种子纯度研究现状与发展

种子纯度鉴定是评定种子等级和质量的重要参考标准,也是我国当前种子质量检验工作的重点和难点.随着现代生物技术的不断发展,种子纯度鉴定技术由传统的形态标记鉴定逐步发展到集形态标记鉴定、生化标记鉴定和DNA分子标记鉴定为一体的综合鉴定技术体系.对现阶段主要的种子纯度鉴定技术进行了简要的介绍,分析了各种技术的优缺点和应用情况,...     

基于ITS 序列石斛材料的鉴定及系统进化分析

 以核糖体DNA 内转录间隔区（Internal Transcribed Spacer,rDNA ITS 区）作为DNA 条形码对石斛种进行鉴定,并进行系统进化分析。收集获得43 个石斛样品,其中35 个为已知鲜样品,8 个为待确定种的干样品。从35 个鲜品中获得在GenBank 中未公布的海南石斛、华石斛以及秋石斛中的两个品种‘白花红心秋石斛’和‘紫红条纹秋石斛’ITS 序列。ITS 序列差异与形态特征的关系分析,结果显示,ITS 同源性的高低,与形态的相似性成正相关。以舌唇兰属为外类群,并从GenBank 中获得其他20 个石斛种的ITS 序列,对35 个已知样品和8 个待检测样品进行分析。结果显示,35 个已知样品分为5 支,其中大部分石斛种（24 个）聚在一支。竹叶石斛和苏瓣石斛聚在一支;华石斛、聚石斛和小黄花石斛聚在一支;短棒石斛单独为一支;竹枝石斛与‘白花红心秋石斛’和‘紫红条纹秋石斛’聚在一支;海南石斛和木石斛聚在一支。根据ITS 序列,大多数样品分组与传统分组相同,但按传统分组不在石斛组的重唇石斛、钩状石斛、鼓槌石斛和叉唇石斛分在了石斛组,并确定了檀香石斛分在石斛组。确定了8 个石斛干样品所属的种。     

黄瓜线粒体DNA指纹图谱的构建及其在杂交品种纯度鉴定中的应用

为实现黄瓜杂交种子纯度的快速鉴定,利用分子标记技术构建‘长春密刺’等21份黄瓜品种的线粒体DNA指纹图谱。结果表明:从69对线粒体引物中,共筛选出13对在21份黄瓜品种中呈现出多态性的引物。同时,基于亲本材料的指纹图谱,利用引物mtSSR 4对‘南水3号’商品种子进行检测,分子标记鉴定纯度为95.7%,且真、假杂种编号与田间形态鉴定结果一致。黄瓜线粒体DNA指纹图谱的构建,不仅能为‘南水3号’等杂交种的纯度检测工作提供新的技术指导,还可为黄瓜品种的鉴定、遗传亲缘关系分析等提供一种新的方法。     

黑皮冬瓜黑老粗F1种子纯度的RAPD鉴定

用CTAB法从冬瓜种子发芽幼根提取DNA,经电泳检测其条带清晰明亮,可满足RAPD分析要求。对黑皮冬瓜黑老粗F1及其亲本DNA用140个RAPD引物分别进行RAPD扩增,筛选获得1个在父母本间可产生稳定且为双亲互补型片段的引物SPS-C15。利用该引物对一批商品种进行纯度鉴定,纯度为90.7 %,实际田间形态鉴定的纯度为89.8 %,RAPD检测结果与田间鉴定结果基本吻合,表明RAPD技术可用于黑老粗F1的种子纯度快速检测。     

忍冬属四种不同种质农艺学性状比较及DNA条形码鉴定研究

以忍冬属不同来源的4种种质为试材,采用形态分类学的方法,根据株高、叶长、叶宽、叶的形状、花开时间等农艺性状,对不同种质进行了比较分析,同时采用分子生物学的方法,以5对引物对4份种质的DNA条形码序列进行PCR扩增和测序,构建聚类图,并分析物种的亲缘关系。结果表明:忍冬属4种种质在农艺学性状上差异不明显,如采用形态学的方法进行鉴别容易导致误判,然而这4种种质在DNA条形码序列上存在着丰富的遗传多样性,研究认为在对金银花种质进行亲缘关系鉴定时,借助DNA条形码序列特性与农艺学性状相结合能有效区分物种之间的差异,鉴定结果相对可靠。     

