毒害艾美耳球虫纯种卵囊收集鉴定及致病性测定

鸡球虫是养鸡业的一大疾病 ,严重阻碍着我国养鸡业的发展。在各种鸡病中 ,球虫病的发生率最高 ,占 1 /6～ 1 /5。Rose和 Long( 1 980 )报道英国养禽业因球虫病每年损失 5 5 0万英镑 ,其中一半是药物费用 ;在美国损失可能达到 5 0 0 0万英镑。 Rose和Long( 1 985 )保守地估计全世界养禽业每年球虫造成的损失为 5亿美元左右 ,其中 2 .5亿美元用于药费支出 [1]。中国是养鸡大国 ,养鸡数量居世界之首 ,但由于集约化程度低 ,饲养环境差 ,保健系统不完善因素的影响 ,球虫病所造成的损失 ,可能高于世界平均水平。球虫病所造成的经济损失至少 5 0 …     

毒害艾美球虫纯种分离的初步鉴定和致病性研究

采用从寄生部位分离和单卵囊感染技术,对现场采集的鸡球虫混合种进行单种纯化,获得了毒害艾美球虫(Eimeria necatrix)。该种卵囊呈卵圆形,经测240个卵囊,平均为19.06±1.54×16.50±1.26 μm,形状指数1.16。测120个孢子囊,平均为11.27±0.70×6.21±0.51μm。无卵囊残体和孢子囊残体,未观察到卵膜孔和极帽。最短孢予化时间为19小时,感染后最早排出时间143小时,最大裂殖体68.75×66.25μm。用此卵囊1万、5万、10万和20万个分别感染10日龄伊莎公鸡,结果感染5～20万个卵囊组的死亡率为41.67～50.00％,感染组的肠道病变记分为1.33、3.42、3.67和3.83,其平均增重与不感染对照组差异极显著(P<0.01)。E.necatrix对鸡致病性很强,在生产上需高度重视,做好预防工作。     

巨型艾美耳球虫研究进展

巨型艾美耳球虫（Eimeria maxima Tyzzer，1929）是鸡的9种球虫之一，其显著特点是卵囊最大，且免疫原性最强。自1929年Tyzzer发现以来，国内外学者对其进行了大量研究，取得显著进展。本文回顾了自发现巨型艾美耳球虫以来，人们对其所进行的形态学、致病性、免疫原性、分子生物学等方面的相关研究进展，以期对该种球虫有较全面的认识。     

变位艾美耳球虫纯种的初步确定和致病性研究

从上海郊县鸡场采集粪便分离球虫，经实验室繁殖和采用单卵囊感染技术，获得了纯种变位艾美耳球虫（ＥｉｍｅｒｉａｍｉｖａｔｉＥｄｇａｒ和Ｓｅｉｂｏｌｄ，１９６４）。该种球虫卵囊较小，主要呈宽卵圆形和椭圆形，经对２００个卵受测量，平均为１５．２４±１．７９×１２．４１±１．０７微米，形状指数为１．２３。卵囊内有１～３个折光性颗粒，多数卵囊为１个，靠近卵囊窄端，少数卵囊内有一个呈颗粒状的外残体。孢子囊有斯氏体和内残体，测１２０个孢子囊，其大小平均为９．５４±０．６１×５．２２±０．４０微米。卵膜内层在印囊窄端处形成一孔状结构，未见极帽。最短孢子化时间为１２小时，潜伏期９２小时，最大裂殖体１８．７５微米。用此卵囊对鸡作致病性试验，４个感染组每只鸡分别感染１万、５万、１０万和２０万个孢子化卵囊。感染一周后结束试验，结果为感染５万、１０万、２０万组与不感染组和感染１０万、２０万组与感染１万组的平均增重差异达极显著（Ｐ＜０．０１），各组均无死亡，感染组的肠道病变记分为０．７５、１．５０、２．５０和２．６７。     

