HPLC法测定虎杖白藜芦醇的含量及其稳定性研究

白藜芦醇已被列为抗心血管、抗癌最有前途的药物之一。由于白藜芦醇对光、热不稳定,本研究建立了一套简单而提取率高的从虎杖中提取白藜芦醇的样品处理方法,研究了高效液相色谱法测定虎杖白藜芦醇的条件。采用色谱柱:岛津Shim parkCLC ODS(150mm×6.0mm,i.d.5μm),以乙腈∶水(体积比为41∶59)溶液为流动相,流速1.0mL/min,检测波长306nm。在此条件下,样品溶液进样质量浓度范围在500～1000μg/mL时,白藜芦醇含量与峰面积呈良好的线性关系。检出限为10ng/mL,且回收率高。     

同步荧光检测虎杖提取物中白藜芦醇含量的新方法

建立了一种同步荧光检测虎杖提取物中白藜芦醇含量的新方法,系统地研究了检测条件对白藜芦醇荧光强度的影响,以及实验的准确性、重现性、回收率。该方法的线性回归方程为y=18.90x+3.1298,荧光强度与浓度在0~1.68×10-5mol/L的范围内具有良好的线性关系,检出限为8.839×10-10mol/L。研究表明,该检测方法操作简便、可行、成本低,检测结果较为准确,能满足科研和工业生产的要求。     

虎杖中白藜芦醇提取技术研究

虎杖富含白藜芦醇。白藜芦醇是一种具有重要临床应用价值的天然多酚类化合物。本研究利用虎杖植物的块茎,采取生物发酵处理方法,有效地提高了白藜芦醇产量,获得到了较大的经济效益。     

酶法提取虎杖中白藜芦醇新工艺研究

采用纤维素酶解法新工艺提取虎杖中白藜芦醇。即在乙醇提取前，先用纤维素酶处理虎杖粗粉。通过实验确定最佳的提取工艺条件为：提取温度50℃，酶解pH值5．0，酶解时间90min，纤维素酶与虎杖粗粉配比为1：500。与传统醇提工艺相比，提取率提高了近5倍。     

虎杖不同组织部位及其愈伤组织中白藜芦醇含量的测定

通过超声波提取虎杖根状茎中不同组织部位及其不同愈伤组织中的白藜芦醇，并采用HPLC方法检测分析白藜芦醇含量。结果表明：在虎杖根状茎不同组织部位中，白藜芦醇含量（质量分数计）依次为：根状茎芽〉髓〉木质部〉韧皮部〉周皮，其中根状茎芽中白藜芦醇质量分数高达0．4251％，髓中白藜芦醇质量分数为0．2664％。在同一批根状茎芽诱导的不同颜色愈伤组织体系中，棕褐色愈伤组织中白藜芦醇质量分数最高为0．0550％，淡黄绿色愈伤组织中仅为0．0005％。光照培养条件下的愈伤组织中白藜芦醇质量分数为0．0104％，黑暗培养条件下为0．0075％。不同外植体诱导的愈伤组织中白藜芦醇质量分数依次为：根状茎芽〉茎〉叶，以根状茎芽诱导的愈伤组织中白藜芦醇的质量分数最高，为0．0550％。不同组织部位诱导的愈伤组织中白藜芦醇质量分数为：鲜茎（根状茎中韧皮部）〉根状茎中木质部〉根状茎中髓，鲜茎中达到0．0090％。     

微波法从虎杖中提取白藜芦醇工艺

研究了微波法提取虎杖中的白藜芦醇,通过正交实验初步确定微波功率、乙醇浓度、料液比、提取时间4个因素对提取效果的影响并确立最佳的提取工艺条件为：微波功率700W ,乙醇浓度70％,料液比1∶20,微波时间20min。     

不同生境条件对虎杖白藜芦醇含量的影响

对武陵山区不同地域采集的虎杖植株进行白藜芦醇含量比较测定,结果表明:白藜芦醇含量有较大的差异,以常德2号地区的虎杖白藜芦醇含量最高,为0．337％。通过对30个不同地区、不同地理位置的虎杖生长环境调查,发现虎杖最佳生长条件为:坡向南坡,坡位上坡,土壤种类黄棕壤,土壤质地粘土,土壤母质板页岩,郁蔽度有零星光照。     

虎杖不同组织部位及其愈伤组织中白藜芦醇含量的测定

通过超声波提取虎杖根状茎中不同组织部位及其不同愈伤组织中的白藜芦醇,并采用HPLC方法检测分析白藜芦醇含量.结果表明:在虎杖根状茎不同组织部位中,白藜芦醇含量(质量分数计)依次为:根状茎芽＞髓＞木质部＞韧皮部＞周皮,其中根状茎芽中白藜芦醇质量分数高达0.425 1%,髓中白藜芦醇质量分数为0.2664%.在同一批根状茎芽诱导的不同颜色愈伤组织体系中,棕褐色愈伤组织中白藜芦醇质量分数最高为0.055 0%,淡黄绿色愈伤组织中仅为0.000 5%.光照培养条件下的愈伤组织中白藜芦醇质量分数为0.0104%,黑暗培养条件下为0.007 5%.不同外植体诱导的愈伤组织中白藜芦醇质量分数依次为:根状茎芽＞茎＞叶,以根状茎芽诱导的愈伤组织中白藜芦醇的质量分数最高,为0.055 0%.不同组织部位诱导的愈伤组织中白藜芦醇质量分数为:鲜茎(根状茎中韧皮部)＞根状茎中木质部＞根状茎中髓,鲜茎中达到0.009 0%.     

