羊附红细胞体双抗体夹心ELISA诊断方法的建立

为快速准确诊断和检测羊附红细胞体病,及时采取防治措施,建立了检测羊附红细胞体抗原的双抗夹心ELISA诊断方法。选取规模化养殖场羊,镜检附红细胞体红细胞感染率> 90%,无菌采取血液,分离羊附红细胞体抗原,制备纯化兔抗羊附红细胞体抗体,应用辣根过氧化物酶标记抗体,进行双抗体夹心ELISA试验。试验结果表明,双抗体夹心ELISA方法的最佳工作条件为:抗体最佳包被量为82.91 μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶400,抗原最低检出量为7.81 μg/mL;而且与支原体、大肠杆菌、葡萄球菌以及牛、猪、兔附红细胞体均不出现交叉反应,表明该方法具有良好的特异性,可用于羊附红细胞体病的诊断和群体检测。     

双抗体夹心ELISA方法快速诊断奶牛附红细胞体病探讨

附红细胞体病是一种人畜共患病,不仅能引起家畜家禽发病、生产性能降低甚至大批死亡,而且直接危害人身健康。2005年8月,河北省某奶牛场有1头奶牛发生了以贫血、黄疸、体温升高为主要特征的疾病,经用抗生素及中药补血治疗,未见好转,后据临床症状和血液涂片镜检初步诊断为附红细胞体病。为进一步确诊,进行了双抗体夹心ELISA试验。1材料和方法1.1试验材料纯化的兔抗牛附红细胞体抗体、酶标抗体及阴性抗原(河北农业大学动物科技学院寄生虫室制备)。抗体含量为5mg/ml,酶标抗体中HRP浓度(酶量)为474μg/ml,酶标结合物产率为47.4%。1.2试验方法…     

猪附红细胞体双抗体夹心ELISA检测方法的建立和应用

为建立猪附红细胞体双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法,本研究以抗猪附红细胞体单克隆抗体为捕获抗体,兔抗猪附红细胞体多克隆抗体为检测抗体,优化工作条件,建立猪附红细胞体DAS-ELISA检测方法.结果显示:该方法的最佳工作条件为:捕获抗体包被浓度为5.42 g/mL,检测抗体浓度为6.84 g/mL,酶标...     

牛附红细胞体病的诊断和治疗

附红细胞体病是多种动物都能发生的传染病 ,有人称之为“黄疸性贫血”、“类边虫”等。其临床特征是发热、贫血、黄疸 ,严重时导致死亡。哈尔滨市香坊区幸福乡镇莫利村革某带 2岁病牛前来就诊。牛在头产后 2 0d去奶站集中挤奶 ,回来后发病症状表现为体温升高 ,稽留不退 ,呼吸急促 ,奶量迅速下降 ,用青霉素治疗不见好转。1　临床检查　 病牛消瘦 ,精神沉郁 ;呼吸急促 ,达75次 /min ,体温 4 0 .5℃ ,心跳 110次 /min ;眼结膜、口、唇等处出现不同程度苍白 ,胸前、腹部中度水肿 ,瘤胃蠕动音弱 ,有时腹泻 ,或排干硬粪便 ,尿黄 ,乳房表面有片状红…     

单抗捕捉ELISA检测猪附红细胞体血清抗体方法的建立

猪附红细胞体病是由附红细胞体(Eperythrozoon)寄生于多种动物和人红细胞表面、血浆和骨髓而引起的一种人畜共患病[1-2].本病自1928年发现以来被人们长期忽视,近年来随着人附红细胞体病病例的增多,家畜附红细胞体病的暴发流行,引起国内外学者的关注.本试验首次应用自主研制的猪附红细胞体单克隆抗体,初步建立了一种简便、经济、特异的单抗捕捉ELISA方法,用于检测猪附红细胞体的血清抗体,为诊断试剂盒的研制奠定了基础.     

