4猪种Nramp1基因第6内含子多态性研究

天然抗性巨噬蛋白(Nramp)基因是与人、鼠的一些病原微生物的易感性和抗性有关的重要候选基因。为了研究猪Nramp1基因的多态性,利用PCR-RFLP技术检测了杜洛克、大白猪、长白猪和合作猪共270头个体Nramp1基因第6内含子NdeⅠ酶切位点多态性。结果表明,4个猪种群共检测到3种基因型(AA、AB和BB),其中AB基因型为杜洛克、大白猪和长白猪的优势基因型;AA基因型为合作猪的优势基因型。经卡方适合性检测,杜洛克、合作猪和长白猪处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),大白猪处于Hardy-Weinberg不平衡状态。多态信息含量分析显示,Nramp1基因的第6内含子NdeⅠ酶切位点在各猪种表现出中度多态性。     

迪庆藏猪Nramp1基因第二内含子和第二外显子多态性位点遗传分析

以迪庆藏猪为研究对象,通过测序技术对Nramp1基因内含子2和外显子2进行多态性位点遗传分析。结果发现:迪庆藏猪在Nramp1基因内含子2上存在6个SNP位点,在外显子2上存在1个SNP;各SNPs均处于Hardy-Weinberg平衡,多态信息含量和杂合度均小于0.5。通过该研究了解了迪庆藏猪Nramp1基因的变异情况及群体遗传特征,为下一步开展抗病毒基因的遗传育种奠定了理论基础。     

含第1内含子的猪生长激素cDNA基因的构建

以 PCR方法扩增了猪生长激素 ( p GH)基因的第 1内含子 ,经测序表明 ,扩增的 p GH基因第 1内含子的序列与 Vize发表的序列存在 6个碱基的差异 ,同源性达 97.5%,说明 p GH基因第 1内含子具有多态性。此外 ,还发现此内含子存在有转录因子 ATF的结合位点。利用第 2外显子的 Hinf 位点 ,采用将 3个 DNA片段一步连接的方法 ,将扩增的第 1内含子插入到 p GHc DNA的正确位置上 ,从而构建出含第 1内含子的p GHc DNA。     

畜禽Nramp1基因抗病作用的研究进展

Nramp1基因作为影响畜禽抗病育种中抗病力的主要候选基因之一,其蛋白可抵抗多种胞内菌的侵染,从而提高畜禽抗病力。主要叙述Nramp1基因的结构特点和作用机理,综述了Nramp1基因与抗病性状的关系,并对其应用前景进行了展望。     

鸡Nramp1基因第9外显子的单核苷酸序列多态性分析

以文昌鸡、安卡鸡及藏鸡为试验动物,利用PCR-SSCP方法检测Nramp1基因部分区域的单核苷酸多态性(SNP)。结果发现,该区域存在2个突变,分别为C315G、C357T;共出现4种基因型,分别为GG、GT、TT及AA型,在文昌鸡和藏鸡群体内,T为优势等位基因,而安卡鸡中G为优势等位基因。3个群体该座位均处于哈代-温伯格平衡(PO.05),且3个群体间基因型分布无显著差异(P0.05)。     

家兔组织器官中Nramp1基因表达差异研究

本研究旨在检测家兔Nramp1基因mRNA在不同组织中的表达水平,为进一步阐明家兔Nramp1基因的生物学功能提供有用的方法和信息。根据GenBank中家兔Nramp1基因序列设计引物,采用基于SYBR GreenⅠ的Real-time PCR对家兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、盲肠、回肠、淋巴结、肌肉、脂肪和大脑中Nramp1表达水平进行了定量分析。结果表明,Nramp1基因在肺脏组织中表达量最高,胃组织中最低,而在肌肉和盲肠组织中不表达。研究结果说明家兔Nramp1表达具有一定组织器官特异性。     

荷斯坦牛免疫抗病相关Nramp1基因生物信息学分析

为研究牛的抗病能力,探究荷斯坦牛Nramp1基因所编码蛋白的结构与功能,本研究采用生物信息学分析的方法对荷斯坦牛Nramp1基因编码蛋白质的理化性质、疏水性/亲水性、信号肽跨膜区、跨膜结构域、N-糖基化位点和磷酸化位点、蛋白质二级结构、三级结构及蛋白质互作进行分析和预测.结果表明,荷斯坦牛Nramp1基因所编码蛋白全长...     

