鸡柔嫩艾美耳球虫YL株多次传代后的致病性研究

为研究多次传代后的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)YL株的致病性,分别以不同剂量的36代次柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊感染7日龄雏鸡,通过临床症状、死亡率、血便程度、潜隐期、盲肠病变、平均增重及每克粪便卵囊数(OPG)对其致病性进行评价.结果显示,不同剂量孢子化卵囊感染雏鸡均在感染后3d～4d出现血便,球...     

毒害艾美耳球虫山西株的分离和鉴定

为了鉴定造成太谷区某鸡场57日龄蛋鸡死亡的鸡球虫种类，明确其生物学特性，本试验采用饱和食盐水漂浮法和单卵囊分离技术从病死鸡粪便中分离纯化得到1株球虫；将分离球虫口服接种SPF鸡，观察并测定卵囊最短孢子化时间、裂殖体寄生部位和大小、卵囊寄生部位和大小、潜隐期、死亡率、增重情况、肠道病变记分等指标，了解该虫株的生物学特点并初步鉴定其类型，随后采用序列特征性扩增区域(SCAR)标记技术进一步确定虫株类型。结果显示，分离虫株的裂殖体寄生于空肠，平均大小为(63.17±7.66)μm×(47.12±6.91)μm,卵囊仅盲肠可见，平均大小为(19.92±0.20)μm×(19.27±0.11)μm,虫株潜隐期为152 h,最短孢子化时间为18 h,接种5.0×10⁴个卵囊/羽和1.1×10⁵个卵囊/羽的分离虫株可分别造成40%和50%的实验鸡死亡，相对增重率下降至31.61%和20.87%,病变记分分别达到3.9和4.0;SCAR标记扩增显示，分离虫株与毒害艾美耳球虫(E.necatrix)的同源性达97.1%,命名为E.necatrix-CN-SX-...     

斯氏艾美耳球虫四川株生物学特性研究

为了解斯氏艾美耳球虫四川株致病性、免疫原性等生物学特性,为后续免疫和防控等研究提供参考。将45只36日龄幼兔随机分为9组,第1组为空白对照组,第2组～第5组为致病性试验组,于50日龄每只兔分别经口感染1×10~4、5×10~4、1×10~5、2×10~5个孢子化卵囊;第6组～第9组为免疫原性试验组,于36日龄每只兔分别口服接种5×10~2、5×10~3、1×10~4、5×10~4个孢子化卵囊,14 d后给予2×10~5个孢子化卵囊的感染量。测定最小潜隐期和排卵高峰并以临床症状、卵囊排出量、相对增重、肝指数、肝脏病理变化作为评价指标。分离培养斯氏艾美耳球虫四川株卵囊,测定其最短孢子化时间及卵囊大小。结果表明,斯氏艾美耳球虫四川株最小潜隐期是13 d,排卵高峰在感染后22 d～23 d,孢子化卵囊的平均大小为36.2μm(28.2μm～38.1μm)×19.9μm(17.80μm～22.3μm),卵囊指数为1.81,27℃恒温培养最短孢子化时间为41 h。致病性试验组与空白对照组肝指数、平均增重、相对增重率差异显著(P0.05);免疫原性试验组与攻毒对照组肝指数、平均增重、相对增重率差异不显著(P0.05)。斯氏艾美耳球虫四川株致病性较强,低剂量感染就能显著降低增重并引起明显病变,但其免疫原性较差。     

鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究

给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2~7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以1.2×105个/鸡的同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、病变计分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果表明,孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种后对鸡胚的孵化率无明显影响,所有接种组在出雏后2~7日龄间均能检获后代卵囊,攻虫后各免疫组的相对增重率由攻虫对照的38%~42.9%提高到73.2%~90.5%,病变计分减少率达50%~74.9%,相对卵囊产量为攻虫对照组的28.1%~60.2%,表明以一定剂量的E.necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种鸡胚,可诱导鸡在出雏后笼养条件下对同源艾美耳球虫的免疫保护力;比较不同剂量、不同胚龄的免疫效果,发现在试验设定条件下于17日胚龄接种8×104个子孢子/胚的效果最好。     

