山东省栽培灵芝属菌株的分子特征

提取27个山东省栽培灵芝属菌株的基因组总DNA,PCR扩增获得其ITS序列,构建基于ITS序列的系统进化树。结果表明,供试灵芝菌株分布于3个聚类组,分别为Ⅰ组(Ganoderma lingzhi sp.nov.)、Ⅳ组(G.applanatum)和Ⅴ组(G.siense)。研究明确了山东省栽培灵芝属菌株的分类地位、亲缘关系和分子特征,为山东省灵芝属种质资源保护、遗传改良和新品种选育提供理论依据。     

基于ITS和ISSR标记的灵芝遗传多样性和群体结构分析

以来自不同地理区域的48个灵芝种质资源为试材,采用ITS和ISSR分子标记的方法,研究了灵芝遗传多样性,以期利用遗传信息数据较理想地显示出不同灵芝菌株的遗传多样性。结果表明：通过进行ITS序列扩增测序,将48个灵芝菌株分为赤芝(35个)、无柄灵芝(11个)、四川灵芝(1个)、古巴栓孔菌(1个)。5条ISSR引物共扩增得到53条条带,多态性条带比率为96.23%,Nei′s基因多样性为0.27,Shannon′s信息指数为0.43。ISSR标记遗传相似系数约为0.70,将48个灵芝菌株分为3组,其中第1组为11个无柄灵芝,第2组为菌株29“盆景1”,其他菌株为第3组,说明2种标记结合分析能够更加准确分析不同菌株间的亲缘关系。菌株16和17同为赤芝,且ISSR分子标记遗传相似系数达0.98,推测可能为同一品种,为生产中出现的同物异名现象。该研究选取的用于PCR扩增的ISSR引物,多态性较好、稳定性较高,能有效鉴别出无柄灵芝与其他灵芝,并揭示种质的遗传多样性和群体遗传结构,可为灵芝种质资源保护及优质种质材料选育提供参考依据,以期更好地推动灵芝产业健康发展。     

灵芝属9个野生菌株的分子鉴定与系统发育关系分析

对江西省9个野生灵芝属菌株以及全国多地收集的31个栽培灵芝菌株进行ITS序列测序和分析，结果 9个野生菌株有灵芝、紫芝、南方灵芝、有柄灵芝、树灵芝等。构建系统发育树，分析9个野生灵芝属菌株与31个栽培灵芝菌株间的系统发育关系，为9个野生灵芝属菌株研究开发提供参考。     

16个灵芝菌株基于ITS及ISSR标记的遗传多样性分析

应用ITS、ISSR分子标记技术对收集保存的16个灵芝菌株进行遗传多样性分析。基于ITS序列，将2个“白灵芝”鉴定为乳白栓孔菌（Leiotrametes lactinea），并非白肉灵芝（Ganoderma leucocontextum），其他菌株均为灵芝属。基于ISSR分子标记技术对样品进行聚类分析，结果表明，相似水平在0.64时，16株供试菌株可以聚为三组。第一组中的1号与9号的遗传相似系数在0.95以上，11号与12号菌株的遗传相似系数达到1.00，可能属于同物异名。研究结果将为纠正灵芝种源同物异名、同名异物的问题以及进一步开发利用奠定基础。     

中国栽培灵芝种“赤芝”的拉丁学名探究

灵芝是中国历史上最著名的保健、药用真菌。灵芝的药用价值最早记载于2 000多年前的《神农本草经》,其中记载的＂赤芝＂就是现在广泛栽培当作保健食品的灵芝。经研究比较赤芝与所有相近种的形态以及核糖体内转录间隔区（ITS）核酸序列,证实赤芝既不是Ganoderma lucidum（亮盖灵芝）,也不同于过去发表的所有灵芝种类,因此在2012年被作为新种Ganoderma lingzhi发表。中国南北各地栽培的赤芝证实是相同种类。产于北美的G.curtisii（柯蒂斯灵芝）其亲缘性最接近赤芝。在中国,亲缘性和形态上与赤芝接近的有生长于华南的G.multipileum（重伞灵芝）、G.flexipes（弯柄灵芝）及G.tropicum（热带灵芝）等。     

