卵泡液中存在MT,适当浓度的外源MT能促进牛卵母细胞体外成熟。     

β-巯基乙醇对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

在成熟培养液中添加不同浓度的β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol,β-ME),研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响。结果表明,将卵母细胞置于100μmol/L的β-巯基乙醇的成熟培养液中进行体外培养,其成熟率、卵裂率和囊胚发育率均好于对照和其他处理,说明β-巯基乙醇的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞的体外成熟培养。     

南阳牛卵泡卵母细胞体外成熟培养的研究

［目的］研究南阳牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养技术。［方法］以南阳牛卵泡卵母细胞为材料,分别在成熟培养液中添加不同激素（E2、FSH＋LH＋E2、PMSG＋hCG＋E2）、不同血清（0.6%BSA、10%FCS、10%OCS）和牛卵泡液（10%、20%和30%bFF）后对其进行体外成熟培养,研究不同处理对其体外成熟状况及发育潜力的影响。［结果］在激素添加试验中,添加FSH＋LH＋E2的效果最好,卵母细胞的成熟率及卵裂率（72.5%,52.6%）显著高于添加E2（47.5%,35.4%）组;在血清添加试验中,添加10%OCS的效果最好,卵母细胞的成熟率（73.3%）显著高于添加BSA组（51.7%）;在卵泡液添加试验中,卵母细胞的成熟率及卵裂率随卵泡液浓度的增加而降低,成熟培养液中添加10%bFF可取得与添加10%FCS相似的效果。［结论］该研究为牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养提供了参考。     

促黄体素对绵羊卵母细胞体外成熟及卵裂的影响

促黄体素对卵母细胞成熟有一定的促进作用。为研究不同浓度LH(促黄体素)对绵羊卵母细胞体外成熟及受精发育的影响,从屠宰场采集绵羊卵巢,切割法获取卵母细胞,于不同浓度LH成熟培养液中培养24 h,进行体外受精及体外胚胎培养。按照LH的添加浓度将试验分为5个组(A组,0μg/mL;B组,5μg/mL;C组,10μg/mL;D组,15μg/mL;E组,20μg/mL)。试验结果表明:LH的添加浓度为10μg/mL时,卵母细胞的成熟率为76.60%,卵裂率为63.24%,桑椹胚率为30.81%,均显著高于其它试验组(P0.05)。综上,本试验在含有10μg/mL FSH的TCM199成熟培养液中添加10μg/mL的LH时能显著提高绵羊卵母细胞的成熟率、卵裂率及桑椹胚率,这对建立稳定有效的绵羊卵母细胞成熟体外培养体系有着重要意义。     

免疫抑制素/卵泡抑素对家畜胚胎体外生产效率的提高

在家畜卵母细胞体外成熟培养过程中添加不同浓度的抗抑制素抗体或抗卵泡抑素抗体,通过观察卵母细胞的成熟率、激活后的卵裂率及囊胚发育率,研究免疫抑制素与卵泡抑素对家畜卵母细胞体外发育能力的影响。结果显示:就水牛、奶牛及猪而言,在卵母细胞成熟过程中分别单独添加抗抑制素抗体与抗卵泡抑素抗体均能显著提高卵母细胞的体外成熟与卵裂率,添加的适宜浓度为50~100μg/ml。而添加抗卵泡抑素抗体还能显著提高水牛和猪的囊胚发育率。卵母细胞体外成熟期添加抗抑制素抗体与抗卵泡抑素抗体能显著提高卵母细胞的发育能力,提高早期胚胎的发育数量和质量,为改善家畜胚胎体外发育和生产提供了新方法。     

N-乙酰半胱氨酸对玻璃化冻存小鼠GV期卵母细胞成熟和后续胚胎发育能力影响

冷冻保存后的GV期卵母细胞内大量积累ROS,影响胚胎发育。NAC作为一种抗氧化剂,可缓解氧应激造成的损伤。但NAC对冷冻GV期卵母细胞是否存在维持作用尚待研究。为探究NAC在冷冻、解冻后小鼠GV期卵母细胞发育中作用,检测冷冻保存后小鼠GV期卵母细胞在添加不同浓度NAC成熟培养液后成熟情况,观察其卵裂率与囊胚率、线粒体分布、ROS水平和受精后胚胎发育等。结果表明,添加1.5 mmol·L~(-1)NAC,冷冻保存后,小鼠GV期卵母细胞,线粒体排布均匀,卵母细胞比例显著提高,ROS水平降低。NAC可改善小鼠GV期卵母细胞经冷冻保存后复苏和体外成熟水平,提高其发育能力。