原花青素促进三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用机制研究

目的 研究原花青素（Procyanidins,PC）对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖及细胞凋亡的作用及其机制。方法 常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、对照组和PC10、20、40、80、160、320 μg/mL组。MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测FoxA1蛋白及抗凋亡蛋白bcl2、UCP2表达。结果 PC各剂量组均可显著抑制抑制MDA-MB-231细胞增殖（P<0.05）;PC（10-160 μg/mL）组剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖（P<0.05）,PC（40-320 μg/mL）可以时间依赖性抑制细胞增殖（P<0.05）;PC320 μg/mL组各时间点细胞抑制率与PC160 μg/mL组差异无显著性（P>0.05）;160 μg/mL PC可以时间依赖性促进MDA-MB-231细胞凋亡（P<0.05）;160 μg/mL PC作用24 h后,FoxA1蛋白表达显著上升（P<0.05）,同时bcl2及UCP2表达降低（P<0.05）。结论 PC抑制MDA-MB-231细胞,促进MDA-MB-231细胞凋亡,升高其FoxA1表达,同时降低bcl2及UCP2表达,表明PC可能通过促进FoxA1表达发挥促进MDA-MB-231细胞凋亡的作用。     

CAPRI细胞免疫疗法辅治32例三阴性乳腺癌临床观察

目的 观察CAPRI细胞免疫疗法(将链式激活的免疫细胞回输到患者体内,从而达到杀伤肿瘤细胞目的的治疗过程)辅助治疗三阴乳腺癌(TNBC)的临床疗效.方法64例TNBC患者随机分为治疗组和对照组,每组32例.对照组采用根治性手术及常规辅助化放疗,治疗组在此基础上加用CAPRI细胞免疫治疗.随访时间从2011年8月至2016年2月或患者死亡时间.观察两组随访期间局部复发和远处转移的发生情况,对比两组无病生存率及总生存率.结果 随访30个月,治疗组局部复发和远处转移的发生率较对照组低(21.9％vs 46.9％,P＜0.05),无病生存率明显高于对照组(P＜0.05);总生存率略高于对照组,但差异尚无统计学意义(84.4％vs 81.2％,P＞0.05).结论CAPRI细胞免疫疗法在短期内可降低TNBC患者肿瘤的局部复发与远处转移的发生率,而其对总生存率的影响有待临床进一步探讨.     

复合螺旋藻多糖对人乳腺癌231细胞抑制作用的研究

[目的]研究复合螺旋藻多糖对人乳腺癌231细胞的抑制作用。[方法]将螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶有效成分（GBE）按一定比例复合,观察复合制剂对人乳腺癌231细胞的抑制作用。[结果]与空白对照组相比,PsP与GBE按1：1、1：2和2：1比例的复合制剂组对人乳腺癌231细胞的抑瘤率,高剂量时分别提高93．32％、57．83％和44．95％,中剂量时分别提高67．52％、59．93％和41．72％,低剂量时分别提高54．22％、48．56％和40．26％。单一成分的螺旋藻多糖组对人乳腺癌231细胞有较好的抑制作用,但随着剂量地降低其药效也随之降低。[结论]复合螺旋藻多糖对人乳腺癌231细胞有较高地抑制作用,其中,以高剂量组1：1复合制剂抑制效果最好（93．32％）,表明复合螺旋藻多糖在该剂量配比时协同增效作用达到最大。     

