虾原肌球蛋白或卵清蛋白诱导的小鼠过敏性哮喘肺上皮损伤的比较研究

为比较虾原肌球蛋白和卵清蛋白分别诱导的小鼠过敏性哮喘肺上皮损伤,以同等剂量的虾原肌球蛋白(虾原肌球蛋白、虾原肌球蛋白含佐剂)或卵清蛋白(卵清蛋白、卵清蛋白含佐剂)每周腹腔注射致敏小鼠1次,连续3周,再进行持续7 d的抗原滴鼻激发诱导小鼠过敏性哮喘模型。测定肺指数,采用天狼星红染色法观察肺组织嗜酸性粒细胞浸润情况;PAS染色法观察肺组织支气管黏膜上皮增生和分泌黏液情况;qRT-PCR法检测肺组织上皮源性相关因子Tslp和IL-25,以及上皮紧密连接蛋白Zo-1、Ocln和Cldn18的mRNA表达水平。结果表明：与对照组相比,虾原肌球蛋白组(虾原肌球蛋白、虾原肌球蛋白含佐剂)、卵清蛋白含佐剂组均能诱导出明显的肺指数升高,肺组织嗜酸性粒细胞浸润和支气管黏膜细胞高分泌,肺组织上皮源性相关因子Tslp和Il-25的mRNA水平上调,上皮屏障紧密连接蛋白Zo-1、Ocln和Cldn18表达下调,但卵清蛋白组未见明显改变。在含佐剂组,虾原肌球蛋白组与卵清蛋白组相比,其诱导的嗜酸性粒细胞炎症,肺组织Tslp和Il-25 mRNA水平上调和Zo-1 mRNA水平下调更明显。这一研究提示虾原肌球蛋白能诱...     

豚鼠支气管哮喘气道重塑动物模型复制的研究

选择相同或相近的雄性豚鼠30只,随机分为对照组、6周实验组、10周实验组各10只,以腹腔注射10%卵清蛋白和1%卵清蛋白雾化吸入复制哮喘气道重塑动物模型。6周和10周时分别采集相应实验组动物的动脉血液,检测血气指标及钾、钠、钙、镁、磷、氯等。结果表明,6周时模型组钙、磷升高较对照组显著(P<0.05),镁降低较对照组显著(P<0.05);10周时模型组动物出现血氧分压降低趋势。由此可见,支气管哮喘气道重塑动物模型的复制中,离子指标的变化在6周时已明显,而血气指标的变化要在10周后才出现。     

miR-144/451在虾原肌球蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症中的作用研究

为探讨miR-144/451基因敲除对过敏性哮喘小鼠的影响,用虾原肌球蛋白诱导野生型小鼠和miR-144/451基因敲除鼠过敏性哮喘模型,研究miR-144/451基因对小鼠过敏性哮喘的影响。试验分为野生型小鼠对照组(WT-Ctl)、miR-144/451基因敲除小鼠对照组(KO-Ctl)、野生型小鼠哮喘组(WT-Asthma)和miR-144/451基因敲除小鼠哮喘组(KO-Asthma)。哮喘组以20μg虾原肌球蛋白腹腔注射致敏小鼠,每周1次,连续3周。激发采用滴鼻50μg虾原肌球蛋白,连续7 d,诱导小鼠过敏性哮喘模型。末次激发24 h后,小鼠称体重,取小鼠肺脏和脾脏,计算肺重/体重比值和脾重/体重比值;采用苏木素-伊红染色方法观察肺组织病理学变化;分离小鼠血浆,采用ELISA法检测血浆白介素4 (interleukin, IL-4)和IgE含量;测定虾原肌球蛋白刺激的脾脏淋巴细胞分泌IL-4和IL-5含量;流式检测支气管肺泡灌洗液中CD45⁺CD4⁺细胞百分比;qRT-PCR法检测脾脏中CD4⁺细胞Myc、IL-...     

