棘球蚴病免疫诊断的新进展

一、囊状棘球蚴病(CHD,细粒棘球绦虫) 20年前,当Capron及其同事(1967)用免疫电泳从免疫了细粒棘球蚴囊液的动物血清及感染棘球蚴的病人血清中描述了一条主要沟沉淀带时,他们为囊状棘球蚴病血清学诊断的特异性的“金标准”(Gold Standard)奠定了基础。这条沉淀带,作者们把它称为“弧5”,是生发层及原头节所分泌的一种热稳定脂蛋白抗原抗体应答的结果。这一抗原是迄今为止已鉴定的细粒棘球绦虫中绦期物质中最具免疫原性、最特异的组分(Schantz等,1986;Richard等,1986)。在许多不同地区对数千病例的检测表明,在滴人血清中证实“弧5”是感染细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫或伏氏棘球绦虫任一种的直接阳性证据。在Varela—Diaz等(1978)报道感染猪囊尾蚴的病人血清中亦发生“弧5”反应之前,还没有在未     

刚察地区猪传染性胸膜肺炎血清学调查

猪传染性胸膜肺炎,亦称为猪溶血性嗜血杆菌病,是猪的一种呼吸道传染病,在临床和剖检上出现肺炎和胸膜炎的特征症状和病变。为了摸清刚察地区猪传染性胸膜肺炎的感染情况,2006年我们对刚察地区的118头猪进行了抽检,结果发现阳性病例,现将试验结果报告如下:1材料和方法1.1抗原、标准阴、阳性血清,均由青海省畜牧兽医总站提供。1.2被检血清:为刚察地区的青海湖农场、三角城羊场、黄渔农场、县种畜场及各乡农牧户饲养的猪,抽样采集被检血清118份。1.3稀释液配制:即巴比妥缓冲液(VBD),首先按次序加入各试剂配制巴比妥储藏液(pH7.2-7.3)和明胶水…     

用对流免疫电泳方法诊断鸡传染性喉气管炎

对新疆乌鲁木齐地区、昌吉地区、库尔勒地区的鸡场进行调查,证实新疆大多数鸡场存在鸡传染性喉气管炎。对10个大鸡场随机抽样10份血清,分别用对流免疫电泳法(CIET)对鸡传染性喉气管炎进行诊断试验,表明8个鸡场80份血清,被 CIET 检出有57份呈阳性,两个鸡场20份血清均为阴性。对流免疫电泳方法如下。一、试验所用溶液的配制:pH8.6巴比妥缓冲液;二乙基巴比妥钠10.3克。二乙基巴比妥酸1.84克。蒸馏水加至1000.0毫升。     

应用对流免疫电泳鉴定胸膜肺炎嗜血杆菌血清型

本文建立的对流免疫电泳技术可用于胸膜肺炎嗜血杆菌(HP)的血清型鉴定。应用0.05M巴比妥缓冲液(pH8.0),以自行制备的已知血清型免疫血清检测HP浸出抗原,通电20～45分钟获得结果。本法比琼脂扩散法敏感8～12倍,克服了2-ME试管凝集试验不能检测自身凝集菌株的缺点,不存在种间、血清型间交叉反应,是一种快速、敏惑和特异的鉴定方法。     

猪细小病毒的研究 Ⅲ.对流免疫电泳检测PPV抗原和抗体

利用对流免疫电泳技术检测猪细小病毒(PPV)抗原和抗体的结果初步表明,该法具有较强的特异性和可重复性,在pH8.6、离子浓度0.1mol、电流强度4mA的条件下,于琼脂凝胶中1～1.5小时、于琼脂糖凝胶中1.5～2小时,抗原和抗体孔间可出现了3条清晰沉淀线。中间一条沉淀线粗而致密。琼脂凝胶优于琼脂糖凝胶检测效果。与现有方法相比,对流免疫电泳的突出特点是简便、快速、稳定、省力,抗原和血清不需作任何处理,因此可望代替现有的常规检测方法即血凝(HA)和血凝抑制(HI)法而应用于生产实际。对一些有关问题进行了讨论。     