野生金针菇的分子鉴定及遗传多样性分析

针对采自全国7个自然保护区共计11个野生金针菇和2个常见栽培金针菇菌株,进行ITS-PCR和产物测序,经过与Gen Bank上已知序列的比对,结合传统形态特征鉴定,确定各菌株的拉丁名,并用MEGA6.0进行ITS序列的遗传距离分析和系统发育树构建。结果表明,金针菇的ITS1比ITS2进化速率快,变异位点和简约信息位点差异较大;13株金针菇种内遗传距离为0~0.014,种间遗传距离为0.029~0.045;ITS系统发育树也支持将13个菌株分为3个类群,即3个种,这与分子鉴定和传统形态鉴定结果相吻合,且同一菌种地域分布越近的菌株越容易聚为一支。研究表明,ITS序列分析可用于野生金针菇的分子鉴定和种间遗传多样性分析。     

美人蕉种质资源的RAPD分析

 利用RAPD技术对美人蕉属4个种和52个品种的亲缘关系进行研究, 从125个随机引物中筛选出27个多态性较高的引物, 扩增出223条DNA带, 其中140条为多态带, 占62.78% , 平均每个引物扩增的DNA带数为8.26条。3个种和7个品种具有特异的位点, 可作为种质鉴定的依据。根据RAPD扩增结果建立美人蕉UPGMA聚类图, 在0.11处将56份种质划分为4类。分子聚类结果与形态分类结果基本一致, 4个种分属4个类群, 52个品种分为大花美人蕉和兰花美人蕉。对美人蕉品种分类和品种演化进行了初步探讨。     

结球甘蓝西园4号种子纯度的SSR鉴定

利用SSR分子标记技术对结球甘蓝西园4号及其亲本的DNA进行扩增,从90对SSR引物中筛选出1对具有双亲条带差异明显的引物O112-G04,构建了清晰的DNA扩增指纹图谱,并对西园4号种子进行了纯度鉴定,与田间形态学的鉴定结果高度一致,种子纯度均为96.7%.结果表明,利用这对引物对结球甘蓝西园4号种子的纯度鉴定是可行的.     

琯溪蜜柚炭疽病病原鉴定北大核心CSCD

【目的】确定引起琯溪蜜柚炭疽病的病原种类,为针对性地防治炭疽病提供理论依据。【方法】2014—2015年从平和县4个乡镇采集发病材料,对病原菌进行分离、纯化、致病性测定以及形态特征观测、r DNA-ITS序列分析,对病原菌的种类进行鉴定。【结果】经单孢分离后,所获得的菌株对琯溪蜜柚果实可致病,并产生典型症状,对病原菌进行显微形态观测,病原菌分生孢子及附着孢的形态为炭疽菌属真菌,以菌株GX(3)的DNA为模板,扩增得到全长为600 bp的DNA片段,并获得该菌的rDNA-ITS序列,发现其与胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides Penz的相似性高达100%。【结论】根据病害症状、病菌的形态特征及ITS序列同源性比较的结果,将琯溪蜜柚炭疽病的病原菌鉴定为胶孢炭疽菌C.gloeosporioides。     

琯溪蜜柚炭疽病病原鉴定

【目的】确定引起琯溪蜜柚炭疽病的病原种类,为针对性地防治炭疽病提供理论依据。【方法】2014—2015年从平和县4个乡镇采集发病材料,对病原菌进行分离、纯化、致病性测定以及形态特征观测、r DNA-ITS序列分析,对病原菌的种类进行鉴定。【结果】经单孢分离后,所获得的菌株对琯溪蜜柚果实可致病,并产生典型症状,对病原菌进行显微形态观测,病原菌分生孢子及附着孢的形态为炭疽菌属真菌,以菌株GX(3)的DNA为模板,扩增得到全长为600 bp的DNA片段,并获得该菌的rDNA-ITS序列,发现其与胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides Penz的相似性高达100%。【结论】根据病害症状、病菌的形态特征及ITS序列同源性比较的结果,将琯溪蜜柚炭疽病的病原菌鉴定为胶孢炭疽菌C.gloeosporioides。