利用TSPY基因鉴定奶牛早期胚胎性别的研究

TSPY（testis—specific protein）是Y染色体上特异的基因。公牛Y染色体上的TSPY基因的拷贝数达200个。本研究主要探讨利用TPSY基因鉴定胚胎性别的可能性。利用TSPY特异引物,通过PCR技术扩增牛血样DNA的结果为公牛血样均为阳性,母牛为阴性。结果表明,TSPY基因是一个很好的雄性特异标记。PCR扩增TSPY特异序列鉴定牛性别的灵敏度试验表明,DNA的最低需要量为20pg/μL,提示,TSPY特异基因具有鉴定牛早期胚胎性别的可能。     

利用性别决定基因(SRY)进行牛早期胚胎性别鉴定的研究

利用牛性别决定基因(SRY)和酪蛋白αs1基因(CSN1S1)分别设计雄性特异性引物和内标引物,两对引物均各设计一对嵌套式引物进行多重PCR和多重巢式PCR,用于牛早期胚胎性别鉴定。SRY基因和CSN1S1基因外、内引物扩增片断长度分别为357bp、232bp、528bp和367bp。实验结果表明,这两个引物组合建立的多重PCR扩增体系均有较高的扩增稳定性和准确率,但在常规PCR体系中,它们的灵敏度均不高(约50pg,相当于16个细胞的DNA量),这在一定程度上限制了其在胚胎性别鉴定中的应用。而由二者建立的巢式PCR灵敏度可达到5pg,故可以很好地满足胚胎性别鉴定的需要。     

PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

早期胚胎性别鉴定的方法有很多种,大致可分为两大类：一是前期主要采用的非生物学方法,如组织方法,免疫学方法[~[p16]〔1〕],X-相关酶法[~[p16]〔2〕]等,这些方法都缺少准确性和速度;二是80年代末,随着DNA体 外重组技术而发展起来的分子生物学方法,如DNA探针法〔3〕,聚合酶链反应法（PCR）。其中PCR法以灵敏、特异、准确和快速等特点,而成为胚? 胎性别鉴定中最有研究价值的技术方法。自Herr等（1990）[~[p16]〔4〕]报道了用PCR进行奶牛胚胎性别鉴定技术之后,国内外许多学者从事了这方面的研究 ,使准确率接近或达到了[=]100%,同时操作过程也简化了许多,并且可以在几个小时内完成,为PCR法进行早期胚胎性别鉴定应用于生产提供了基础。     

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系的优化研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物，根据牛酪蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。同时对常规PCR和巢式PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的实用性进行比较。15头公牛、13头母牛的DNA样品检测结果表明：使用巢式PCR公牛可以扩增出205bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段；而使用常规PCR时公牛扩增出255bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段，其性别鉴定结果和实际完全一致。由于巢式PCR只需10个细胞就可以在紫外透射分析仪下看到扩增结果，而常规PCR则需要20～30个细胞，所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。试验采用巢式PCR鉴定了10个奶牛胚胎的性别，同时还对血清是否会对试验结果产生影响进行了研究。     

应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别的研究

应用ＰＣＲ技术鉴定牛早期胚胎性别的研究吕碧文俞颂东金水仙（浙江省农科院畜牧兽医所,杭州,３１００２１）家畜胚胎的早期性别鉴定技术,是家畜胚胎移植技术的一项重要内容,其实质就是Ｙ染色体或存在于Ｙ染色体上的性别决定基因（即ＳＲＹ基因）的检测技术。ＰＣＲ...     

非电泳法PCR牛早期胚胎性别鉴定研究

为选出更高效、实用的牛胚胎性别鉴定方法，分别用成年牛血样提取的基因组DNA和冷冻的牛早期胚胎细胞DNA为样本，以电泳法和非电泳法用相应的性染色体DNA引物做胚胎PCR性别鉴定实验，以相对比。血液模板DNA结果与胚胎样本结果都表明，使用DYZ-1引物的非电泳法在比使用SE引物的电泳节约1h以上时间的同时，具有比SE更高的灵敏度。这次研究在我国首次成功地把非电泳PCR法应用到牛胚胎性别鉴定之中，减少了胚胎性别鉴定的操作步骤，并大大缩短了性别鉴定所需要的时间，从而使胚胎移植现场性别鉴定更加可行。     