牛附红细胞体病

附红细胞体病是由于附红细胞体(Eperythrozoon，EP)寄生在动物血液里，附着在红细胞表面或游离在血浆中而引起的一种人畜共患病。近年不断有猪、牛、羊、兔发病的报道，家畜附红细胞体感染的暴发流行，已引起畜牧兽医工作者和医学工作者的密切关注。最近我们遇到牛群中发生此病，现报道如下。     

牛附红细胞体病的诊治

1发病情况2000年6月,卢龙县燕河营镇西吴庄村民吴××、良仁庄高×自养黑白花奶牛各1头先后发病,前来燕河营镇兽医站就诊.病初牛体温高达41℃左右,呈稽留热,可视粘膜黄染、苍白,其症状与牛焦虫病症状相似,有时可与焦虫病混合感染,但用黄色素、贝尼尔等药物治疗无效,或者效果不明显,短时间内其症状可缓解,但很快就复发,高热不退,食欲不振,呼吸急促.     

应用间接ELISA方法检测猪附红细胞体抗体

近年来,国内外对附红细胞体病的研究已取得一定进展,针对此病的血清学诊断先后建立了CFT、IHA、ELISA、IFAT等检测方法,这些血清学诊断方法所用抗原均为附红细胞体的粗提抗原。而本试验对猪附红细胞体抗原进行了提纯,并进行了免疫性分析,用具有最好免疫性的提纯抗原建立了检测猪附红细胞体抗体间接ELISA方法,并与IHA进行了比较,旨在为猪附红细胞体病的流行病学调查及疫病监测提供简便、快速、特异、敏感的检测方法。1材料与方法1.1主要材料96孔酶标板为MaxiSorp公司产品;羊抗猪IgG-HRP为美国KPL公司产品;猪肺炎支原体、猪瘟、…     

温氏支原体感染动物模型的建立

为促进温氏支原体的深入研究,本试验建立了温氏支原体感染动物模型。选择6～8周龄健康雄性昆明种小鼠60只,随机分为A、B、C、D 4组,试验组(A、B、C)分别以不同方式感染温氏支原体,D组为对照组。结果表明,腹腔注射一定剂量高感染强度的牛红细胞悬液,同时注射免疫抑制剂地塞米松组(C组)表现为首现期出现早,且高峰期红细胞感染率高。应用悬滴镜检法和PCR诊断方法对感染小鼠血样进行鉴定,均符合温氏支原体特征。选择对照组小鼠和感染率高、临床症状较为明显的C组小鼠各10只,进行血液生理生化指标测定(RBC、WBC、Hb、TP、G、ALT、AST),结果呈现出与牛感染温氏支原体相同的规律。     

禽流感病毒夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感病毒（AIV）夹心ELISA快速检测方法组装成诊断试剂盒。试剂盒由1～11号试剂、一块酶标板和一份说明书组成。对试剂盒内各组份进行了特异性、敏感性、重复性及保存期的测定。结果表明．在-10℃下能保存6个月．而且特异性强、敏感性高、重复性好，操作简单．方便．能快速、准确地检测出样品中是否带有AIV抗原。先后制备了8个批次的诊断试剂盒．于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用．取得了良好的效果。     

奶牛附红细胞体和伊氏锥虫二重PCR诊断方法的建立

为建立奶牛附红细胞体和伊氏锥虫两种病原诊断方法并探索二者之间在奶牛感染中的关系,本研究针对两病原分别设计两对特异性引物,建立了奶牛附红细胞体和伊氏锥虫感染的二重PCR诊断方法,其扩增片段大小分别为415bp和237bp。敏感性试验和特异性试验表明,附红细胞体和伊氏锥虫的DNA的最低检测量为0.154pg和0.105pg;与猪肺炎支原体、大肠杆菌、葡萄球菌、鸡艾美耳球虫、牛双芽巴贝斯虫无交叉反应。35份临床血样检测结果为:奶牛附红细胞体阳性率22.89%,伊氏锥虫阳性率8.89%,其中共感染率为2.89%。临床试验表明,该方法可用于奶牛附红细胞体和伊氏锥虫的诊断,特别适用于早期诊断。     

检测E.coliO157特异性IgY的间接ELISA方法的建立

本实验以E．coliO157免疫产蛋鸡，经四次免疫获得高免特异性卵黄抗体IgY，并以10^8～10^9 CFU／ml灭活E．coliO157为包被抗原，建立了抗E．coliO157卵黄抗体的间接ELLSA检测方法。酶标兔抗鸡最佳工作浓度为1：320。并研究了卵黄抗体不同处理方法、包被温度和时间对ELLSA检测的影响。该方法简便可靠，适于对大肠杆菌特异性抗体IgY的动态检测和大批检测。     

