CpG ODN对水貂免疫增强效果的研究

为获得对水貂具有免疫刺激活性的CpG ODN序列,设计合成了45种含不同CpG基序的DNA序列,应用MTS比色法测定合成CpG ODNs刺激水貂PBMC增殖的能力,结果有11条CpG ODN对水貂PBMC有刺激活性（SI＞2）;应用SI值大于5的6种CpG ODN分别与水貂伪狂犬灭活疫苗联合免疫水貂,免疫后经水貂血清抗伪狂犬中和抗体效价测定和水貂PBMC非特异性增殖效应检测,结果有3个CpG ODN序列对水貂具有较好免疫增强作用,分别是CpG-21(ATCGATTTGTCGTTATCGAT)、CpG-23(ATCGATGAACGTTAACGTTTC)和CpG-24(AACGTTCATCGATATCGATGT)。本研究获得3条对水貂具有较好免疫刺激活性的CpG ODN序列,可为水貂新型CpG佐剂的研究提供参考。     

CpG ODN对传染性腔上囊病病毒活疫苗免疫效果的影响

将120只来航系SPF鸡随机分成对照组、注射CpG ODN组、IBDV活疫苗点眼免疫组及IBDV活疫苗 CpG ODN免疫组，每组30只，于7日龄时对试验鸡进行初次免疫，21日龄时进行加强免疫，28日龄时用IBDV野毒株攻毒。检测不同时间的IBDV特异性抗体效价、血液和脾淋巴细胞的Con A刺激指数(SI)。结果表明，CpG ODN处理后脾细胞的增殖转化能力强于血液淋巴细胞的增殖转化能力；CpG ODN的使用使血清中IBDV特异性抗体产生时间提前7d，抗体效价升高；与对照组相比，仅用CpG ODN处理就可使1／3的鸡攻毒后迅速产生高效价(约1：3000)的特异性抗体，降低了发病率和死亡率，证明CpG ODN能增强IBDV活疫苗的免疫效果。     

不同类型CpG基序对细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究

为探究不同类型CpG基序对细粒棘球蚴（Echinococus granulosus）Eg95抗原的免疫增强作用,将pET-32a-3Eg95重组大肠杆菌,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白pET-32a-3Eg95。将重组蛋白分别与常规佐剂Quli-A、pUC18-CpG和CpG ODN混合制备基因工程亚单位疫苗样品,免疫小鼠。通过间接ELISA方法检测抗体水平,通过实时荧光定量PCR方法测定体外刺激试验后细胞因子的相对表达量,检测不同佐剂在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原免疫效果的增强作用。结果显示,诱导表达重组蛋白的大小约为56 ku,与理论值相符,用羊细粒棘球蚴阳性血清检测有特异性条带;pUC18-CpG组和CpG ODN组小鼠免疫后14、28、42 d的抗体平均水平（D_{450 nm}）分别为3.10、3.03、3.22和2.98、3.12、3.27,与Quli-A组抗体平均水平相比均差异显著（P<0.05）;CpG ODN组血清中抗体平均水平略高于pUC18-CpG组,但差异不显著（P>0.05）。重组蛋白刺激后pUC18-CpG组与CpG ODN组IFN-β、IFN-γ和TNF-α的相对表达量分别为6.88、2.35、6.28和5.03、2.85、7.07,与Quli-A组相比差异均显著（P<0.05）。因此相对于常规佐剂Quli-A,pUC18-CpG和CpG ODN在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原都有显著的免疫增强作用,CpG ODN的免疫增强作用略优于pUC18-CpG,二者均可作为免疫佐剂,增强现有包虫病基因工程疫苗抗原的免疫效果。     

鸡新城疫,鸡传染性支气管炎二联活疫苗的保存期试验

鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗的保存期试验游启有（广东省生物药厂广州，５３０００１）根据第五版《兽医生物制品规程》的规定，鸡新城疫、传染性支气管炎（以下称新支）二联活疫苗的有效期为二年（－１５℃以下保存），而现在实施的第六版《兽医生物制品规程》...     

鸡新城疫,传染性支气管炎二联活疫苗病毒含量的测定

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗病毒含量的测定赵世军（辽宁省兽医生物药品厂，辽阳１１１０００）根据《兽医生物制品规程》（一九九二年版）（下称《规程》）的规定，鸡新城疫（ＮＤ）、鸡传染性支气管炎（ＩＢ）二联活疫苗的效力检验可用１０－３疫苗１ｍｌ，分别...     