鸡Nramp1基因多态性与部分免疫指标相关性分析

随机选取同期孵化出雏的中国地方鸡种如皋鸡和引进隐性白羽鸡72只和55只,测定部分免疫性状。利用PCR-SSCP技术检测如皋鸡和隐性白羽鸡Nramp1基因第9外显子的多态性,并对不同基因型与免疫性状进行相关分析。结果表明:如皋鸡与隐性白羽鸡H/L、淋巴细胞转化率和IgM含量均差异显著(P<0.05)。如皋鸡AA型的H/L显著低于BB型和AB型(P<0.05),而AA型的淋巴细胞转化率和IgM含量显著高于BB型(P<0.05)。隐性白羽鸡各基因型对免疫指标的影响与如皋鸡的趋势相同。该研究结果初步显示,如皋鸡的综合免疫性能优于隐性白羽鸡,AA基因型的综合免疫性能优于AB型和BB型。     

猪Nramp1基因内含子6的SNP多态性分析

本研究以大白猪、长白猪和杜洛克猪为研究对象,通过构建DNA混合池并利用PCR产物直接测序的方法,对Nramp1基因内含子6的SNP多态性进行分析。结果发现,3个猪种在Nramp1基因内含子6中均有4个SNP位点,分别为C~(111)A、C~(225)T、G~(296)T和T~(297)G。基因频率估算结果表明,等位基因C、C、G和T分别是4个SNP位点的优势等位基因。本研究结果可为猪免疫疾病研究和抗病分子育种提供理论基础。     

牛Nramp1基因5′调控区序列的克隆及序列分析

采用LA—PCR技术扩增牛Nramp1基因2515bp的5′调控区序列,构建了重组克隆载体pEASY—T3-Nramp1,对阳性克隆进行了PCR扩增、限制性酶切鉴定、DNA测序及生物信息学分析。结果表明,试验成功构建了包含Nramp1基因5′调控区的重组质粒。经同源性比对发现,Nramp1基因5′调控区在不同物种中具有一定的保守性,在转录起始位点近端的启动子区域,牛与人、鼠、猪、羊的同源性分别是60．50％,58．52％,72．18％,81．95％。经预测．该调控区富含GR、SP1、c—Ets-1、NF—W2等转录因子结合住点。本研究为进一步确定牛Nramp1基因核心启动子区域及该基因的表达调控奠定了理论基础。     

福建黄兔Nramp1基因的克隆及序列分析

为掌握福建黄兔自然巨噬细胞抗性相关蛋白1(natural macro-phage resistant association protein one,Nramp1)基因的分子基础,应用RT-PCR和RACE技术从脾脏组织总RNA中克隆出福建黄兔Nramp1基因的cDNA序列并进行序列分析。结果显示:福建黄兔Nramp1克隆序列全长为2 180 bp(GenBank登录号KT943979),其中5′非翻译区103 bp,3′非翻译区443 bp,1 635 bp的开放阅渎框编码544个氨基酸;福建黄兔与人、猪、马、黄牛、水牛、绵羊、鹿和犬的核苷酸序列同源性分别为86.0%、84.7%、86.2%、84.9%、85.0%、85.4%、85.2%和85.9%。研究结果为进一步研究福建黄兔Nramp1基因的结构、表达及抗病育种等提供基础数据。     

鸡早期产蛋性能与ESR1基因内含子1多态性相关分析

为探寻鸡ESR1基因内含子1多态性与早期产蛋性能存在的关联性,采用DNA测序和PCR-SSCP技术对124只绿壳蛋鸡的基因型与性状进行相关性研究。结果表明,鸡ESR1基因In1片段中发现5种基因型:T1T1、T1T2、T2T2、T1T3和T3T3;试验群体处于高度多态,群体遗传偏离了Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。方差分析显示,各基因型个体间的早期产蛋性状指标达到了显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)水平,其中T1T3基因型个体性能处于优势,对该群体进行人为选择可提高产蛋性能。     

PCR一步法检测猪RYR1基因

在传统的PCR加酶切检测猪的RYR1基因基础上，设计能特异地扩增突变和正常序列的4条引物，根据扩增片段大小和条带多少可直接鉴别不同的RYR1基因型，从而建立了简单、廉价、准确地PCR一步检测猪应激综合征的新方法。     

藏猪MHC-DQB1第四内含子遗传多态性研究

为了研究藏猪MHC-DQB1第四内含子遗传多态性,根据CenBank中家猪SLA-DQB1基因的全序列(登录号为NC_010449.1)设计特异性引物,试验采用对藏猪、长白猪、杜洛克(共90头)在第四内含子扩增出的984 bp DNA特异性片段进行测序分析的方法.结果表明:第四内含子1169位有T→G的突变,1159位...     