猪瘟病毒E2蛋白双抗体夹心ELISA定量方法的建立

本研究旨在建立定量检测猪瘟病毒（CSFV）E2重组蛋白的双抗体夹心ELISA方法。用 CSFV WH303单克隆抗体包被96孔酶标板,用CSFV 1B6单克隆抗体连接HRP作为酶标抗体,以杆状病毒表达纯化的CSFV E2蛋白作为标准品蛋白,建立双抗体夹心ELISA定量方法。用SDS-PAGE方法检测标准品蛋白的纯度,BCA蛋白定量法定量标准品蛋白的浓度。稀释标准品至线性区间,绘制标准曲线。用棋盘法确定包被单克隆抗体和酶标抗体及标准品蛋白的最适稀释度。用批间重复和批内重复试验验证该方法的重复性和稳定性。SDS-PAGE结果显示,CSFV E2蛋白的标准品纯度>95%,BCA蛋白定量法测定CSFV E2蛋白的标准品浓度为1.553 mg/mL。包被单克隆抗体的浓度为0.1 μg/mL,酶标抗体的最适稀释度为1∶400。CSFV E2蛋白标准品稀释浓度在2.43~77.65 μg/mL范围内有很好的线性关系,相关系数R²值在0.99以上。批间和批内重复性检测试验变异系数均<15%。本试验成功建立了定量检测CSFV E2重组蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法,该方法具有良好的重复性和稳定性,为CSFV E2蛋白的定量提供了有效方法。     

应用ELISA双抗体夹心法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

本试验建立了检测鸡病毒性关节炎病毒的ELISA双抗体夹心法.取代反应、阻断试验均为阴性,与NDV、MDV和IBDV无交叉反应,对已知阳性标本的检测均为阳性;其敏感性比琼扩试验高80倍以上,这表明ELISA夹心法具有较高的特异性和敏感性.在人工感染后2～27d,关节滑膜、腱鞘和脾脏中病毒检出率为100％;还从肝脏、法氏囊和脑组织中检测到病毒.     

黄曲霉毒素B1残留ELISA试剂盒的研制及应用

本研究采用间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)检测黄曲霉毒素B₁(aflatoxins B₁,AFB₁)残留量。将AFB₁与蛋白质载体牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备了AFB₁-BSA和AFB₁-OVA偶联物,以AFB₁-BSA作为免疫原制备特异性抗体,并成功建立了AFB₁残留间接竞争ELISA检测方法及检测试剂盒。试剂盒IC₅₀为128.8 ng/L,检测线性范围为50~1800 ng/L,检测限不超过100 ng/kg;食用油、花生和谷物的平均添加回收率大于71.3%,批内、批间变异系数均小于14.2%。因此,本试剂盒具有操作简便、检测快速、灵敏度高等特点,将在植物性食品中AFB₁的残留检测中发挥重要作用。     

Establishment of ELISA Detection Method for Neomycin in Import and Export Animal

This experiment used carbodiimide get egg albumin synthesis of artificial antigens coupling neomycin,through square test to determine the best antigen packaged concentration and antibody dilution ratio,mass concentration logarithm of neomycin as abscissa,inhibition rate of antibody as the ordinate drawing standard curve,established ELISA fast detection techniques of neomycin in edible animal for import and export.Methods of recovery and specific test had been done in further research.Results showed that the test dilution ratio of optimum synthetic antigen was 1:200,the best dilution multiple of antibodies was 1:2 000, half inhibitory concentration(IC₅₀) was 6.99 ng/mL;The minimum detection limit of the method was 40 ng/mL,and cross reaction rate of gentamicin, kanamycin, streptomycin,tobramycin,amikacin and dihydrostreptomycin were less than 0.1%,the average of recovery rate was 83.77%.The range of standarding curve in 1.5~40 ng/mL was linear,the correlation coefficient was 0.987,the equation of standarding curve was y=-37.66x+94.592;Compared with HPLC method,the operation was simple and fast.The test results showed that the enzyme-linked immunosorbent method of detecting neomycin was rapid,efficient and specific.     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。