基于网络药理学分子对接探讨山慈菇抗三阴性乳腺癌的分子机制

本研究基于网络药理学与分子对接的方法探讨山慈菇治疗三阴性乳腺癌的作用机制。利用TCMSP数据库和文献中获得山慈菇化学成分,在Swiss Target Prediction平台上搜索活性成分靶点;采用OMIM、GeneCards数据库检索三阴性乳腺癌靶点,并通过String构建蛋白质互作网络,使用DAVID数据库对核心靶点进行GO分析和KEGG通路富集分析;另外选取部分化合物和靶点使用Autodock软件进行分子对接验证;运用Western blot法检测相关调控靶点蛋白的表达。结果显示,共筛选出12个山慈菇活性成分,97个关键靶点,分子对接发现主要靶点HSP90AA1、EGFR、MAPK1、JUN和PIK3CA均与活性成分对接较好。山慈菇的作用靶点富集于PI3K-AKT信号通路,山慈菇通过降低p-AKT和p-PI3K的表达水平进行调控乳腺癌细胞的增殖、凋亡和迁移。本研究初步预测了山慈菇的有效活性成分、关键靶点和作用机制,可为山慈菇治疗三阴性乳腺癌的临床应用提供依据。     

紫草素诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

以MTT法测定紫草素对乳腺癌细胞株MCF-7等的生长抑制作用,并通过形态学分析、Hoechst荧光染色、流式细胞术及免疫印迹等观察紫草素诱导乳腺癌细胞凋亡的形态学、生化特征改变及凋亡的可能机制.结果表明:紫草素对乳腺癌细胞株有显著抑制生长作用,效应呈时间和剂量的依赖性,24h半数抑制浓度(IC50)均在10μmol·L-1以下.紫草素诱导MCF-7等乳腺癌细胞发生典型的细胞凋亡,细胞周期阻滞于S期,凋亡过程中产生了85ku大小的PARP裂解片段,此效应可被广谱caspase抑制剂抑制,表明紫草素可能经caspase途径诱导MCF-7细胞发生凋亡.     

转染抑癌基因PTEN对人乳腺癌ZR-75-1细胞的细胞周期和增殖能力的影响

目的：观察PTEN（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因）对人乳腺癌细胞ZR-75-1细胞增殖和细胞周期的影响。方法；利用脂质体介导法将携带有野生型和突变型PTEN cDNA的真核表达载体pBP—wt—PTEN和pBP—G129R—PTEN导八人乳腺癌ZR-75-1细胞（质粒转染成功后实验分为C—WT—PTEN组、CG129R—PTEN组和未转染质粒组即对照组）后，以RT—PCR、Western blot分析目的基因的表达，并采用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期。结果：C—WT—PTEN组、C—G129R—PTEN组细胞PTEN mRNA及PTEN蛋白出现明显的高表达。C—WT—PTEN组细胞生长的抑制率可高达42．7％，与对照组比较．差异有显著性（P〈0．05）。但C—G129R—PTEN组细胞生长的抑制率与对照组比较，差异无显著性（P〉0．05）。流式细胞术显示C—WT—PTEN组细胞周期从G1期到S期已发生抑制。结论：野生型PTEN可依赖其磷酸酶活性抑制肿瘤细胞的增殖,并最终诱导细胞凋亡。     

survivin与三苯氧胺诱导乳腺癌细胞凋亡及耐药的关系

目的：探讨survivin在三苯氧胺（TAM）诱导乳腺癌细胞凋亡及其细胞耐药中的作用。方法：用RT-PCR和Western-blot检测survivin mRNA和蛋白表达，四唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性．用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：TAM浓度在1μg／ml时，发挥最大的促凋亡和抑增殖活性，且survivin mRNA及蛋白表达下降最明显．细胞生长抑制率随着TAM浓度的增加和作用时间的延长而增加。结论：TAM诱导乳腺癌细胞凋亡与survivin有关．survivin与肿瘤细胞的凋亡和增殖有关，并参与肿瘤细胞耐药．survivin可能是乳腺癌基因治疗的一个靶点。     