柔嫩艾美耳球虫石家庄株的生物学特性与抗药性研究

用5×104个柔嫩艾美耳球虫石家庄株孢子化卵囊感染14日龄雏鸡,对卵囊潜隐期、最早孢子化时间、形态及大小等生物学特性进行了测定。并以最适抗球虫活性百分率（POAA）、病变记分减少率（RLS）、相对卵囊产量（ROP）和抗球虫指数（ACI）为指标,检测了常用抗球虫药对其敏感性。结果表明：（1）该虫株寄生于盲肠,呈宽卵圆形,壁光滑,分2层,多数可见极粒。卵囊大小范围为（19.68～27.76）μm×（15.21～23.99）μm,平均大小为（23.41±2.22）μm×（19.34±2.27）μm,卵囊指数1.21。孢子囊大小范围为（8.30～14.28）μm×（4.05～9.15）μm,平均大小为（11.69±1.53）μm×（6.74±1.26）μm,孢子囊指数1.73。潜隐期和最短孢子化时间分别为133h和20h。（2）该虫株对马杜霉素、克球粉与球敌呈完全抗药性;对瑞冠球呈轻度抗药性;而对氨丙啉和金三特无抗药性。     

鸡胚接种柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫活卵囊的免疫保护试验

给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。     

接种不同数量柔嫩艾美耳球虫卵囊对雏鸡的致病作用

以15日龄罗曼蛋雏为对象,研究接种不同剂量柔嫩艾美球耳虫(E.tenella)卵囊对雏鸡的致病作用。试验共设4个组,其中3个球虫卵囊感染组和1个非感染对照组,球虫感染组鸡只分别接种E.tenella孢子化卵囊1×104、5×104、8×104个/只。结果显示,感染1×104、5×104、8×104个/只组的平均血便记分分别为0.750、1.825、2.500,致死率分别为10%、30%、60%,盲肠病变值分别为13.0、22.0、28.0,平均增重率分别为75%、56%、49%。试验表明,E.tenella卵囊具有很强的感染性,致病作用与其数量有关。     

鸡柔嫩艾美耳球虫生殖细胞特异性蛋白的免疫保护效果评价

为探讨鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)生殖细胞特异性蛋白(HAP2)对球虫感染的免疫保护作用,将HAP2重组蛋白(rEtHAP2)加弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂免疫雏鸡后,用E.tenella孢子化卵囊感染雏鸡,以雏鸡增重效果、卵囊排出量、肠道病变记分、血清抗体水平、淋巴细胞转化水平,评估rEtHAP...     

堆型艾美耳球虫pcDNA3-3-1E重组表达质粒的免疫保护性

将堆型艾美耳球虫保定株裂殖子3-1E基因,插入到真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建重组表达质粒pcDNA-3-1E,用碱裂解法大量提取重组表达质粒,纯化后免疫接种1周龄雏鸡。分别设高（100μg）、中（50μg）、低（25μg）3个剂量组,同时设活卵囊接种组、非免疫感染组和健康对照组。在7日龄时首免,14日龄加强免疫,1周后用2.5×105个E.acervulina保定株球虫孢子化卵囊进行攻毒试验。结果显示50μg的剂量可使试验鸡产生较强的抗球虫效果,攻虫鸡的卵囊产量下降67.67%,肠道病变记分降低66.96%,并使鸡的相对增重率达88.36%,ACI值为176.06。     

重组鸡干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响

取AA肉鸡,在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊进行首免和二免,并同时肌肉注射5 000 U重组鸡γ干扰素(rCh IFN-γ)后,于21日龄以同源E.tenella攻虫。试验结果表明,rCh IFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降,降低OPG值和肠道病变记分,提高抗球虫指数(AC I);同时还发现,rCh IFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度(=α0.05)。由此表明,rCh IFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤,促进肠道的吸收功能,进而减轻球虫病所造成的增重损失,对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。     

益生菌对柔嫩艾美耳球虫感染鸡保护效果研究

接种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊和益生菌,以血便记分、存活率、体增重和抗球虫指数为指标,探讨益生菌的抗球虫活性。在接种第7天后检测结果显示,益生菌抗球虫指数为137,能降低球虫感染鸡的血便记分,减轻鸡盲肠组织病理学结构的损伤,提高球虫感染鸡体增重和存活率,提示益生菌可以辅助应用于临床球虫病的防治。     