免疫佐剂 CpG—DNA的研究进展

特异性免疫即是含有PAMP的反应物与天然免疫细胞上的PRR相结合,激活天然免疫应答,从而活化抗感染途径,并最终发挥获得性免疫应答的一系列反应过程。CpG—DNA作为一种在进化中高度保守的PAMP,它可以模拟感染过程,克服新型疫苗PAMP不足的缺陷,从而诱导强烈的免疫应答。CpG—DNA可以直接激活B淋巴细胞、单核／巨噬细胞和树突状细胞,上调免疫刺激分子的表达,调节免疫反应,诱导IL-12、IL-1和TNF-等多种细胞因子的分泌,此外,它还能间接刺激NK细胞、T淋巴细胞。由于其独特的优点,CpG—DNA在畜牧兽医临床中显示其极强的使用价值和广阔的应用前景。     

鸡脾转移因子对鸡新城疫、传染性法氏囊病活疫苗免疫效果的影响

鸡脾转移因子（TF）与鸡新城疫活疫苗和法氏囊活疫苗配合使用，免疫雏鸡。结果显示，在ND-HI抗体较低时，TF对新城疫活疫苗有免疫增强作用，而在母源抗体水平较高时，免疫增强作用不明显。本次试验中，TF对法氏囊活疫苗未显示明显的免疫增强作用。     

鸡新城疫低毒力耐热保护剂活疫苗—锐必新

鸡新城疫低毒力耐热保护剂活疫苗——锐必新是瑞普（保定）生物药业有限公司以围外引进配方为基础。以鸡新城疫病毒LaSota株为种毒研制出的耐热保护剂活疫苗系列产品之一。经检验，锐必新各项指标已达到国外同类产品质量标准，达到国内领先水平。2005年9月22日，该产品已获农业部核发的《新兽药注册证书》【证号：（2005）新兽药证字30号】。     

新城疫La Sota疫苗对山东分离株的免疫保护试验

用标准疫苗株La Sota活疫苗在隔离器中接种SPF鸡,进行免疫保护试验.免疫后,每7 d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒(NDV)潍坊毒SGM01、昌乐毒SCL03、东营毒HY、日照毒SRZ03、莘县毒SSX03和标准强度F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF鸡对照.每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,确定疫苗的保护性.结果表明,La Sota疫苗能对除SGM01和HY以外的病毒攻击的SPF鸡提供较好的保护.     

Enhancement of mucosal immune responses by intranasal co-delivery of Newcastle disease vaccine plus CpG oligonucleotide in SPF chickens in vivo

Immunostimulatory CpG oligodeoxynucleotides (ODN) have been tested as immunoadjuvants for various vaccines in mice and human. Findings from previous reports suggest that CpG ODN can be used to enhance magnitude and balance of an immune response while reducing undesirable side effects of commercial vaccine, when delivered by parenteral route. Recently, it has been showed that CpG ODN is a promising mucosal adjuvant in mice, but data on mucosal immune responses induced by CpG ODN in other animals, especially in chickens, are scarce. Herein, we evaluated intranasal (IN) delivery of CpG ODN with newcastle disease (ND) vaccine (NDV) to determine its potential as a mucosal adjuvant to a commercial vaccine. CpG ODN augmented systemic (IgG in serum, T cell proliferation) and mucosal (IgA in intestinal washings and feces) immune responses against antigen. CpG ODN stimulated effectively both systemic and mucosal immune responses when delivered intranasally. Results from this study indicate that stimulatory CpG ODN is a potential effective mucosal adjuvant for the NDV in SPF chickens and may be applicable to husbandry animals.     

Immunogenicity of a Locally Produced Newcastle Disease I-2 Thermostable Vaccine in Chickens in Uganda

A locally-produced Newcastle disease (ND) I-2 thermostable vaccine of embryo-infective dose (EID50) 10(8.5) per ml was administered to 100 laboratory chickens in four test groups, each of 25 birds. It was given by the eye-drop method, in drinking water, in drinking water freshly medicated with levamisole, or using millet grains as a vaccine carrier. A fifth control group consisting of 25 birds received the heat-sensitive La Sota vaccine (EID50 10(9) per ml) by the eye-drop method. The immunological responses were monitored by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ND antibody technique using serum samples collected from 18 birds in each group at 3-week intervals for 3 months. The overall mean ND antibody log(10) titres and percentage positivities were 3.1, 88%; 2.9, 70%; 3.0, 83%; 3.2, 87% and 3.3, 87%, respectively. The use of water alone or medicated with levamisole for vaccine administration produced significantly lower ND antibody titres only in the first 3 weeks. The immunogenicity shown by the I-2 vaccine as a potential vaccine is discussed in relation to free-range poultry management conditions in Uganda.     