蛹虫草多糖抗乳腺癌转移作用及机制研究

目的 研究蛹虫草多糖抗乳腺癌转移的作用及机制。方法 30只小鼠随机分为3组,分别为模型组、蛹虫草多糖低剂量组（20 mg/kg）和蛹虫草多糖高剂量组（80 mg/kg）,所有动物采用尾静脉接种4T1乳腺癌细胞建立乳腺癌肺转移模型,后2组接种后连续腹腔注射给予蛹虫草多糖15 d。以肺组织表面的肿瘤结节数、血清MMP-2和MMP-9含量、肺组织病理为检测指标;采用CCK8法检测蛹虫草多糖对4T1细胞增殖的影响;采用Caspase-3/7检测试剂盒测定细胞凋亡情况。结果 与模型组比较,蛹虫草多糖高剂量组能够明显降低小鼠肺部的肿瘤结节数（P<0.01）;与模型组比较,蛹虫草多糖高剂量组能够显著降低血清MMP-2和MMP-9的含量（P<0.01）;显微镜下发现,蛹虫草多糖高剂量组的肺组织肿瘤转移灶体积和数量均少于模型组。蛹虫草多糖对乳腺癌4T1细胞增殖具有浓度依赖性趋势的抑制作用,半数抑制浓度（IC₅₀）为0.092 mg/mL;与溶媒组比较,0.10 mg/mL和0.20 mg/mL的蛹虫草多糖可以显著增加Caspase-3/7的表达（P<0.01）。结论 蛹虫草多糖可抑制乳腺癌肺转移,其作用机制可能与抑制MMP-2和MMP-9的表达和直接的抗肿瘤作用有关。     

人乳腺癌细胞、结肠癌细胞和宫颈癌细胞生长曲线测定

为检测比较人乳腺细胞(MDA-MB-231、MCF-7、HBL-100)、人结肠癌细胞(HCT-8)和人宫颈癌细胞(HeLa)生长曲线的差异性.本实验首先常规培养MDA-MB-231、MCF-7、HBL-100、HCT-8和HeLa细胞,然后应用MTT方法测定这几种细胞的生长曲线.在本实验条件下,这几种细胞生长速度从高...     

青龙衣乙醇提取液对乳腺癌细胞抑制作用的研究

目的研究青龙衣（核桃楸青果外皮）乙醇提取物对乳腺癌细胞的抑制作用。方法将青龙衣乙醇提取液与乳腺癌细胞采用共同体外细胞培养和MTT法。结果青龙衣乙醇提取物对乳腺癌悬浮细胞具有一定的抑制作用。     

二氢杨梅素诱导MDA-MB-231细胞凋亡

为了探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制,利用倒置显微镜观察细胞形态变化,用流式细胞仪检测DMY对MDA-MB-231细胞的致凋亡能力和细胞内钙离子浓度和线粒体膜电位(ΔΨm)的改变,用蛋白质印迹(Western blotting)分析检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的变化。结果表明:MDA-MB-231细胞随DMY质量浓度加大而变圆变小,细胞存活数减少;流式细胞仪检测显示随DMY质量浓度的增加,DMY对MDA-MB-231细胞有促凋亡作用,胞内钙离子浓度逐渐增加,而线粒体跨膜电位(ΔΨm)逐渐减少;Western blotting结果显示DMY可诱导MDA-MB-231细胞中caspase-3和caspase-9蛋白质活化,并呈现浓度依赖关系。表明DMY可通过线粒体途径诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

Abnormal cytokinesis in cells deficient in the breast cancer susceptibility protein BRCA2

Germ-line mutations inactivating BRCA2 predispose to cancer. BRCA2-deficient cells exhibit alterations in chromosome number (aneuploidy), as well as structurally aberrant chromosomes. Here, we show that BRCA2 deficiency impairs the completion of cell division by cytokinesis. BRCA2 inactivation in murine embryo fibroblasts (MEFs) and HeLa cells by targeted gene disruption or RNA interference delays and prevents cell cleavage. Impeded cell separation is accompanied by abnormalities in myosin II organization during the late stages in cytokinesis. BRCA2 may have a role in regulating these events, as it localizes to the cytokinetic midbody. Our findings thus link cytokinetic abnormalities to a hereditary cancer syndrome characterized by chromosomal instability and may help to explain why BRCA2-deficient tumors are frequently aneuploid.     