柔嫩艾美耳球虫纯种的初步确定和致病性研究

从上海郊县鸡场采集粪便,分离球虫。经实验室繁殖和采用单卵囊感染技术,获得了一个纯种球虫。该种球虫寄生于盲肠,轻度感染,在肠的浆膜面可见针尖状出血点;严重感染,则盲肠极度肿大,肠壁布满出血点和白色小结节,随后肠管内形成较硬的干酪样肠芯,镜检可见大量卵囊。卵囊呈宽卵圆形和卵圆形,经测200个卵囊,其大小范围为17.5～30.0×12.5～25.0微米,平均为21.81±2.18×17.79±1.93微米,形状指数1.23。卵囊内有1个折光性极粒,无外残体,孢子囊有斯氏体,无内残体。测120个孢子囊,其大小范围为10.0～13.0×5.0～7.5微米,平均11.49±0.91×6.35±0.76微米。未观察到卵膜孔和极帽。最短孢子化时间为18小时,潜伏期141小时,最大裂殖体56.25微米。感染后4天半,粪便开始带血,5天到5天半,出血达高峰,并出现死亡。对照国内外文献,初步确定为柔嫩艾美耳球虫[Eimeria tenella(Railliet和Lucet,1891)Fantham,1909]。用此卵囊对鸡作致病性试验,挑选60羽体况相近的13日龄伊莎公鸡,分为5组,1个不感染组,4个感染组每羽感染剂量分别为1万、5万、10万和20万个孢子化卵囊。感染后一周结束试验,以平均增重、死亡率和盲肠病变记分作试验指标。结果为所有感染组与不感染组的平均增重差异达到显著(p<0.05)和极显著(p<0.01)水平,各感染组间1～10万组与20万组和1万组与10万组的增重差异达极显著;各感染组的死亡率分别为8.33％、33.33％、50％和75％;盲肠病变记分1万组为2.25,5～20万组为3.08～3.92。柔嫩艾美耳球虫的致病性很强,鸡一旦感染,其增重会受到影响,严重感染则造成大量死亡。     

巨型艾美耳球虫地方株的分离与鉴定

本文报道对巨型艾美耳球虫长春株的分离鉴定。主要鉴定指标如下:虫体寄生于小肠中段的空肠与回肠,配子体寄生于上皮下。病理变化主要表现为肠管充血、黄染、臌气,粘液性稀便以及肠粘膜针尖大小出血点。卵囊大小为31.5±0.26×23.1±0.15微米。最大裂殖体为9.2微米,潜隐期126±0.15小时,卵囊最短孢子发育时间为28小时。     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

3株鸡巨型艾美耳球虫抗原性分析

本研究对3株鸡巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)福建株、上海株和广东株进行免疫原性分析,其中广东株属于早熟株。将7日龄雏鸡分别免疫3株E.maxima孢子化卵囊,12 d后分别攻击相同剂量的同源及异源虫株孢子化卵囊,设不免疫攻虫对照组和不免疫不攻虫对照组,17d开始收集粪便直至无卵囊排出为止,每日计数卵囊,计算卵囊相对减少率。结果:雏鸡免疫后以同源虫株攻击,保护率均在98%以上,而雏鸡免疫后以异源虫株攻击,其交叉保护率在40.78%⁷2.37%之间。提示:E.maxima对同源虫株的保护率明显高于对异源虫株的保护率,说明各分离株间抗原性存在差异。     

斯氏艾美耳球虫致病性研究

为了深入研究斯氏艾美耳球虫的致病性,通过给幼兔人工感染不同数量的斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,对其发病后的急性临床症状及病理变化进行观察与分析。将幼兔分为4组,空白对照组和3个试验组。除空白对照组外,3个试验组家兔分别经口感染斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊2×105个/只、1×105个/只、0.5×105个/只。结果表明,在感染后第8天,3个试验组和空白对照组家兔的每克粪便卵囊数(OPG)分别为2.19×107、2×107、1×107和0,相对增重率分别为38.9%、58.0%、73.3%和100%。表明斯氏艾美耳球虫对幼兔有很强的致病性。     