和缓艾美球虫与早熟艾美球虫的分离与鉴定

采用单卵囊分离技术,获得了2株纯种球虫,鉴定为和缓艾美球虫与早熟艾美球虫.主要鉴定指标:和缓艾美球虫:卵囊呈球形或亚球型,囊壁光滑无色,卵囊内有1极体,无内、外残余体;测100个卵囊的平均大小为(14.96±1.38μm×(13.65±1.20)μm,测100个孢予囊的平均大小为(9.23±1.20)μm×(5.29±0.53)μm;潜在期96 h,最短孢子化时间15.5 h;虫体主要寄生于小肠下段.早熟艾美球虫:卵囊呈椭圆形或卵圆形,有极体,无内、外残余体;测100个卵囊的平均大小为(19.21±2.10)μm×(16.40±1.75)μm,测100个孢子囊的平均大小为(10.62±0.90)μm×(6.85±0.75)μm;潜在期84 h,最短孢子化时间20 h;虫体主要寄生于鸡十二指肠与空肠前段.分别用此2株纯种球虫的孢子化卵囊20×10<'4>、60×10<'4>个感染30日龄黄羽肉鸡各10只,另设1个不感染对照组,结果感染2株纯种球虫的鸡均未发生死亡,但平均增重与不感染对照组差异显著(P<0.05),感染和缓艾美球虫的2组鸡肠道均出现可见病变,感染早熟艾美球虫的2组鸡肠道病变计分为零.     

重组鸡γ干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响

取AA肉鸡，在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）孢子化卵囊进行首免和二免，并同时肌肉注射5000U重组鸡γ干扰素（rChIFN-γ）后，于21日龄以同源E．tenella攻虫。试验结果表明，rChIFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降，降低OPG值和肠道病变记分，提高抗球虫指数（ACI）；同时还发现，rChIFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度（α=0．05）。由此表明，rChIFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤，促进肠道的吸收功能，进而减轻球虫病所造成的增重损失，对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。     

柔嫩艾美球虫不同剂量感染对鸡的影响及抗攻击试验研究

挑选120羽体况相近的15日龄罗斯(Ross)公鸡,均分为5组,用柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)实验室保种天山株,分50、500、5000、50000个孢子化卵囊进行感染,另设不感染球虫组。观察用不同剂量感染,对鸡生长的影响程度;并于感染后96小时起,收集各组每天排出的粪便,进行虫卵计数;感染后13天,各组称重,并抽取6羽剖杀,进行盲肠病变记分。剩余鸡进行抗攻击试验,每羽攻击10万个孢子化卵囊,攻击后8天剖杀,结束试验。结果为:①感染50、500个卵囊的组,鸡平均增重与不感染组无差异;感染5000、50000个卵囊的组,增重则明显低于不感染组(P<0.05);各组盲肠病变和血便记分随感染量增加而增高。②各组在感染后5天之内的粪便中均未检出卵囊;感染50、500个卵囊组,在感染后6～7天的粪便中查出卵囊;感染5000、50000个卵囊组,则在5～6天的粪便中发现卵囊;50000个卵囊组,排卵高峰集中在感染后6～7天(占排出总量的62.23％),而另三个组的排卵高峰不集中;所有感染组在第13天的粪便中,卵囊量已降到很低(仅占总量的0.07～7.37％)。③各组的抗攻击能力随感染剂量增加而提高;各感染攻击组的平均增重均与不感染攻击组差异达极显著(P<0.01),感染5000个卵囊攻击组的增重最好;各组的盲肠卵囊计数、血便记分、盲肠病变记分均随原感染量的增加而降低。     

毒害艾美球虫纯种分离的初步鉴定和致病性研究

采用从寄生部位分离和单卵囊感染技术,对现场采集的鸡球虫混合种进行单种纯化,获得了毒害艾美球虫(Eimeria necatrix)。该种卵囊呈卵圆形,经测240个卵囊,平均为19.06±1.54×16.50±1.26 μm,形状指数1.16。测120个孢子囊,平均为11.27±0.70×6.21±0.51μm。无卵囊残体和孢子囊残体,未观察到卵膜孔和极帽。最短孢予化时间为19小时,感染后最早排出时间143小时,最大裂殖体68.75×66.25μm。用此卵囊1万、5万、10万和20万个分别感染10日龄伊莎公鸡,结果感染5～20万个卵囊组的死亡率为41.67～50.00％,感染组的肠道病变记分为1.33、3.42、3.67和3.83,其平均增重与不感染对照组差异极显著(P<0.01)。E.necatrix对鸡致病性很强,在生产上需高度重视,做好预防工作。     