异源性抗原抗猪囊尾蚴感染的研究

本文报道了泡状带绦虫活化六钩蚴的超声裂解抗原可以诱导猪体产生抗猪带绦虫攻击感染的交叉保护作用。猪囊尾蚴匀浆抗原也使猪体产生了较强的抗猪带绦虫攻击感染的保护作用。泡状带绦虫六钩蚴超裂抗原免疫组与猪囊尾蚴匀浆抗原免疫组的保护情况是相似的,这表明异源免疫也可使猪体产生较好的抗猪囊尾蚴感染的免疫。由于制备异源性抗原的泡状带绦虫能够从狗的体内获得,因此在体外培养猪带绦虫未获成功之前可以解决从人体获取猪带绦虫的困难。     

应用放射免疫分析检测猪弓形体病的研究

本文介绍抗原放射微量沉淀试验(RAMP),固相放射免疫分析(SPR-IA),放射对流免疫电泳(RCEP)等方法用于检测人畜共患的弓形体病,并与间接血凝(IHA),对流免疫电泳(CEP),环状沉淀试验(RPT)的结果分别进行了比较。试验用三批人工感染兔56头,健兔28头,四批人工感染猪120头,健猪50头,在敏感性、特异性和重复性方面均获得了较为满意的结果,在此基础上又对现场曾有弓形体病史的500多头猪进行了检查,并与常规血凝(IHA)等方法比较,结果测得几种方法的阳性率的平均值分别为RAMP71.62％,SPR1A74.03％,IHA52.93％,CEP40.40％,RPT39.26％所有这些方法阳性的符合率均在90％以上,对猪其他高热病(猪瘟)及寄生虫病(日本血吸虫病,棘球蚴病)均未发现有交叉反应。因此认为R1A可提供作为猪弓形体病免疫诊断的一种特异性强、灵敏度高的可靠方法。     

屠宰猪寄生虫的检疫情况

屠宰猪寄生虫的检疫情况齐齐哈尔市铁锋区兽医卫生检疫站自１９８４年以来，实行定屠宰检疫，共屠宰生猪４４１９头，检出猪囊尾蚴１８１头，感染率４．１％；细颈囊尾蚴１９３２头，感染率４３．７％，感染强度１—３７个．棘球蚴１８１头，感染率４．１％，感染强度１—...     

应用醋酸纤维膜电泳技术分离东亚钳蝎蝎毒蛋白组分

本文介绍了应用醋酸纤维膜电泳技术对东亚钳蝎蝎毒进行蛋白组分分离,并对缓冲液离子强度、电泳电流强度及电泳时间等方面进行了探索。试验结果表明,应用醋酸纤维膜电泳技术可以有效地分离蝎毒蛋白组分。在pH8.6、0.05mol/L巴比妥-巴比妥纳缓冲液中,电流强度0.6mA/cm、电泳时间90分钟与电流强度0.8mA/cm、电泳时间60分钟条件下的分离效果最佳,可获得15条电泳带,阴极端5条,点样处1条,阳极端9条。     

细粒棘球蚴细胞系(13G-5)细胞代谢抗原的免疫原性和反应原性

应用培育成功的人源细粒棘球蚴细胞系(13G-5)细胞的天然代谢抗原,接种昆明小鼠,于接种后第14天给免疫小鼠接种人源细粒棘球蚴原头节约1 000 个,于200 d 剖检观察有无包囊形成,病理切片鉴定;并用该抗原作为诊断抗原,使用间接血凝(IHA)、琼脂扩散(AGD)试验,检测临床确诊的细粒棘球蚴病人血清。以多房棘球蚴病人血清、细颈囊尾蚴羊血清及正常人血清作为对照。结果表明,该抗原能使60% 的小鼠获得完全抵抗细粒棘球蚴原头节攻击的能力,未完全获得保护的小鼠形成包囊的数量、大小较对照组明显减少,且为不育囊;使用该抗原IHA 检测31 份血清,阳性24 份,阳性率77.42% ,AGD检测30 份血清,阳性13 份,阳性率43.33% ,2 种方法对多房棘球蚴病人血清和细颈囊尾蚴羊血清及正常人血清不起反应。     

双向电泳结合蛋白质印迹技术分析猪囊尾蚴乳酸脱氢酶

为了研究猪囊尾蚴乳酸脱氢酶(LDH)的表达,试验选择四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,给其口服槟榔-南瓜子驱虫,收集、制备虫卵悬液(8万个/mL),再给3头20日龄三元杂交乳猪猪灌胃虫卵悬液,每头1 mL,40 d后收集、制备猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳(2-DE)分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜(PVDF膜),用自制的大鼠抗猪带绦虫LDH血清作为一抗、健康大鼠血清作为阴性对照进行蛋白质印迹(Western-blotting)分析。结果表明:双向电泳凝胶共检测到(207±9)个蛋白质斑点,相对分子质量(Mr)为14 400～94 000,等电点(pI)为3.0～10.0;试验组特异性抗原抗体阳性杂交斑点为1个,阴性对照未见阳性杂交斑点;将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析后初步确定该蛋白斑点的pI/Mr为7.03/35 368,与猪带绦虫LDH的pI/Mr理论推导值接近,说明猪囊尾蚴表达LDH。     

