大麦β-1,3-葡聚糖酶基因表达载体的构建及其对马铃薯的遗传转化

在获得经大麦白粉病诱导的β－１,３－葡聚糖酶ｃＤＮＡ基因的基础上,构建了该基因的植物表达载体ｐＢｉｎｈ－Ｇｌｕ,采用农杆菌介导的方法将其转化进入马铃薯,获得了经含有卡那霉素的选择培养基筛选的转基植株,通过ＰＣＲ扩增验证,马铃薯基因组中含有大麦的β－１,３－葡聚糖酶ｃＤＮＡ基因。     

β葡聚糖酶高产菌Bacillus subtilis 9126—6的发酵性能研究

对β－葡聚糖酶（ＥＣ３．２，１．７３）高产菌Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ９１２６－６发酵优化的实验结果表明，最佳培养基配比是：大麦粉７％，玉米粉３％，豆饼粉５％。在１Ｌ发酵罐中保持温度３５－３７℃、ｐＨ７．０－７．２。搅拌通风培养３ｄ，发酵液的酶活力高达１５４Ｕ／ｍｌ．作者还对大麦β－葡聚糖对９１２６－６β－葡聚糖酶产生的诱导性机制做了初步探讨。     

品种与环境对西班牙大麦的β—葡聚糖含量和酸性提取液粘度的影响

本文研究了连续三年种在七个地区的１０个二棱和六棱西班牙大麦品种的酸性提液粘度和β葡聚糖含量，大麦粘度值变化在２．４～２４．８ｃｓｔ间，平均值为６．４ｃｓｔ。经高效液相层析（ＨＰＬＣ）测定。大麦β－葡聚糖平均含量为３．５％，变幅为１．９～５．５％，不同品种，地区和年份之间大麦β－葡聚糖含量和酸性提取液粘度都有极显著的差异，冬大麦的β－葡聚糖和粘度值均高于春大麦，品种Ｂｅｋａ是粘度值和β－葡聚糖含量都     

β—1,3—葡聚糖酶基因植物表达载体的构建

采用ＰＣＲ的方法,对严自大麦ｃＤＮＡ克隆的β－１,３－葡聚糖酶基因进行了扩增,在此基因的５’及３’端分别加入了克隆所需的ＸｂａＩ和ＳｓｔＩ限性酶切位点,定向克隆到经改造的质粒载体ｐＢｉｎｈ中,获得了含有β－１,３－葡聚糖酶基因的植物表达载体ｐＢｉｎｈ－Ｇｌｕ。     

地衣芽孢杆菌β-1,3-1,4葡聚糖酶基因的克隆及序列分析

β-葡聚糖是以β-1,3和β-1,4混合糖苷键连接形成的D-葡萄糖聚合物,主要存在于单子叶禾本科谷实中.有些微生物会产生降解β-葡聚糖的β-1,3-1,4-葡聚糖酶.将β-葡聚糖酶基因在食品级宿主菌中表达对动物饲料工业具有十分重要的应用价值.实验以地衣芽孢杆菌为材料,提取其总DNA,扩增其β-1,3-1,4葡聚糖酶基因序列,将该片段克隆到pMD 19-T载体进行测序,并将测序结果进行BLAST比对.发现其与GenBank中的两段基因序列具有较高的同源性.     

β─葡聚糖酶高产菌Bacillus subtilis 9126—6的发酵性能研究

对β—葡聚糖酶（ＥＣ３．２．１．７３）高产菌Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ９１２６—６发酵优化的实验结果表明，最佳培养基配比是：大麦份７％，玉米粉３％，豆饼粉５％．在１Ｌ发酵罐中保持温度３５—３７℃、ｐＨ７．０～７．２，搅拌通风培养３ｄ．发酵液的酶活力高达１５４Ｕ／ｍｌ．作者还对大麦β—葡聚糖对９１２６—６β—葡聚糖酶产生的诱导性机制做了初步探讨．     

Bacillus subtilis LC-9产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质与催化特性研究

[目的]系统研究Bacillus subtilis LC-9所产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质,探讨其在催化应用上的可行性。[方法]采用两步阴离子交换层析法对B.subtilis LC-9发酵液中的β-1,3-1,4-葡聚糖酶进行纯化,用SDS-PAGE检测其纯度,研究纯酶的酶学性质及该酶对β-葡聚糖和地衣多糖的降解特性,并采用TLC法检测其水解液中糖的成分。[结果]从自行筛选的糖苷酶产生菌B.subtilis LC-9的发酵液中经两步纯化,得到电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,其比活力达3 502 U/mg,表观分子量为28 kDa;酶的最适反应pH和温度分别为6.5和45℃,且在45℃下稳定;该酶催化地衣多糖的Km值和Vmax分别为4.13 mg/ml和1 238μmol/min/mg,催化大麦β-葡聚糖的Km值和Vmax分别为3.84 mg/ml和1 427μmol/min/mg;该酶降解大麦β-葡聚糖产生寡聚糖,最终产物主要为三糖和四糖,而降解地衣多糖终产物主要为三糖。[结论]从Bacillus subtilis LC-9发酵液中纯化获得了电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,性质研究表明该酶是专一性的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,有望用于啤酒、饲料等领域。     