野生树舌灵芝菌株的分子鉴定

采集泰安市及其周边地区野生树舌灵芝,将其组织分离并纯化,得到10个菌株的纯培养,利用真菌总DNA提取试剂盒提取其基因组总DNA,通过PCR扩增获得其rDNA ITS区域序列,将获得的序列进行同源性比对和构建系统进化树。结果表明,10个分离物与GenBank中的3个树舌灵芝分离物(DQ424996、DQ425009、JN008873)聚为一簇,ITS核苷酸一致率为99.46%～100%,从分子水平上证明10个分离物为树舌灵芝(Ganoderma applanatum)。     

基于ITS系列分析鉴定野生灵芝属菌种

以从福建漳州采集到的5个野生大型真菌为试验材料,分离纯化菌丝体,提取基因组DNA并且扩增其r DNA的ITS序列,基于ITS序列和子实体形态特征对菌株的分类地位进行初步研究。经鉴定,白芝2号为雅致栓孔菌(Trametes elegans),西灵1为假芝(Amauroderma rugosum),西灵5和长泰灵芝为韦伯灵芝(Ganoderma weberianum),白灵芝与Nemania bipapillata较接近。该研究为西灵5、白芝2号、西灵1等野生菌株的开发利用提供了重要依据。     

三株野生重伞灵芝的鉴定及其多糖、三萜含量分析

采用形态鉴定、ITS鉴定和ITS-RFLP分子标记方法对采集自福建的3株野生灵芝进行鉴定,并将其生物学特性及化学成分与赤芝(Ganoderma lingzhi)菌株ZK进行比较。结果表明:采集的3株野生灵芝为重伞灵芝(G.multipileum)。与赤芝菌株ZK相比,3株野生重伞灵芝菌株LQ、LJ和Y1菌丝生长速度快(P0.01),LQ、LJ、Y1最适生长温度分别为32、32、34℃,均高于赤芝ZK;供试菌株均偏好酸性生长环境;重伞灵芝LQ和Y1的产量分别为每袋(12.1±1.3)、(11.7±0.9)g,达到ZK产量(17.6±1.8)g的66%以上。Y1与LQ的子实体多糖含量分别为(12.9±0.1)、(10.7±0.3)mg/g,高于赤芝ZK的子实体多糖含量(9.2±0.2)mg/g(P0.01);LJ、Y1的三萜含量约为7.5mg/g,LQ的三萜含量为(6.5±0.3)mg/g,分别是ZK三萜含量的84.27%和73.03%。从HPLC图谱可知重伞灵芝有许多赤芝没有的峰,三萜酸的种类比较丰富。     

基于ITS序列分析探讨我国栽培凤尾菇的分类地位

针对我国栽培凤尾菇(Pleurotus sajor-caju)及其近缘种共10个菌株的ITS序列,应用特异引物进行PCR扩增,对其产物进行测序,并从GenBank上下载侧耳属(Pleurotus)3个种7条ITS序列、韧伞属(Lentinus)的4条ITS序列和香菇属(Lentinula)的3条ITS序列,以冬虫夏草(Cordyceps sinensis)和蛹虫草(Cordyceps militaris)为外类群,用NJ(Neighbor-joining)法构建系统发育树,结果表明:凤尾菇在侧耳属分支上与侧耳属内种的相似性达98.5%以上,韧伞属和香菇属的属内相似性也均为98%以上,而侧耳属和韧伞属、香菇属的属间相似性仅约80%,故凤尾菇应归于侧耳属;在进一步研究中,将该凤尾菇与其近缘种的ITS1-5.8S-ITS2序列作碱基完全比对,结果发现它与肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)的碱基完全一致,而与其它近缘种均存在较大碱基差异,因此,目前我国广泛栽培的凤尾菇与肺形侧耳可能是同物异名种,建议订正其名称,将其拉丁名统一为P. pulmonarius.本研究首次将ITS序列分析和碱基比对结合对凤尾菇的分类地位及拉丁名进行研究,结果表明ITS序列分析在近缘种的分类鉴定上很有价值.     