猪源HBV样病毒感染的研究

用检测人血清乙肝标志物的试剂和方法,检测2823份猪血清,检出HBsAg阳性血清56份(56/2823),阳性率为1.98%,不同地区的检出率在1.0%～4.5%之间.对37份HBsAg阳性血清检测了抗—HBS、HBeAg、抗—HBe、抗—HBe.共检出阳性23份(23/37);100份HBsAg阴性猪血清与37份HBsAg阳性猪血清经双育试验检测谷丙转氨酶,有非常显著性差异,血清HBsAg阳性猪的肝脏有中等度到重度的病理组织学变化(11/11);用ELISA法检测HBsAg阳性猪血清中人聚合白蛋白受体(PHSA—R),21份样品中有19份阳性(19/21),而HBsAg阴性猪血清10份未检出阳性;用生物素—亲和素标记的HBV—DNA探针检测HBsAg阳性猪血清.11份样品有41份阳性(4/11);采用从人血清中提纯Dane颗粒的方法,从8份猪血清中都提纯了类似Dane颗粒的病毒粒子(8/8);提纯的病毒粒子和Dane颗粒与羊抗—HBV作免疫电泳,沉淀线基本一致;用2mL含HBV样病毒颗粒的猪血清接种10头仔猪,有3头感染(3/10).传至第3代,10头仔猪4头感染(4/10).实验证实,猪源HBV样病毒粒子是一种新发现的病毒,和HBV相比,抗原有相关性,基因有同源性.     

黑龙江省部分市县猪绦虫蚴和犬绦虫感染情况调查

对来自黑龙江省１７个市,县的１５６头猪进行了绦虫蚴感染情况调查,并对其中５个市,县的５０头犬进行了绦虫感染情况调查。结果,细颈囊尾蚴,辣球蚴,猪囊尾蚴的感染率 ５０．６％,４．５％和３．２％;犬泡状带绦虫,细粒棘球绦虫的感染率分别为２４．０％和４．０％。     

酶标葡萄球菌A蛋白染色法用于猪囊尾蚴病诊断的初步研究

用自制的猪囊尾蚴头节“颗粒性抗原”,以HRP—SPA作为第二抗体,进行间接免疫酶染色诊断猪囊尾蚴病。检测61份猪囊尾蚴病血清,阳性59份,检出率为96.6％;健康猪血清69份、细颈囊尾蚴病和肺丝虫病猪血清各10份,均为阴性。此法简便易行,快速、准确,适于基层使用。     

大肠杆菌987P抗原的提纯及部分特性鉴定

用高速匀浆法使987P纤毛从987P菌体上脱开,等电点沉淀粗提无细胞液中的987P抗原,用Sepharose CL-4B凝胶柱进一步纯化该抗原。提纯抗原的分子量为19500;电子显微镜负染观察可见匀质、僵直、长短不一的毛发状结构,直径约7nm,与抗原来源菌株OK抗血清进行的免疫电泳,只出现一条沉淀线;用纯化抗原制备的兔、豚鼠抗血清,能凝集不同血清型的987P~+参考和分离菌株。提纯的987P抗原达到了免疫纯和电泳纯,并用此抗原制备了高特异、高效价的抗血清。     

用免疫扩散试验测定牛和羊血清中牛病毒性腹泻—粘膜病抗体的研究

用 Oregon C24 V 弱毒株感染的原代犊牛肾细胞培养物制备抗原,以自然感染 BVD—MD 病毒的康复羊血清为阳性参考血清,在0.8%的琼脂糖凝胶(用离子强度为0.02,DH8.1的 Tris—Giycin(?)—Hcl 缓冲液配制)中进行免疫扩散试验,48小时内就能出现清楚的沉淀线。在对新西兰和英国进口羊的检疫中,免疫扩散试验和病毒中和试验的结果基本一致.     