TLC法测定几种植物中熊果酸的含量

采用薄层扫描法对车前草、夏枯草、山茱萸中熊果酸的含量进行了测定, 其TLC测定条件为用环己烷-氯仿-乙酸乙酯(20 5 8) 作展开剂; 用10%H2SO4乙酸溶液作显色剂。测定结果表明: 3种植物中, 以夏枯草的熊果酸含量最高, 达0 812 %, 车前草的熊果酸含量最低, 为0 516 %, 前者是后者的1 57倍。该方法简便、快速、准确、可靠, 回收率高达96 1 %。     

中压柱层析法分离白藜芦醇的研究

对虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb．et Zucc．)中的白藜芦醇进行了提取分离和含量测定。考察了浸提温度、浸提液浓度、浸提时间和次数、料液比等5个因素对白藜芦醇提取的影响，确立了白藜芦醇最佳提取条件为：浸提液体积分数为95％，浸提温度60℃，料液比11:1，回流提取3次，每次60min。采用中压硅胶柱层析法分离白藜芦醇，产物经重结晶后用高效液相色谱测定含量达99．28％。结果表明所建立的制备及分离纯化工艺可用于白藜芦醇的生产。     

微波程序控温控压辅助双水相萃取虎杖果实中白藜芦醇与大黄素的研究

以虎杖果实为原料,采用微波程序控温控压辅助乙醇-硫酸铵双水相萃取白藜芦醇与大黄素,对比了该方法与微波辅助提取、微波辅助双水相萃取对提取得率和纯度的影响,并进一步通过红外光谱分析产物结构。结果表明:料液比1∶20(g∶m L)、相分离系数0.5的乙醇-(NH4)2SO4双水相体系,程序控温分为5级,依次为室温、40、50、60和70℃,对应控压为137.9、344.75、689.5、1 034.25、1 379 k Pa,每级微波辐射1.2 min后间歇5 min,进行微波功率自动连续调整,在此条件下虎杖果实中白藜芦醇与大黄素得率为0.694%与2.067%,纯度分别为82.68%与87.25%,提取效果明显优于微波辅助提取和微波辅助双水相萃取,且不会引起生物活性物质失活或变性。该方法能显著提高虎杖果实中白藜芦醇与大黄素提取得率,稳定性好、重复性好、精密度高、回收率高,同时又能简化其分离纯化工艺,降低生产成本,因此该方法适合用于虎杖果实中白藜芦醇与大黄素的提取分离。     

虎杖规范化种植操作规程

该规程明确规定了宁化虎杖产地环境、种子和种根标准、育苗技术、栽培技术措施、病虫害防治、采收加工、虎杖根干品的农药、重金属残留标准、有效成分含量标准以及包装、贮运方法等.以便科学种植虎杖,指导福建虎杖人工规模化种植.     

虎杖愈伤组织的诱导及其白藜芦醇形成初探

将虎杖P olygonum cusp id a tum不同外植体经不同消毒时间处理后,接种在添加不同激素种类和水平的相同基本培养基上或相同激素种类和水平基本培养基上进行诱导实验,同时对根和根茎芽、叶、韧皮诱导的愈伤组织进行白藜芦醇含量的测定.结果表明:基本培养基以M S较好,外植体叶对激素种类较为敏感,其中适当浓度的NAA诱导愈伤组织比2,4-D的效果好,KT比BA好,添加KT的培养基上诱导愈伤组织比较紧密,有利于分化,在M S+NAA 2 m g/L+KT 0.1 m g/L培养基上诱导愈伤组织较好,根茎芽的诱导率最高,为73%;愈伤组织的生长趋势从接种的第3天开始生长,到21 d时生长达到最高峰,干质量为0.461 2 g,以后生长速度减慢;对不同材料诱导的愈伤组织进行白藜芦醇含量的测定,其中根茎部芽的诱导的愈伤组织中白藜芦醇含量最高,其次是叶和根,最低的为韧皮.     

杉木林冠下虎杖不同栽培方式生长效果分析

采取不同清理方式、郁闭度、坡位和坡向随机与正交试验设计研究,并采用Duncan多重分析比较,提出了虎杖在林冠下郁闭度0～0.9之间均能生长,而以0.5郁闭度最适宜高、径和生物量生长.虎杖的高、径生长量及生物量从高到低依次为下坡＞中坡＞上坡,阴坡的高、径生长量及生物量均大于阳坡;采伐剩余物的不同清理方式从高到低依次为1 m×1 m水平带等高堆积＞全面清理＞不清理.同时,从不同郁闭度、坡位和清理方式进行正交试验的结果看出,3个因素中极差值排序为RB＞RA＞RC,说明郁闭度对虎杖高生长与干物质生产影响最大.试验表明,下坡+0.5郁闭度+隔1m等高线堆积清理组合(A3B2C1),虎杖的高生长和干物质量最大.     

虎杖组织培养技术研究

以虎杖带腋芽的茎段为试验材料,研究虎杖组织培养与快速繁殖的适宜条件。试验结果表明,虎杖在MS 6—BA 2.0 mg/L IBA 0.2 mg/L 3%蔗糖 0.7%琼脂培养基上增殖效果最好,培养30 d,增殖倍数达到3.4以上;在1/2MS IBA 0.5 mg/L 3%蔗糖 0.7%琼脂培养基上生根效果最好,生根率100%,平均根长2.0 cm,平均苗高3.5 cm,以圃地表土为基质,在温室大棚内间歇喷雾的移栽成活率达96.25%。