野生香蘑属菌株的ITS序列分析

以6个野生香蘑属菌株为研究材料,进行ITS测序,并以10个GenBank香蘑属菌株ITS序列为参照,应用DNA—MAN、MEGA4软件构建系统发育树状图。研究结果表明,No．1、2、4、5、6与GenBank花脸香蘑菌株聚为一类,应视为花脸香蘑菌株,而No．3菌株与肉色香蘑及GenBank中3个水粉杯伞AY521248、DQ149727、DQ149728都具有0．308的遗传距离,其分类地位有待予进一步研究。     

灵芝制种过程多糖含量变化研究

灵芝是一类具有较高药用价值的腐生型真菌。本研究选取4株灵芝真菌,进行人工制种,并测定其不同阶段的多糖含量。结果表明,Ganoderma atrum Hz2、Ganoderma lucidum Hz5、Ganoderma sinense Hz1三株灵芝真菌在制种过程中多糖含量呈递减的趋势,而菌株Ganoderma neojaponicum Wzs1二级种在制种过程中多糖含量最多为1.75%;4株菌株中Hz2制种完成后多糖含量最大为0.88%。以上结果反应了灵芝多糖的含量随着制种的进行而逐渐减少,此外黑芝Ganoderma atrum的人工栽培品种相比其它3种灵芝具有较高的药用价值。     

四个红菇科菌株的rDNA ITS序列分析和系统发育研究

Internal transcribed spacer (ITS) sequences of four edible and medicinal fungi belonging to the Russulaceae, collected from the Lishui mountainous area of Zhejiang Province, were cloned and sequenced. Comparisons with sequence data in GenBank were undertaken using BLAST, and the four ITS sequences, together with 15 reference sequences obtained from GenBank, were used to construct a phylogenetic tree. rDNA ITS sequences of the four strains ranged from 673 to 766 bp in length and between 47.4% and 49.48% in GC content. Phylogenetic data indicated strain R57 to be Russula cyanoxantha. Differences in the size and GC content of ITS sequences from strains R32 and R57 (R. cyanoxantha) and strain L37 (Lactarius sanguifluus) were significant, whereas the corresponding differences between strains R32 and R57 were relatively small. A close kinship, with only small detectable differences in their respective ITS sequences, existed between R. mustelina, R. virescens and R. parazurea. A similar situation applied to strains of L. sanguifluus and L. salmonicolor.     

利用核ITS序列和叶绿体psbA-trnH序列探讨野扁桃和矮扁桃分类学关系

研究旨在通过植物学性状和分子生物学分析确认扁桃类植物中野扁桃和矮扁桃是否同物异名或是不同的2个种。从出版的专著和发表的文献中查找野扁桃和矮扁桃的植物学特征,对2者的描述进行对比,并以新疆塔城的野扁桃为实验材料,扩增其细胞核ITS序列和叶绿体psbA-trnH序列,与GeneBank中下载的矮扁桃的ITS和psbA-trnH序列进行比对。结果表明,野扁桃和矮扁桃的植物学特征描述基本一致,psbA-trnH序列100%相似,并且在以ITS序列对扁桃亚属所有物种进行构树时以100%的自展值聚在一起。对2者的主要植物学特征和分子生物学的核质基因序列综合分析,认为野扁桃和矮扁桃是一个种。     

六种蛹虫草与其它食药用菌中的纤溶酶活性比较

采用纤维蛋白平板法对来自辽宁、上海地区的6株蛹虫草(Cordyceps militaris)的纤溶酶活性进行比较,结果表明:不同来源的蛹虫草纤溶酶活性差异较大,最高的比活力可达134.8IU/mg(鲜LN-2),最低的比活力仅有3.4IU/mg(鲜LN-3);经PCR鉴定首次发现,就纤溶酶活性而言,双交配型的蛹虫草明显高于单交配型的蛹虫草;本研究还进一步比较分析了蛹虫草(C.militaris)与秀珍菇(Pleurotus geesteranus)等11种食药用菌的纤溶酶活性;结果表明,所测定的11种食药用菌中,纤溶酶比活力最高的是冬虫夏草(C.sinensis)(149.5IU/mg),其次是蛹虫草(65.6IU/mg)和秀珍菇(30.6IU/mg),而双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、桑黄(Phellinus spp.)、灵芝(Ganoderma lucidum)和银耳(Tremella fuciformis)的子实体中未检测到纤溶酶。     