克氏原螯虾原肌球蛋白的纯化及过敏原性分析

以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western—blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36ku蛋白质．通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白（Tropo-myosin,TM）多克隆抗体的Western—blotting分析,确定该蛋白质为TM．同源性分析表明,克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高（〉90％）．酶切位点预测显示,它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点．模拟胃肠液消化实验结果显示,纯化TM不易被胃蛋白酶降解,易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解,进一步的Western—blotting和抑制性ELISA分析结果显示,其消化产物仍具有一定的免疫活性．采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性,且蒸煮处理时间越长,效果越显著．说明。TM为克氏原螯虾主要过敏原．与其他甲壳娄动物TM的序列相似件较高．     

金莲花胶囊对卵清蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症的作用研究

为探讨金莲花胶囊对卵清蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症的作用,将C57BL/6J小鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、阳性药物地塞米松组(2 mg·kg^-1)和金莲花胶囊给药组(200和400 mg·kg^-1),每组6只。采用卵清蛋白和铝佐剂致敏小鼠,每周1次,连续3周;气管滴注卵清蛋白激发1次,滴鼻法给予卵清蛋白激发4 d,建立哮喘模型。金莲花胶囊给药组小鼠D19开始灌胃给药,连续给药7 d;阳性药物组腹腔注射给药7 d。末次激发24 h (D26),检测肺重/体重比值,HE染色观察肺组织形态学变化,PAS染色观察气道上皮细胞黏液分泌状态,天狼星红染色观察肺组织嗜酸性粒细胞浸润,分光光度法检测肺组织嗜酸性粒细胞过氧化物酶活性。结果表明：与模型组相比,金莲花胶囊能降低哮喘小鼠肺重/体重比值,改善气道嗜酸性粒细胞炎症,减少黏液高分泌和PAS评分,降低肺组织嗜酸性粒细胞过氧化物酶活性;还能减少肺组织中IL-5含量,抑制肺组织IL-5、IL-13、Muc5ac和Eotaxin的mRNA水平。且金莲花胶囊(12.5～50μg·mL^-1     

Tropomyosin基因在克氏原螯虾(Procambarus clarkii)卵巢发育过程中的表达

原肌球蛋白Tropomyosin是虾蟹类的主要致敏物质,除此以外在其他方面功能的研究非常少。本研究克隆了克氏原螯虾Tropomyosin基因,进行了同源序列比对,并分析了Tropomyosin基因在克氏原螯虾卵巢发育过程中的转录水平表达模式。研究结果显示,Tropomyosin蛋白序列高度保守,在虾蟹类甲壳动物中,8个抗原决定簇序列几乎完全一致。本研究克隆的基因存在3个核苷酸位置(c61—t,g118—a,c359—t)的变化,但是均不处于抗原决定簇内,免疫原性不受影响。Tropomyosin基因mR NA在克氏原螯虾卵巢组织中表达量很低,但是随着卵巢的发育存在表达差异,即呈现一个先提高再降低的峰型特征。本研究暗示Tropomyosin除过敏原特性外,可能也受性腺发育的部分调控影响。     

日本沼虾和克氏原螯虾胃容量的研究

以体重0.672～4.827g的日本沼虾(Macrobrachium nipponense)和3.678～43.163g的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)为试验对象,研究这两种虾的胃容量及其与体长、体重间的关系。结果表明,日本沼虾和克氏原螯虾胃容量随着体重和体长的增加而增加;将日本沼虾、雄性克氏原螯虾和雌性克氏原螯虾的胃容量(y)和体重(x)进行回归分析,分别得方程式:y=0.021 5x+0.006 5(r2=0.948 5),y=0.044 7x-0.008 5(r2=0.964 8),y=0.043 6x+0.0519(r2=0.978 7);3.009～4.827 g的日本沼虾比胃容量显著小于0.672～2.811g的个体,12.967～42.071g的雄性克氏原螯虾比胃容量显著小于3.678～9.754 g的个体,不同规格的雌性克氏原螯虾比胃容量差异不显著。     