大麦β-葡聚糖的研究现状与展望

大麦β-葡聚糖是大麦籽粒细胞壁中的一种多糖,大麦中β-葡聚糖含量在2％～9％之间.在制麦芽和酿造啤酒过程中,β-葡聚糖含量过高,不能完全降解,会使麦汁黏度增加,降低啤酒品质.大麦在饲用过程中,β-葡聚糖含量过高,会降低营养吸收率,是抗营养因子.β-葡聚糖具有降低胆固醇、降血脂、调节血糖、提高免疫力等保健功能,可提取加工保健品.大麦β-葡聚糖含量受品种基因型和环境因素共同影响,我国西藏青稞β-葡聚糖含量在各栽培大麦中最高.大麦成熟期间,高温和干旱条件能促进大麦β-葡聚糖的合成.     

高产β－葡聚精酶菌种分离方法的改进及其新菌种鉴定

根据刚果红与β－１，３－１，４－葡聚糖紧密结合的特性，采用改进的方法筛选β－葡聚糖酶产生菌。凡菌落周围刚果红褪色的透明圈大者，其酶活性亦高。从１２个土壤样品分离的上百个菌株中筛选，获得一株高产β－葡聚糖酶活性的菌株Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ９１２６，它在刚果红平皿上生长菌落周围的透明圈很大，其产酶活力高达５７Ｕ／ｍｌ．     

蛋白质含量与大麦及麦芽品质指标间的相关趋势分析

为了探索大麦蛋白质含量对其品质指标以及麦芽理化指标的影响程度,选取甘啤系列大麦品种甘啤3号、甘啤4号、甘啤5号、GM2为试验材料,用国家标准方法对大麦和相应麦芽进行品质检测,并对不同蛋白质含量的大麦品种及其相应麦芽的理化指标进行相关趋势分析。结果表明：参试品种中,大麦的蛋白质含量与其淀粉含量、水敏性、β－葡聚糖含量、多酚物质含量都有相关关系;随蛋白质含量的增加,淀粉、多酚含量呈降低趋势,水敏性、β－葡聚糖含量呈增长趋势;参试材料中,大麦的蛋白质含量与其相应的麦芽品质指标之间也存在着一定的相关性,随着蛋白质含量的增加,其脆度、微粉浸出率、α－氨基氮含量、库值呈现降低趋势,黏度、β－葡聚糖呈增长趋势。     

氮、钾肥用量与配比对大麦籽粒品质的影响

研究了氮肥和锌肥运筹对大麦籽粒品质的影响。结果表明,后期施用氮肥显著提高大麦籽粒β葡聚糖含量,而钾肥运筹对大麦籽粒β葡聚糖含量的影响不大;粒重随穗期氮肥用量比例减少而增加,钾肥运筹对粒重的影响因氮肥的用量和比例而异;籽粒蛋白质含量随氮肥用量和后期比例的增加而提高;β－葡聚糖含量与蛋白质呈显著正相关,而与千粒重呈极显著负相关。     

中国大麦β-葡聚糖含量的品种和环境变异研究

 分析了来自全国不同地区和澳大利亚及加拿大的一些大麦基因型的β-葡聚糖含量,并在我国冬大麦区设置8个试验点,分析10个大麦品种在各点种植两年的β-葡聚糖含量。结果表明,我国西藏和新疆大麦的β-葡聚糖含量总体水平较高,特别是西藏具有高达8％以上的基因型,适合用于保健食品或药物的开发。我国冬麦区目前栽培的大麦品种的β-葡聚糖含量与澳大利亚及加拿大的啤用大麦类似,部分品种在杭州种植后β-葡聚糖含量明显降低,平均值显著低于原产地种子。10个大麦品种在8个试点种植,β-葡聚糖含量在品种间、地区间以及年度间均存在着显著差异。两年平均,秀麦3号和港啤1号分别为β-葡聚糖含量最高和最低的品种,泰安和杭州是β-葡聚糖含量最高和最低的试点。AMMI模型分析表明,品种与环境之间的互作效应两年试验均达极显著水平,且这种互作效应因品种而异,启示出特定地区合理选用品种在改变大麦β-葡聚糖含量上有积极意义。     

高产β—葡聚糖酶菌种分离方法的改进及其新菌种鉴定

根据刚果红与β－１，３－１，４－葡降糖紧密结合的特性，采用改进的方法筛选β－葡聚糖酶产生菌。凡菌落周围刚果红裉然的透明圈大，其酶酶活性亦高，从１２个土壤样品分离的上百个菌株中筛选，获得一株高产β－葡聚糖酶活性的菌株Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｉｌｉｓ ９１２６，它在刚果红平皿上生长菌落周围的透明圈很大，其产酶活力高达５７Ｕ／ｍｌ。     

高产β-葡聚糖酶菌株初步筛选与鉴定

利用B-葡聚糖酶能够降解含刚果红染料的高分子量大麦β-葡聚糖从而使培养基产生透明圈的特点,对采集的土样进行了分离纯化,得到一株高产B-葡聚糖酶的菌株并做了初步鉴定.结果表明,筛选到1株高产β-葡聚糖酶的菌株,命名为ZJ2132,其酶活可达142.36 U/mL.通过初步鉴定,该菌株为木霉属中的Trchodermasp....     