新城疫与传染性法氏囊病疫苗对雏鸡联合免疫的研究

将１１４只１１日龄海赛克斯褐公鸡随机分成５组：Ⅰ组为空白对照，Ⅱ组用新城疫（ＮＤ）弱毒苗和ＮＤ油佐剂灭活苗同时免疫，Ⅲ组用传染性法氏囊病（ＩＢＤ）地方毒株油佐剂灭活苗免疫，Ⅳ组用ＮＤ弱毒苗、ＮＤ油佐剂灭活苗、ＩＢＤ地方毒株油佐剂灭活苗同时免疫，Ⅴ组在Ⅳ组的基础上增加ＩＢＤ弱毒苗免疫。５组鸡分别隔离饲养，定期测定血清ＮＤＨＩ效价与ＩＢＤ琼扩效价。选择时机用强毒攻击，观察各组鸡的保护情况。结果：（１）Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组鸡均能很好地抵抗ＮＤＶ强毒的攻击，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组鸡无论对ＩＢＤＶ人工感染，还是自然感染，均有坚强的保护力；（２）ＩＢＤ地方毒株油佐剂灭活疫苗不干扰ＮＤ疫苗的免疫应答；（３）ＩＢＤ弱毒苗对ＮＤ疫苗的免疫应答有一定影响，在免疫初期能促进机体尽快对ＮＤ疫苗产生应答，但后期ＮＤ疫苗的ＨＩ抗体降低较快；（４）ＮＤ疫苗对ＩＢＤ疫苗的免疫效果无显著影响。作者提出，对雏鸡首免（无论有、无母源抗体）可采用ＮＤ弱毒苗＋ＮＤ油佐剂灭活苗＋ＩＢＤ（地方毒株）油佐剂灭活苗同时进行免疫，至少可以保护到上笼后或开产前免受ＮＤＶ和ＩＢＤＶ的感染，既简化了免疫程序，又可减少对鸡群的应激，值得推广应用。     

淫羊藿多糖对雏鸡免疫器官及新城疫疫苗免疫效果的影响

疫苗免疫接种是预防和控制传染病的重要措施,而佐剂是疫苗研究的重要组成部分.选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力.本研究将50、100、150 g/L等不同浓度的淫羊藿多糖与灭活的鸡新城疫病毒乳化,制备疫苗免疫雏鸡,通过检测抗体效价和免疫器官指数,探讨淫羊藿多糖作为免疫佐剂对鸡免疫功能的影响.结果表明,100 g/L和150 g/L的淫羊藿多糖作为免疫佐剂均可促进抗体的产生,提高脾脏指数,但对法氏囊指数的促进作用不明显.     

鸡新城疫类脂灭活疫苗的研究

用纯化的天然活性物质一杨树皮类脂作为免疫增强剂制备鸡新城疫类脂灭活疫苗,对该制品的保存条件、包被状况、安全性和免疫原性进行测定,结果表明,该制品性状稳定、安全有效、接种后无不良反应,保护率达95％以上,田间试验与扩大试验表明,该制品对处于产蛋高峰期的产蛋鸡注射不影响蛋鸡产蛋率,对雏鸡进行免疫不影响其生产性能。     

低血凝价新城疫LaSota株病毒免疫原性的研究

用血凝价分别为0、7、8的三批新城疫LaSota株病毒制备的油乳剂疫苗免疫60日龄蛋鸡,疫苗免疫10d后HI抗体水平平均值分别为3.9Log2、5.2Log2、5.9Log2,免疫后20dHI抗体水平升到高峰(4.0Log2、8.1Log2、7.9Log2),免疫60d后用剂量为100ELD50的同种毒攻击。结果表明,血凝价为0的新城疫LaSota株病毒抗原制备的油乳剂免疫效果较差,不能抵御病毒的攻击,但血凝价为7和8的两批病毒抗原能抵御病毒的攻击,并与血凝价为9的病毒抗原的免疫原性无显著差异。     

植物血凝素对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

试验对植物血凝素在艾维菌雏鸡新城疫疫苗免疫过程中的效果进行了研究.经过雏鸡新城疫母源抗体水平的检测后.选择抗体滴度约为2.5 log2的雏鸡90羽,随机分成3组,分别为溶剂对照组、单免组和PHA组.单免组和PHA组分别于7.21 d接种Ⅳ系LaSota弱毒疫苗,PHA组还同时肌肉注射植物血凝素0.01 mL/只.各组鸡于第1次免疫后的14.21,28.35,42.49和56d测定血液中鸡新城疫特异性抗体水平.结果显示,经2次免疫后PHA组鸡的抗体滴度比单免组和对照组鸡的高.差异显著(P<0.05),说明PHA能显著增强雏鸡对LaSota弱毒苗的免疫反应.     

猪脾转移因子提高LaSota株鸡新城疫弱毒疫苗的免疫保护率

旨在了解猪脾转移因子（TF）对新城疫病毒（NDV）弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量（10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份） LaSota疫苗株单独（单独免疫组）、LaSota疫苗株与TF联合（联合免疫组）免疫SPF鸡,14 d后以NDV F₄₈E₉强毒攻毒,同时设立对照组（非免疫攻毒）和空白组（非免疫非攻毒）,并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量（PD₅₀）如下：单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.000 8羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.000 5羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^-3羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著（P<0.01）;攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著（P<0.01）。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD₅₀;在抵抗NDV F₄₈E₉强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。