不同灵芝类群药效的特异性研究

通过对10种灵芝的表型性状及亲缘关系进行分析将灵芝聚为3类,对不同类群灵芝菌株的免疫调节、抗疲劳及改善睡眠的药效作用进行了比较研究。结果表明:灵芝的功效具有特异性,不同类群间存在功效差异性。     

中国猴头菌属真菌分子系统学研究

在传统分类的基础上结合分子系统学方法对我国猴头菌属真菌进行分类学研究,结果表明,我国猴头菌属分3个种,即猴头菌（Hericium erinaceus）、珊瑚状猴头菌（H．coralloides）和冷杉猴头菌（H．abietis）。ITS序列聚类分析获得18份材料,遗传相似系数范围为0．018～0．453,冷杉猴头菌与猴头菌的亲缘关系较近,而与珊瑚状猴头菌的亲缘关系较远。     

Phylogeny of the genus Phalaenopsis (Orchidaceae) with emphasis on the subgenus Phalaenopsis based on the sequences of the internal transcribed spacers 1 and 2 of rDNA

Summary

Phylogenies of 17 species of the genus Phalaenopsis and two related species were derived based on sequence analysis of the internal transcribed spacer 1 and 2 (ITS1 + ITS2) of ribosomal DNA. A genetic distance matrix was determined based on sequence length and base composition. Two phylogenetic trees were constructed following Maximum parsimony (MP) and the Neighbor-joining (NJ) methods. Seventeen Phalaenopsis species were shown to be a monophyletic group as supported by molecular data analysis from ITS1 and ITS2 sequences in this study. This result agreed that the genera Doritis and Kingidium could be treated as the genus Phalaenopsis. In addition, members of subgenus Phalaenopsis are not a monophyletic group. Within the subgenus Phalaenopsis, members of section Phalaenopsis are a monophyletic group. Both section Stauroglottis and Deliciosae are not monophyletic groups. Furthermore, members of the section Deliciosae and Esmeralda of subgenus Phalaenopsis are closer to subgenera Parishianae, Proboscidioides and Aphyllae and separated from the other Phalaenopsis species. In conclusion, this study supports the systematics of the genus Phalaenopsis at the generic level but not at the subgeneric level.     

19个药用茯苓菌株的ITS序列分析

以19个来源不同的茯苓栽培菌株为材料,采用MEGA4软件对ITS序列进行NJ法聚类分析,构建系统发育树。结果显示,19个药用茯苓菌株ITS长度为1 608 bp～1 611 bp,G/C含量在55.7%～59%之间,遗传距离范围为0～0.0636,遗传差异不大,17个茯苓菌株组成1个大群,茯苓9号和茯苓5.545菌株各自单独聚为一个群。     

基于ITS序列分析黑龙江东部地区市售黑木耳品种遗传多样性

黑木耳(Auric ularia auric ula-judae)是一类栽培广泛的食药兼用菌,为调查黑龙江省东部地区市售黑木耳的种质资源,收集了东宁县黑木耳批发市场黑木耳干品11个和牡丹江市售黑木耳试管菌种6株.采用组织分离方法获得菌丝体,提取菌丝体DNA,扩增ITS片段并测序.测序结果发现,经比对,17株供试黑木耳菌株ITS序列同源性均在99%~100%,其中16株的ITS序列长度为559 bp;系统发育分析表明,供试17种黑木耳菌株可分为7种不同类型,表明市售黑木耳菌种存在商品名不同但实际为同一品种的情况.以上结果为黑木耳种质资源调查及当地黑木耳品种引进提供理论指导.