虾青素缓解脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤

【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤的影响。【方法】健康雄性ICR小鼠40只随机分为4组,包括对照组、AST组、LPS组和虾青素预保护组(AST+LPS组)。记录小鼠体质量并计算肝脏系数;通过ELISA法检测血清中髓过氧化物酶(MPO)含量;生物化学法测定肝组织中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性;荧光定量PCR法检测抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)的mRNA相对表达量;通过HE染色观察各组肝脏细胞形态和肝损伤程度。【结果】各组小鼠初始体质量均为18 g,末次称量与初始体质量相比增加9～11 g,但各组间体质量增加无显著性差异(P0.05)。与LPS组相比,AST+LPS组小鼠肝脏系数(0.054)、血清MPO质量浓度(10.20 ng·m L~(–1))和肝组织中MDA质量摩尔浓度(2.83μmol·g~(–1))显著降低(P0.05),抗氧化酶SOD(512.14 U·mg~(–1))、GSH-Px(848.91 U·mg~(–1))和CAT(61.53 U·mg~(–1))活性显著提高(P0.05),抗氧化酶mRNA的相对表达量均显著升高(P0.05),同时肝脏损伤程度低,肝细胞形态完整,排列均匀。【结论】虾青素可保护小鼠肝细胞形态,提高肝脏抗氧化水平,调节肝组织中抗氧化酶mRNA的表达,从而缓解LPS引起的肝脏氧化应激,减轻急性肝损伤。     

克氏原螯虾仔虾蜕皮与生长研究

研究了克氏原螯虾仔虾蜕皮时间与体长、体重的关系。结果表明,克氏原螯虾仔虾体长、体重与蜕皮时间之间呈直线相关,并建立了相关方程。     

甲壳类和贝类原肌球蛋白的广谱单克隆抗体制备与鉴定

原肌球蛋白（Tropomyosin, TM）被认为是甲壳类和贝类的主要过敏原,为了应对与日俱增的甲壳类和贝类过敏风险,本研究以南美白对虾（Litopenaeus vannamei）的TM富集液为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选获得1株南美白对虾过敏原TM的单克隆抗体细胞株2F8,并利用ELISA、Western Blot、生物信息学等方法对2F8单抗进行免疫学特性分析,确定其效价、特异性、抗体亚型、结合区域,以TM的特异性单抗2F8和兔多抗构建双抗夹心胶体金试纸条分析单抗2F8的应用可行性。结果显示,单抗2F8的抗体亚型为IgG1型、效价为1.28×105,抗体与TM抗原的IC50值为20.21,亲和力高;纯化的单抗2F8可以特异性识别甲壳类、贝类和鱿鱼的主要过敏原TM,存在3个潜在的TM抗原结合区域AA0-31,AA38-43和AA58-67。制备的试纸条检测结果显示,该试纸条可在10 min内目测5 ng/mL的南美白对虾TM（相当于12.5 μg/kg）,且可用于甲壳类和贝类肌肉中TM 的检测,研究表明所制备的2F8单抗亲和力高,可用于虾蟹贝和鱿鱼中的过敏原TM的鉴定与检测,具有较好的应用价值。本研究为过敏原TM的鉴定和检测提供了重要生物材料,也为今后TM的快速检测试剂盒开发提供了技术支持。     

Amyloidosis induced in mice by Escherichia coli endotoxin

Amyloidosis was produced in mice by repeated subcutaneous injections of 0.5-or 0.005-milligram amounts of Escherichia coli endotoxin. Of the two strains of mice examined, amyloidosis was induced more readily in one than in the other. The ability of endotoxin to induce amyloidosis lends support to the view that stimulation of reticuloendothelial cells leads to amyloid formation.     

Specific mutations induced by triplex-forming oligonucleotides in mice

Triplex-forming oligonucleotides (TFOs) recognize and bind to specific duplex DNA sequences and have been used extensively to modify gene function in cells. Although germ line mutations can be incorporated by means of embryonic stem cell technology, little progress has been made toward introducing mutations in somatic cells of living organisms. Here we demonstrate that TFOs can induce mutations at specific genomic sites in somatic cells of adult mice. Mutation detection was facilitated by the use of transgenic mice bearing chromosomal copies of the supF and cII reporter genes. Mice treated with a supF-targeted TFO displayed about fivefold greater mutation frequencies in the supF gene compared with mice treated with a scrambled sequence control oligomer. No mutagenesis was detected in the control gene (cII) with either oligonucleotide. These results demonstrate that site-specific, TFO-directed genome modification can be accomplished in intact animals.     

Nerve terminal remodeling visualized in living mice by repeated examination of the same neuron

The distribution of presynaptic endings on the surfaces of autonomic ganglion cells was mapped in living mice after intravenous administration of a styryl pyridinium dye. The staining and imaging techniques did not appear to damage the ganglion cells, or the synapses on them; these procedures could therefore be repeated after an arbitrary period. Observations of the same neurons at intervals of up to 3 weeks indicate that the pattern of preganglionic terminals on many of these nerve cells gradually changes.     