磷酸盐诱导黄瓜系统抗病中主要酶活性的变化

黄瓜幼苗第２叶喷施７５ｍｍｏｌ／ＬＫ２ＨＰＯ４溶液之后,叶片中几丁质酶、β－１,３－葡聚糖酶和过氧化物酶活性明显升高,并诱导第３,４,５叶片中几丁质酶、β－１,３－葡聚糖酶活性增强,从而抵制以后炭疽菌（Ｃｏｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｌａｇｅｎａｒｉｕｍ）的侵入。但过氧化物酶活性仅在叶片受到直接诱导时才增强。上述结果表明,几丁质酶、β－１,３－葡聚糖酶活性与诱导系统抗病直接相关,而过氧化物酶活性仅与局部诱发抗病有关。喷施７５ｍｍｏｌ／ＬＫ２ＨＰＯ４溶液能安全、有效地诱导黄瓜抵抗炭疽病。     

里氏木霉β-葡聚糖酶稳定性研究

研究了里木霉GXCβ－莆聚糖酶的稳定性。结果发现：β－葡聚糖酶粗酶液的稳定必于酶液,两者的耐热温度分别为70℃和60℃,其pH稳定范围都为3．0－5．0。Cu^2 ,Mn^2 和Fe^3 对酶有抑制作用,Zn^2 和Co^2 有激活作用,其他离子Ca^2 ,Mg^2 ,Fe^2 和K^ 在不同浓度条件下对β－葡聚糖酶有不同的作用。胰蛋白酶和胃蛋白酶对β－葡聚糖酶活力无显著影响。     

小麦与褐斑病菌之间的分子互作：Ⅰ.受病原菌诱导的寄主PR…

采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，对小麦抗，感品系在接种褐斑病菌８６－１２４小种后８，１６，２４，３２，４０，４８，５６，６４，７２小时叶片病原相关蛋白（ＰＲ）基因在ｍＲＮＡ水平上的表达动态进行了研究。结果表明，小麦受到病原菌的浸染后，β－１，３－葡聚糖酶，几丁酶，苯丙氨酸解氨酶等病原相关蛋白基因在抗，感品系内均被诱导表达具有大体相似的动态规律。β－１，３－葡聚糖酶（ＰＲ－２）基因在接种病原菌ｐｔｒ后     

巴西橡胶树胶乳黄色体中的病原相关蛋白

巴西橡胶树胶乳的黄色体内同时存在着两类典型的病原相关蛋白，几丁酶／溶菌酶和β－１．３－葡聚糖酶。割胶这种持续的机械创伤产生的乙烯可在ｍＲＮＡ的转录水平上大量诱导胶乳几丁酶／溶菌酶和β－１．３－葡聚糖酶的合成。它们不仅是橡胶树防御潜在病原微生物的抗病系统的重要组成部分，而且参加了胶乳的凝固过程，与橡胶树的排胶和产量具有密切的关系。     

烟草品种Xanthi NN碱性β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆与生物信息学分析

烟草碱性β－1,3－葡聚糖酶具有较强的抗真菌病害等作用。本研究根据烟草Samsun与抗真菌作用有关的碱性8—1,3－葡聚糖酶基因序列设计引物,以烟草（Nicotiana tabacum）品种Xanthi NN基因组DNA为模板,进行PCR扩增,后将扩增产物与pUC57－T载体重组,再以该重组体转化大肠杆菌DHSα,在对阳性克隆进行鉴定后测序,并对其编码酶蛋白进行了一级、二级、三级结构及蛋白质同源性比较等生物信息学分析。研究结果表明,该基因全长1868bp,包含2个外显子和1个内含子;除终止密码子外,共编码359个氨基酸（GenBank登录号：EU867448）。该酶分子量为28．4kDa,pI为9．72,是一个碱性蛋白;具有多个螺旋、转角、延伸链和无规卷曲等二级结构,其中α－螺旋占35．65％,β－转角占5．57％,延伸链占19．22％,无规卷曲占39．55％;三级结构同源建模预测显示,它与香蕉（Musa supientum）β－1,3－葡聚糖酶（PDB number 2cygA）具有60％的一致性;推测该酶蛋白与颠茄（Atropa belladonna）、马铃薯（Solanum tuberosum）等茄科植物的β－1,3－葡聚糖酶编码序列同源性分别达到89％和81％。本研究结果为进一步开展烟草抗真菌的β—1,3－葡聚糖酶的基因工程研究奠定了重要基础。     

重新认识大麦的食用价值

本文根据国内外最新研究成果，论述了大麦的β－葡聚糖、生育三烯醇、碳水化合物和类脂、蛋白质和氨基酸以及可溶性食物纤维等成份的营养和保健价值，认为大麦食用价值高，发展前景远大。提出开发我国食用大麦和改进食用方法新途径，并对裸大麦食品糌粑、珠珠麦和大麦片的加工制造提出改进意见。