中国大陆日本血吸虫同工酶谱的研究

本文报告应用酶泳技术检测中国大陆云南、四川、湖北、湖南、江西、江苏、安徽七地自然隔离群日本血吸虫的ＬＤＨ、ＭＤＨ、ＭＥ、６ＰＧ、６ＧＰ、ＧＩ１、ＩＤＨ、ＰＧＩ、ＡＤＫ、ＨＥＸ和ＥＳＴ１１种同工酶酶谱情况。其中七地自然隔离群日本血吸虫的ＭＤＨ、ＭＥ、６ＰＧ、Ｇ６Ｐ、ＧＤ１、ＩＤＨ、ＰＧＩ、ＡＤＫ及ＨＥＸ９种同工酶图谱相同，说明我国大陆七地自然隔离群日本血吸虫结构基本相同，其亲缘关系密切。在ＬＤＨ说明     

中国大陆不同地区日本血吸虫虫卵抗原的比较研究

本研究应用安徽、江苏、江西、湖北、湖南、四川和云南７个自然隔离群日本血吸虫尾蚴感染家兔和小鼠的血清对同源及异源可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）进行酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。结果显示：用同源虫卵抗原检测各地感染血清，其抗体应答水平并不高于应用异源虫卵抗原的。各地虫卵抗原的抗原性并不一致。     

日本血吸虫童虫液氮冷冻保藏期的研究

日本血吸虫童虫经２４ｈ到２年冻藏后，其活力和感染率与冻藏时间长短不相关，与冻存培养液的ｐＨ相关，最佳ｐＨ为７。冻藏５０ｄ传至Ｆ４，冻藏２年传至Ｆ１。童虫及其子代在终宿主小鼠和中间宿主钉螺体内的移行、生长、发育、繁殖、传代、性别比率及对终宿主的致病力，同相应对照组无明显差异，由此证明日本血吸虫童虫可用液氮冻藏长期保种。     

东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫后组织与血清蛋白组分差异比较研究

探讨东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫前后不同时点组织与血清中蛋白质电泳谱的变化。分别提取东方田鼠感染日本血吸虫(0、7、12、25 d) 和小鼠感染日本血吸虫(0、7、12、45 d)后的肝脏、脾脏、肺脏蛋白及血清进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,对结果比较分析并进行组织病理形态学观察。结果显示,小鼠感染日本血吸虫第7和12天后肝脏150 ku附近蛋白质条带较东方田鼠表达量明显增高;东方田鼠在感染日本血吸虫后40~50 ku附近蛋白质条带较正常东方田鼠表达明显上调;感染第7天后肺脏40 ku附近蛋白质条带较其他时间点变化明显;小鼠感染日本血吸虫第7、12和45天后血清中IgG类蛋白质表达量较东方田鼠显著增高。东方田鼠和小鼠在日本血吸虫感染后不同时点间的组织及血清蛋白组分存在差异,东方田鼠肝脏和血清中150 ku附近蛋白条带较其他动物特异,蛋白质表达丰度高,该蛋白可能与东方田鼠抗日本血吸虫相关。     

日本血吸虫尾蚴分泌蛋白水解酶的初步研究

为了解日本血吸虫尾蚴转化为童虫过程中是否分泌蛋白水解酶，进行了日本血吸虫尾蚴在DSM培液中进行机械转化和尾蚴接种于复盖DSM培液液面的人工小鼠皮上进行自然转化时酶活性测定，测定应用酪蛋白溶液。结果证实日本血吸虫尾蚴转化为童虫过程中和新转化的童虫均能分泌一种蛋白水解酶。根据报道，曼氏血吸虫的这种酶起到钻透结缔组织的蛋白水解和促使尾蚴转化为童虫时糖萼脱落两个作用，并随之而起到抵抗免疫杀伤功能。说明日本血吸虫尾蚴和童虫，与曼氏血吸虫一样有这方面的功能。     

日本血吸虫7d童虫cDNA文库构建及免疫筛选

为了从7 d童虫cDNA文库筛选出童虫发育阶段特异性表达抗原基因。本研究首先构建了日本血吸虫7 d童虫cDNA文库,其次再采用日本吸血虫感染血清进行筛选。结果显示:建立的文库插入片段为0.5~3.0 kb,文库重组率为98%,初始文库滴度为2.4×10~6 pfu/mL,扩增后滴度为1.6×10~9 pfu/mL,利用感染日本血吸虫10 d和42 d的小鼠血清免疫筛选该文库,初筛和复筛后获得17条有效EST序列,其编码7个基因,分别为复制蛋白(2 ESTs)、肝再生增强因子(3 ESTs)、血小板活化因子(6 ESTs)、钙调理蛋白基因(3 EST)、丝束蛋白(1 ESTs)、核糖体RNA(1 EST)和还原型辅酶脱氢酶基因(1 EST)。该研究结果对今后探讨血吸虫的生长发育机制及筛选血吸虫早期诊断抗原具有重要意义。     