柔嫩艾美尔球虫和巨形艾美尔球虫的分离与鉴定

采用单卵囊分离技术，获得了两纯种球虫，鉴定为柔嫩艾美尔球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌａ）和巨形艾美尔球虫（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）。主要鉴定指标：柔嫩艾美尔球虫，虫体寄生于鸡盲肠，卵囊呈卵圆形或宽卵圆形，有极体，无内、外残余体，测２００个卵囊的平均大小为（２０１６±１６１）×（１５５９±１１３）μｍ，测２００个孢子囊的平均大小为（１１６４±０８５）×（５．８６±０．５９）μｍ，潜隐期１４１ｈ，最短孢子化时间１９ｈ；巨形艾美尔球虫，虫体主要寄生于小肠中段，卵囊大，呈卵圆形，金黄色，有极体，无内、外残余体，测２００个卵囊的平均大小为（２８５１±１９８）×（２１．７９±１．５０）μｍ，测２００个孢子囊的平均大小为（１６３１±１０４）×（７．７８±０．４９）μｍ，潜隐期１２４ｈ，最短孢子化时间３２ｈ。     

鸡巨型艾美耳球虫卵囊呼吸作用的研究

采用纯种巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)卵囊,人工感染3周龄的石歧杂雏鸡,及时收集卵囊,以0.1N硫酸溶液悬浮,用微量呼吸检压仪检测卵囊呼吸作用。试验表明:孢子化过程中最初十小时内该球虫卵囊的耗氧量为3.59μl/小时/10~6个卵囊。耗氧量的变化与其细胞分裂过程相对应,耗氧量在三次核分裂前夕降低,但在分裂期升高。最高耗氧量出现于子孢子形成期,达18.91μl/小时/10~6卵囊。孢子化后卵囊的呼吸作用较缓慢,耗氧量为0.85μl/小时/10~6个卵囊。完成孢子化所需时间为26小时。     

巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对8种抗球虫药的敏感试验

为检测巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性,选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西等8种抗球虫药进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（percent of optimum anticoccidial aetivity,POAA）、病变记分减少率（reduction of lesion scores,RLS）、相对卵囊产量（relative oocyst production,ROP）和抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）4项指标进行综合评价。结果表明,巨型艾美耳球虫早熟株对8种药物敏感;柔嫩艾美耳球虫早熟株对盐霉素轻度敏感,对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感。本研究结果可为对球虫早熟株疫苗的开发与应用提供实验依据。     

上海市鸽球虫感染情况初步调查与种类鉴定

为了调查上海市鸽球虫的感染情况和种类,分别采集奉贤区肉鸽场和信鸽场的110份和44份粪便,以及南汇区肉鸽场的100份粪样,采用麦氏虫卵计数法对粪便球虫卵囊进行计数,收集阳性粪便中的卵囊,经孢子化后进行种类鉴定。结果显示,上海市鸽球虫的平均感染率为52.8%(134/254),平均每克粪便卵囊数(oocyst per gram,OPG)为50 159个,为中度感染。肉鸽感染率(55.2%)和平均OPG(52 110个)均高于信鸽(40.9%和37 583个),奉贤肉鸽感染率(60.9%)高于南汇(49.0%),但南汇肉鸽的OPG(88 634个)明显高于奉贤(25 400个)。从肉鸽阳性粪便中鉴定出5种球虫,即拉氏艾美耳球虫(Eimerialabbeana)、鸽艾美耳球虫(E.columbae)、原鸽艾美耳球虫(E.columbarum)、杜氏艾美耳球虫(E.duculai)以及卡氏艾美耳球虫(E.kapotei),拉氏艾美耳球虫为优势种。在信鸽阳性粪便中鉴定出4种球虫,即拉氏艾美耳球虫、杜氏艾美耳球虫、鸽艾美耳球虫以及原鸽艾美耳球虫,原鸽艾美耳球虫为优势种。本次调查表明上海市肉鸽和信鸽的球虫感染率和粪便OPG均偏高,调查结果为及时做好鸽球虫病的防治提供了基础数据。     