阳和汤对裸鼠移植性乳腺癌骨转移模型作用机制的探讨

目的探讨阳和汤对裸鼠移植性人乳腺癌骨转移模型的作用及其相关调节因子的影响。方法股骨接种人 乳腺癌细胞建立裸鼠乳腺癌骨转移模型。随机分为阳和汤高、低剂量组、唑来磷酸组、模型组、假手术组,动态观察各组 裸鼠骨转移癌的生长情况, 测量骨转移癌体积, 绘制生长曲线; 给药20 d 后处死动物, 测取瘤质量, 计算抑瘤率; ELISA 法检测裸鼠血清中相关调节因子PTHrP、RANKL、OPG 含量的变化。结果1.阳和汤高、低剂量组、唑来磷酸组的 骨转移癌灶体积均小于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）;2.阳和汤高、低剂量组、唑来磷酸组PTHrP 和RANKL 含 量明显低于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）,而OPG 含量水平增加,RANKL/OPG 的比率下降,差异有统计学意义 （P＜0.05）。结论1.阳和汤有抗移植性人乳腺癌骨转移作用;2.阳和汤下调PTHrP、RANKL 的含量、增加OPG 的含量, 抑制RANKL/OPG 比率可能是其抑制乳腺癌骨转移的作用机制之一。     

茶氨酸和其衍生物茶氨酸氯香酰胺对高转移的 人乳腺癌细胞生长的抑制作用

旨在评估茶氨酸（T）和本实验室合成的新颖的茶氨酸衍生物-茶氨酸氯香酰胺（TClC）对高转移的人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的抑制作用,并对其作用的机制进行初步探究。采用MTT法检测不同浓度的T和TClC对MDA-MB-231细胞体外生长的影响,采用Western blotting对MDA-MB-231细胞中与癌细胞凋亡相关蛋白的表达以及药物作用可能的分子靶点进行检测。结果显示,随着浓度的增高,T和TClC对人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外生长的抑制作用逐渐增强, TClC的抑制作用要明显强于T;T和TClC均能够下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,同时上调促凋亡蛋白Bax的表达水平,使Bcl-2/Bax比率减少。此外,T和TClC均能抑制血管内皮生长因子受体VEGFR1和核转录因子NF-κB的表达, 而TClC的抑制作用要明显强于T。T和TClC对这些蛋白水平的调节作用可能是抑制MDA-MB-231细胞生长的重要机制之一。这些结果表明,T和TClC对治疗高转移的人乳腺癌可能具有广阔的应用前景。     

黄芩苷对人结肠癌HCT-116细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察黄芩苷对人结肠癌HCT-116细胞增殖和凋亡的影响.方法 用不同浓度黄芩苷(6.25、12.5、25、50、100、200 μmol/L)处理HCT-116细胞,分别用MTT、流式细胞术、实时荧光定量PCR观察细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Survivin表达.结果 黄芩苷以剂量、时间依赖方式抑制HCT-116细胞增殖、促进细胞凋亡(P＜0.01或0.05).Caspase-3表达随黄芩苷浓度增高而上调,而Survivin表达下调.结论 黄芩苷可能通过调控Caspase-3、Survivin表达,抑制HCT-116细胞增殖并诱导凋亡.     

接头蛋白LNK抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力的研究

为分析人接头蛋白LNK(hLNK)对胃癌发生发展的影响,克隆并包装含hiLNK基因的重组慢病毒并感染人胃癌细胞株SGC-7901以建立稳定过表达hLNK的细胞系SGC-7901-hLNK(7901-hLNK);Western blot验证该稳转细胞系中hLNK的表达水平,平板克隆试验分析hLNK过表达对其增殖的影响;T...