Melatonin and abnormal movements induced by L-dopa in mice

Melatonin has blocked adventitious movements induced by L-dopa in intact mice. It has reversed the adventitious turning to the right, and it has induced running to the left in mice receiving L-dopa after a lesion in the right caudate nucleus.     

发根农杆菌诱导大豆毛状根体系的建立

选取中国大豆品种中黄13、黑豆44和黑豆51的子叶为外植体材料,用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)K599菌株诱导3个大豆品种产生毛状根,通过β-葡聚糖苷酶(GUS)染色进行转化效率检测。结果表明:在25℃、12h/d黑暗培养条件下,黑豆44上诱导的毛状根数量最多,显著多于中黄13和黑豆51;黑豆44诱导的毛状根转化率最高,显著高于中黄13,但与黑豆51没有显著差异;光照或黑暗培养对中黄13产生毛状根的效率没有显著影响,但黑豆44和黑豆51在黑暗培养条件下子叶产生的毛状根数明显高于光照培养条件下产生的毛状根数;大豆孢囊线虫(Heterodera glycines Ichinohe)能侵染3个大豆品种的毛状根,其中对黑豆51的侵染效率显著高于黑豆44和中黄13,侵染位点主要位于根系的生长点。     

PRRSV诱导猪体内肺泡巨噬细胞炎症模型的建立

[目的]建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导体内猪肺泡巨噬细胞(PAM)炎症模型,评价PRRSV感染对仔猪免疫系统的影响,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的临床诊断及科学防控提供参考依据.[方法]以PRRSV-GXNN1396株人工感染30日龄健康断奶仔猪,复制出PRRS病症,剖杀后采集病料,通过组织病理学和RT-PCR检测观察各免疫器官组织的病理变化及其病毒分布情况,并检测PAM细胞内的COX-1、COX-2等酶活性变化及IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β、IFN-γ、MCP-1和TNF-α等炎性细胞因子水平变化.[结果]断奶仔猪接种PRRSV-GXNN1396株后第3d开始表现出典型的PRRS病症,PRRSV主要集中在肺脏、颌下淋巴结、血液和扁桃体等样品组织中,攻毒仔猪各主要器官的实质细胞及有关淋巴细胞均出现不同程度坏死和炎症细胞浸入现象,尤其以肺脏、肾脏、脾脏等器官受损严重,出现巨噬细胞和淋巴细胞浸润.PRRSV感染早期(第3d)仔猪PAM细胞中的ROS水平及COX-2、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α等因子水平均呈升高趋势,且COX-2、IL-6、IL-8和TNF-α因子水平极显著升高(P<0.01);随着感染天数的增加,PAM细胞内的COX-2、IL-6和IL-8因子水平呈下降趋势,TNF-α因子水平呈上升趋势.[结论]成功建立了PRRSV诱导仔猪体内PAM细胞炎症模型,进一步佐证PRRSV主要侵害猪的免疫器官组织,以达到免疫抑制的效果,并推断感染第3d是病猪炎症反应的高峰期.     

金黄色葡萄球菌诱发小鼠实验性乳腺炎研究

为建立小鼠乳腺炎模型,本试验选用35只泌乳期BALB/C雌鼠随机分成7组,其中6组于产后8~10 d分别用灭菌生理盐水和不同浓度的金黄色葡萄球菌悬液50μL经乳头管注入到小鼠的第4对(腹部)乳腺内,观察小鼠体温、组织病理学、间质宽度、腺泡壁厚度的变化以及乳腺组织中CFU、TNF-α和IFN-γ含量变化。结果表明:试验组小鼠体温呈现先下降后上升的趋势,以T3组明显;组织病理学显示乳腺上皮脱落,腺泡腔内大量炎性细胞浸润,以嗜中性粒细胞为主,腺泡内空泡减少,间隔增宽,炎症明显。而随着金黄色葡萄球菌用量的加大,乳腺组织的炎症程度加剧。T3组间质宽度高于其他组。与对照组相比,T3组小鼠乳腺组织中腺泡壁厚度、CFU、TNF-α及IFN-γ含量极显著升高(P<0.01)。结果表明金黄色葡萄球菌诱发小鼠试验性乳腺炎模型与炎症的免疫病理过程和炎性反应一致,可用作病理模型使用。