军牧1号白猪FUT1基因M307位点多态性研究

肠毒素大肠杆菌F18是引起断奶仔猪腹泻和仔猪水肿病的主要病原菌,α-1岩藻糖转移酶基因FUT1是控制大肠杆菌F18侵染猪小肠的受体蛋白表达的候选基因。采用PCR—RFLP方法对军牧1号白猪FUTl基因M307核苷酸G／A突变位点的多态性进行分析。结果表明,军牧1号白猪FUT1基因M307位点存在3种基因型,分布趋势为AG〉AA〉GG,等位基因A的频率为0．6048,为优势等位基因。X^2适合性检验结果表明,军牧1号白猪FUT1基因在M307位点上呈Hardy—Weinberg平衡状态。研究结果揭示军牧1号白猪有抵抗肠毒素大肠杆菌F18的遗传基础,在军牧1号白猪群体中可以通过标记辅助的方法培育对大肠杆菌F18具有抗性的新品系。     

家鹅Myostatin基因内含子1序列分析

利用家鹅Myostatin基因第1外显子设计上游引物,第2外显子设计下游引物,两两配对形成4对引物,PCR法首次获得家鹅该基因内含子1全长2106bpDNA序列。该序列碱基组成中,A+T含量为61.21%,G+C为38.60%,另有4个碱基的序列未检出;比对发现其与家鸡的同源性高达82.7%。利用10个物种Myostatin内含子1构建的基因进化树表明,功能基因的非编码区能够为物种进化提供一定信息。     

4个品种绵羊Pit-1基因第5内含子和第6外显子多态性分析

采用PCR-SSCP技术研究绵羊生长发育候选基因Pit-1基因第5内含子和第6外显子序列在乌珠穆沁羊、杜泊羊、无角陶赛特羊和萨福克羊中的单核苷酸多态性.结果表明:Pit-1基因第5内含子和笫6外显子序列并不存在多态性,推断该位点与这4种羊的生长发育差异无关.     

南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1序列的测定及分析

利用GenBank中公布的牛、绵羊等动物FSHβ亚基基因序列设计引物,采用PCR法扩增并测定出南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1(in-1)全序列(GenBank登录号为AY838283)。山羊FSHβ基因内含子1全序列长641 bp,A、C、G、T4种碱基分别占35．73%、13．88%、17．47%、32．92%,A T (68．65%)的含量远高于G C(31．35%)的含量。不同物种间FSHβ基因序列相似性的变异范围为24．1%～97．3%,分歧度则为2．6%～85．7%。利用FSHβ亚基基因内含子1序列进行的物种间系统发育分析结果与实际的物种演化顺序一致,表明它可用于物种间的系统发育分析。     

山羊天然抵抗力相关巨噬细胞蛋白基因(Nramp 1)的克隆及其在羊胎儿成纤维细胞中的表达和鉴定

Nramp 1(Slclla 1)表达于晚期吞噬溶酶体中,能够抵抗多种细胞内病原体的感染.Nramp 1主要是通过调节巨噬细胞的免疫功能和细胞铁代谢发挥抗菌作用.为了研究山羊天然抵抗力相关巨噬细胞蛋白的功能,寻找一种在山羊中抵抗胞内菌感染的新途径.通过RT-PCR的方法从山羊脾脏中克隆Nramp 1基因,连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,命名为pcDNA3.1(+)-Nramp1.取60 d小尾寒羊胎儿,建立胎儿成纤维细胞系,将线性化的载体转染胎儿成纤维细胞,获得稳定转染的细胞系,在基因组和转录水平分别对转基因细胞系进行鉴定,结果显示外源基因成功整合到基因组中并且在转录水平检测到基因表达,最后获得阳性转基因细胞系2株,为Nramp1蛋白的功能研究和抗菌试验奠定了基础.     

延黄牛ALDH1A1基因内含子4多态性及其与肉用性状的相关性分析

试验旨在研究乙醛脱氢酶1A1（acetaldehyde dehydrogenase 1A1，ALDH1A1）基因内含子4多态性及其对延黄牛肉用性状的影响。选取99头18月龄延黄牛母牛，采用PCR扩增产物Sanger直接测序法测定99头延黄牛ALDH1A1基因内含子4的单核苷酸多态性（SNP），运用SPSS 19.0软件分析ALDH1A1基因内含子4 SNP与延黄牛肉用性状（体高、体斜长、十字部高、胸围、腹围、管围、体重、背膘厚、眼肌面积和肌内脂肪）的关联性。结果显示，延黄牛ALDH1A1基因内含子4存在C/T突变位点，共发现3种基因型：TT、TC和CC，2种等位基因：T和C，其中TC为优势等位基因型，C为优势等位基因。卡方适合性检验结果发现，该SNP在延黄牛群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。群体遗传参数分析发现，该突变位点的杂合度（He）相对较低，表明其在延黄牛群体中的变异较小，该位点属于中度多态（0.250.05）。结果表明，ALDH1A1基因内含子4在延黄牛中存在突变，能否作为延黄牛肉用性状的遗传标记有待于扩大样本数量进一步研究。