日本血吸虫童虫冷冻保藏复苏后生活史循环的研究

本文报告了日本血吸虫童虫经液氮冻藏复苏后的生活史循环的情况。童虫冻藏３６天和５０天后腹腔注射感染小鼠，亲代成虫回收率为９．０和８．９％。感染鼠肝内的子代虫卵孵出的子１代毛蚴感染钉螺，感染率为５９和６７％；平均每个钉螺第１次逸出的子１代尾蚴数为８００～９００条。子１代尾蚴感染小鼠后，其子１代成虫回收率为５５和５６％。合抱雌、雄成虫的体长、性腺的发育和虫体对宿主的致病力与正常途径感染者无明显差异。     

日本血吸虫重组IAP蛋白的免疫保护效果评估

为研究日本血吸虫凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein of Schistosoma japonicum,SjIAP）重组蛋白诱导BALB/c小鼠的免疫保护效果,利用PCR技术扩增SjIAP基因,构建重组表达质粒pET-28a（＋）-SjIAP,诱导表达重组SjIAP蛋白,并利用重组蛋白制备兔源多克隆抗体血清。然后,选用SjIAP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用ELISA检测免疫小鼠血清中的特异性抗体水平,以及免疫小鼠脾脏淋巴细胞在SjIAP重组蛋白刺激后产生的细胞因子水平。强化免疫后,将小鼠进行血吸虫尾蚴攻虫试验,感染38 d,进行剖杀,计算虫体减虫率及肝脏减卵率。Western blot结果表明本研究制备的兔源多抗血清能特异性识别SjIAP重组蛋白。ELISA检测表明免疫SjIAP重组蛋白可诱导较高水平的IgG及IgG亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3）抗体和IFN-γ、IL-2及IL-4细胞因子。动物试验表明,免疫SjIAP重组蛋白的小鼠与PBS组相比分别获得了31.5%的减虫率和37.2%的肝脏减卵率。免疫SjIAP重组蛋白能诱导小鼠获得一定减虫和减卵保护效果,提示血吸虫凋亡蛋白抑制因子可作为抗血吸虫病的疫苗候选分子。     

编码日本血吸虫CIAPIN1 cDNA的克隆及其重组蛋白的原核表达

本研究利用生物信息学并结合分子生物学实验对日本血吸虫细胞因子诱导凋亡因子CIAPIN1（cytokine induced apoptosis inhibitor 1）基因进行了初步研究。研究表明日本血吸虫存在CIAPIN1同源基因,将其命名为SjCIAPIN1,SjCIAPIN1基因已知cDNA长1143 bp,包括完整的CDS,编码276个氨基酸,预测分子量为30.55863 kDa。通过原核表达系统对该蛋白进行了重组表达和纯化,并制备了多克隆抗体制备。Western blot分析表明,本研究制备的多克隆抗体能与SjCIAPIN1重组蛋白特异识别。     

日本血吸虫冻融童虫苗和提纯抗原苗对水牛的免疫保护试验

应用日本血吸虫两种抗原疫苗免疫水牛的减虫率、肝组织虫卵的减少率和攻击前及解剖前的平均增重分别为：日本血吸虫冻融苗（Ｆ／Ｔ苗）组为６４．８％ 、８１．８％ 和２８．５ｋｇ、５５．３ｋｇ;日本血吸虫提纯抗原苗天然谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ｎＧＳＴ 苗）组为３３．１９％ 、７９．７％ 和３７．８ｋｇ、６３．７ｋｇ     

编码日本血吸虫Akt蛋白的cDNA克隆及原核表达

本研究利用生物信息学分析日本血吸虫编码Akt蛋白的cDNA并对编码该蛋白的cDNA进行了克隆和原核表达。生物信息学分析表明日本血吸虫存在两个Akt蛋白。利用PCR将其中一个Akt蛋白催化功能域的编码cDNA进行了克隆,并利用原核表达系统对此蛋白片段进行诱导表达并进行了重组蛋白的纯化,将重组蛋白免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。Western blot分析表明,该抗体能被日本血吸虫Akt重组蛋白特异性识别。本研究为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。     

日本血吸虫丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶基因的表达及其免疫保护试验

为研究日本血吸虫丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶（SjPP）的免疫功能，构建了原核表达重组质粒pET28a（＋）-SjPP，转化大肠埃希氏菌BL21（DE3）进行诱导表达，并用重组蛋白进行了小鼠免疫保护试验，免疫剂量为每次20μg／只，共免疫3次。结果表明，pET28a（＋）-siPP／BL21（DE3）在0．1mmol／L IPTG诱导2h时，每1g菌体可产生17．8mg以包涵体形式存在的重组蛋白；重组蛋白免疫小鼠后诱导产生了高效价的血清特异性IgG抗体，并获得了部分减虫率、肝组织减卵率和显著的粪便减卵率，具有一定的免疫保护作用。     

miRNAs在日本血吸虫不同发育时期的表达情况研究

本研究基于前期对日本血吸虫体内miRNAs的高通量测序及免疫共沉淀研究结果,利用半定量RT-PCR技术对24个miRNAs在15、20、28 d的日本血吸虫雌雄虫体内的表达情况进行了检测,并进一步利用实时定量RT-PCR验证表达差异明显的miRNAs。结果表明bantam、miR-1989、miR-31这三个miRNAs的表达具有期特异性,且均在雌虫中高表达;miR-219在雄虫体内高表达;其余的miRNAs在各个时期均有表达,但表达情况没有明显差异。研究结果对深入理解这些miRNAs在日本血吸虫性成熟或者生殖产卵方面的功能奠定了基础。