应用对流免疫电泳技术鉴定肠病原大肠杆菌菌毛抗原

应用对流免疫电泳技术对肠病原大肠杆菌菌毛抗原成分鉴定结果,K_(88)、F_(41)菌毛抗原均出现2条沉淀线,K_(99)和987P 出现1条沉淀线。通过应用 K_(88)、K_(99)、987P、F_(41)因子血清分别对相应产菌毛抗原标准株的交叉试验及对不产菌毛抗原菌株的对照试验表明,本方法具有特异、敏感、快速等特点,可以在实际工作中用于菌毛抗原成分的鉴定。电泳时采用0.06M 巴比妥缇冲液(pH8.6),孔径及孔间距均为4.0mm.端电压6V/cm,一般电泳3小时即可得到终结果。     

水貂阿留申病对流免疫电泳用诊断抗原的制备和试用

本文报道从金州水貂场的银蓝貂中分离出一株水貂阿留申病毒(ADV),定名为《辽金81-02》株。用它人工感染8月龄健康水貂并连续传代,可以保持病毒的强毒力。收获急性感染9天后发病貂的脾、肝及淋巴结作为种毒材料加以结冻保存,并成功地用它们制取阿留申病毒对流免疫电泳抗原,用于检测抗阿留申病毒的抗体,诊断疾病。 制取病毒抗原的方法:首先是用氟炭提取含毒组织乳剂,再经重复超速离心加以浓缩及部分提纯,并用盐酸-甘氨酸处理进行活化。每批抗原要用对照抗原及阳性血清进行抗原活性鉴定。 用这种初步纯化的活性抗原,能在水貂感染后7天,在对流免疫电泳中检出阿留申病毒的沉淀性抗体。试验证实:用对流免疫电泳检测阿留申病毒和抗体是特异性的,这要比碘凝集试验的特异性和敏感性高得多。经过对比试验,我们所制10批抗原的特异性、复制性及敏感性均可和美国的商品抗原相比。电泳时,可在45分钟内,在1％琼脂糖凝胶板的抗原抗体孔之间出现清晰可见的沉淀线。 Cho及Greevfield已报告,可以成功地用对流免疫电泳试验从病貂群中清除阿留申病。我们用试制抗原在金州水貂场对1500只各色型水貂进行AD抗体检测,结果扑杀阳性貂所提示的典型阿留申病的病理病变是符合一致的;与美国同类商品抗原平行检测130只貂的结果,也是符合     

猪囊尾蚴头节单克隆抗体的制备及特性鉴定

为制备抗猪囊尾蚴头节单克隆抗体(MAb),本研究采用纯化的猪囊尾蚴头节(Cysticercus Cellulosae Scolex)作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术,获得3株分泌抗猪囊尾蚴头节MAb的杂交瘤细胞系(分别命名为2C6、3A5和4G10)。对这3株MAb进行生物学特性鉴定,其染色体平均记数为92±10对,经间接ELISA检测腹水效价分别为1:12800、1:6400和1:25600。亚类鉴定证实,这3株亚类均为IgG1型。Westernblot检测表明,3株纯化的MAb均可与猪囊尾蚴头节抗原发生特异反应;而与猪囊尾蚴囊壁和囊液抗原均不发生反应。本研究获得的3株MAb为猪囊尾蚴病免疫学诊断研究奠定技术基础。     

大肠杆菌K88纤毛抗原的提纯和抗血清的制备

以5％绵羊血改良Minca琼脂筛选和克隆表达良好的K88^＋菌株，改良Minca琼脂培养获得K88菌液。用加热法及高速匀浆法使K88纤毛从菌体上脱下。饱和硫酸铵沉淀粗提，用Sepharose CL-4B凝胶过滤纯化K88抗原。提纯的抗原经SDS—PAGE电泳测定其分子量约为25000，且仅此一条蛋白带；与K88抗血清进行琼脂扩散试验只出现一条沉淀线。用提纯的抗原经多次免疫家兔制备了K88抗血清。抗血清在玻板凝集试验中只凝集K88菌株，不凝集K99，987P或F41菌株；在琼扩试验中，只与K88粗提抗原出现一条沉淀线，且效价为1：64，而不与K99，987P抗原出现沉淀线；在免疫电泳试验中，与无细胞K88纤毛液只出现一条沉淀线。鉴定结果表明，所制备的K88血清特异性强、效价高，可作为单因子血清用于凝集试验、琼扩试验等血清学试验，对K88菌株进行鉴定，对K88纤毛抗原进行定性和定量检测。