柔嫩艾美尔球虫裂殖子免疫原性的研究

本文评价了柔嫩艾美尔球虫第二代裂殖子的免疫原性。试验采用弗氏完全佐剂乳化的裂殖子抗原及从组织中分离得的活游离殖子，以不同剂量的不同时间接种健康小鸡，随后用同源球虫进行攻击。效果评价指标为：（１）比较各抗原组的鸡只死亡率及盲肠病变记分；（２）各抗原组鸡只的增重差异。结果表明，柔嫩艾美尔球虫第二代裂殖子抗原不能刺激鸡体产生保护性免疫力；具有活力的裂殖子接种于健康鸡盲肠能诱发部分免疫力，但较自然感染者为     

白腹锦鸡艾美尔属球虫一新种的研究(真球虫目:艾美尔科)

本文描述了寄生于四川省白腹锦鸡肠道内的艾美尔属球虫一新种：锦鸡艾美尔球虫（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｈｒｙｓｏｌｏｐｈｉ ｓｐ．ｍｏｖ．）。模式标本保存于四川农业大学动物科技学院。     

鸡柔嫩艾美耳球虫广西株的分离与鉴定

目的建立一种简单、实用的单卵囊分离方法，并对一株广西柔嫩艾美耳球虫进行分离。方法采用电泳制胶槽来制作琼脂块进行球虫单卵囊的分离，单卵囊实验感染9只1日龄雏鸡，感染后收集粪便，用饱和盐水漂浮法进行卵囊检测。纯种卵囊经口感染10只1日龄雏鸡，观测卵囊寄生部位、最短孢子化时间，以及其潜在期和排卵高峰期。结果2只雏鸡粪便中检出卵囊，单卵囊感染成功率为22％。通过对其中一株球虫的研究，根据其卵囊的形状、大小、寄生部位、潜在期、卵囊最短孢子化时间、排卵高峰期等生物特征，鉴定该株球虫为柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）。结论本研究成功建立一种单卵囊分离技术，可作为球虫单卵囊分离的常规方法。     

柔嫩艾美耳球虫裂殖生殖阶段超微结构的研究

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella)裂殖生殖阶段的超微结构进行了观察描述。其第二次裂殖生殖方式为外裂殖生殖，裂殖子侵入宿主细胞后，裂殖子逐渐变圆形成裂殖体，此过程中裂殖子的棒状体首先消失，引后锥体和极环消失、最后微浅、淀粉颗粒和折光体消失。裂殖体长大后，细胞膜下陷，将裂殖体分成几个部分，随后裂殖体进行核分裂成多核裂殖体，此后在靠近细胞核处细胞膜加厚外突，临近部位的细胞膜凹陷，同时近突起部位内膜复合体加厚形成极环，随着时间的推移逐渐形成幼稚裂殖子，幼稚裂殖子后部与残体相连，此过程中裂殖子的锥、极环、微线、棒状体、淀粉颗粒、折光体依次逐渐形成。裂殖子成熟的标志为从残体脱离，裂殖子的膜下微管24根纵向贯穿裂殖子直达顶端和极环相连，裂殖子内部由锥体、锥体前环1、锥体前环2、极环、微线、线粒体、折光体和3－多个棒状体等组成。     

堆型艾美耳球虫早熟减毒株裂殖子的细胞培养

以收集于雏鸡十二指肠的堆型艾美耳球虫早熟减毒株裂殖子接种于鸡胚成纤维细胞、鸡胚肝细胞、鸡胚小肠上皮细胞和雏鸡肾细胞,４１℃培养１２０小时,其在鸡胚成纤维细胞和鸡胚肝细胞中不能继续发育,在鸡胚小肠上皮细胞和雏鸡肾细胞中可发育到卵囊阶段。