妥曲珠利对柔嫩艾美耳球虫作用峰期的初步研究

E．tenella球虫又称盲肠球虫,主要侵害鸡的盲肠,一般感染15～35日龄的雏鸡。一旦鸡吞食了E．tenella球虫卵囊,由于球虫的高繁殖性能,随之有众多的卵囊排出并污染环境,导致球虫病暴发。E．tenella球虫发育过程包括3个生殖阶段,孢子生殖在外界环境中进行,其它两种生殖阶段在鸡体内完成。随鸡粪便排到外界环境中的球虫卵囊称为未孢子化卵囊,不具有感染力。     

兔肠艾美耳球虫广西株分离鉴定及致病性研究

采用单卵囊分离技术,从广西壮族自治区玉林市某兔场兔球虫混合感染样品中获得1株球虫,用其接种无球虫兔进行增殖,根据其形态、大小等特征和PCR鉴定确定其种类,并对其生物学特性和致病性进行研究。结果显示,该虫株寄生于小肠中后段,卵囊呈梨形,孢子化后有卵囊残体,潜隐期为198h,孢子化时间为36h。通过随机测定100个孢子化卵囊后发现,孢子化卵囊的大小为(26.7~34.5)μm×(16.9~24.1)μm,形状指数1.41~1.55。对照相关文献并进行PCR鉴定,确定该虫株为纯种肠艾美耳球虫。当兔感染3×103个/只以上该虫株孢子化卵囊后,出现精神沉郁,排出干粪或稀粪等球虫病临床症状或死亡,且增重显著低于空白对照组。感染3×103个/只该虫株孢子化卵囊后第11天剖检,小肠中后段可见明显的肠壁增厚,褶皱增多并伴有出血;病理切片可见空肠黏膜充血、出血,浆液渗出,黏膜层见大量典型虫体。结果表明该虫株具有强致病性。     

鸡巨型艾美耳球虫早熟株免疫效果试验

为确定使雏鸡获得良好免疫效果的最小巨型艾美耳球虫(E.maxima)早熟株接种量,分别于4日龄对免疫攻毒组以不同剂量进行首免,11日龄以首免2倍剂量对二次免疫攻毒组鸡进行二免。一次或二次免疫后7 d或10 d用同源亲本株进行攻毒,检测免疫攻毒鸡相对增重率、卵囊减少率、病变记分减少率(RLS)和抗球虫指数(ACI)。结果显示,一次免疫剂量≥400个孢子化卵囊/只或两次免疫的一免剂量和二免剂量≥100个孢子化卵囊/只和200个孢子化卵囊/只时,各免疫攻毒鸡的相对增重率≥85%,RLS≥70%,卵囊减少率≥75%,相对保护率≥90%,ACI≥170,均达到良好免疫效果。故将E.maxima早熟株的一次免疫最小免疫剂量定为400个孢子化卵囊/只,两次免疫最小免疫剂量定为一免100个孢子化卵囊/只和二免200个孢子化卵囊/只。     

斯氏艾美耳球虫阿拉尔株致病性和免疫原性分析

对分离自阿拉尔的1株斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai)进行了致病性与免疫原性分析。试验共分5组,4个试验组每只兔分别口服感染1.0×103,5.0×103,5.0×104和1.5×105个孢子化卵囊;感染后14 d对1.0×103和5.0×103剂量组的剩余兔以2.5×105个孢子化卵囊攻毒,用0～5分肝脏平均病变记分、肝重指数和每克粪便的平均虫卵数(OPG)测定致病性及其免疫原性。结果显示:低剂量感染可引起轻微病变,5.0×104个孢子化卵囊感染即可表现出明显的致病作用,但免疫原性试验表明其免疫原性较弱。     

亚硝基谷胱甘肽对孢子化卵囊、孢子囊活力及致病力的影响

以亚硝基谷胱甘肽(S-nitroso-glutathione,GSNO)处理柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)卵囊和孢子囊,通过检测子孢子的脱囊情况以及卵囊和孢子囊的致病力来探讨GSNO对E.tenella卵囊和孢子囊活力的影响。体外脱囊试验结果表明,GSNO处理孢子囊的脱囊率只有1.01%~1.48%,而GSNO处理的孢子化卵囊的脱囊率为45.73%~63.90%。接种试验表明,各接种组鸡均发生了明显的临床球虫病,但与攻毒对照组相比,只有GSNO处理的孢子囊组鸡的发病情况有所减轻,这说明GSNO能明显抑制孢子囊的脱囊,并能在一定程度上减轻其致病力,而对孢子化卵囊无明显抑制作用。