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系优化的研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据牛-珠蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255 bp的-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255 bp的-珠蛋白基因片段。由于巢式PCR只需3～8个细胞就可以在紫外灯下看到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。     

应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究

研究的目的是优化胚胎PCR性别鉴定方法的条件，建立实用的鉴定方法。试验设计获得了牛种属和公牛特异的引物，利用聚合酶链反应（PCR）对模板DNA进行扩增，通过常规双重PCR法和巢式PCR法的比较研究，结果表明巢式PCR法大大提高了鉴定牛早期胚胎性别的灵敏度。对组织DNA样品、血样、颗粒细胞和公牛冷冻精子进行检测，结果全部与实际性别一致；对于胚胎样品，判定结果与产犊性别一致。通过批量胚胎现场的检测，证明建立的胚胎性别鉴定方法可用于生产。     

基因扩增技术在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

家畜早期胚胎性别鉴定是近年来胚胎工程领域研究的重点，而基因扩增技术在胚胎性别鉴定的应用为实现家畜性别的人为控制带来了新的希望。目前用于牛胚胎性别鉴定的基因扩增方法主要有PCR法和LAMP法等。文章对SRY基因、动物性别决定的生物学机理和用于牛早期胚胎性别鉴定的基因扩增技术作一简要综述。     

PCR技术及其在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

本文对PCR(聚合酶链式反应)的基本原理、优点、方法及其在牛胚胎性别鉴定中的应用情况进行了扼要综述。     

PCR法鉴别牛早期胚胎性别的研究进展

对PCR法鉴别动物胚胎性别的机理进行了分析,综述了近10年来相关操作技术的进展,包括早期胚胎取样、胚胎细胞DNA的提取、引物的设计、扩增条件的优化、扩增产物的检测和性控胚胎的冷冻等,并提出PCR法鉴别牛早期胚胎性别的前景与展望。     

扩增SRY基因鉴定牛、羊胚胎性别的初步研究

本研究利用本试验室设计的SRY基因3对常规PCR引物扩增牛SRY基因和羊的SRY基因,结果表明:第2对引物扩增出公牛和公羊基因组的DNA 750 bp左右清晰条带,而母牛、母羊基因组DNA无此扩增条带,说明第2对引物可以应用于牛和羊的早期胚胎性别鉴定;     

牛胚胎性别鉴定荧光定量PCR方法的优化与应用

旨在建立一种可检测牛早期胚胎性别的复合探针体系,减少常规PCR方法电泳所带来的污染,提高鉴定准确率,降低鉴定成本.本研究以SRY为牛胚胎性别鉴定的目标基因,以进口YCD-PCR性别鉴定试剂盒为对照组(n=9543),荧光定量PCR的单引物分别扩增体系(荧光单扩,FSPSA,n=6570)和双引物混合扩增体系(荧光双扩,...     

哺乳动物早期胚胎性别鉴定研究进展

性别控制技术已经成为繁殖生物学中重要的研究课题和研究方向,哺乳动物的性别控制是指通过对精子或胚胎的性别鉴定以达到调控子代性别的目的。目前,哺乳动物性别控制的方法很多,主要有精子控制法和早期胚胎性别控制法等。文章主要介绍了早期胚胎性别鉴定方法的基本原理、研究现状、优缺点及在畜牧业中的应用,为进一步探讨哺乳动物的性别控制提供参考。     

通过CHD基因快速鉴定鸽子性别方法的研究

本试验采用PCR方法,依据性别基因连锁理论,通过羽毛和血液,不提取鸽子基因组DNA,直接利用特异性引物对其CHD基因的特异性片段进行扩增,琼脂糖凝胶电泳检测,结果显示雄鸽仅有1条带,在700bp左右,雌鸽有2条带,分别在400与700bp左右;利用该检测方法对100羽性别未知的雏鸽进行了性别鉴定,结果为雌鸽48羽、雄鸽52羽,并通过剖解雄鸽的生殖器官进行验证,准确率达到100%。用建立的方法测定了2928羽雏鸽用于蛋鸽留种试验,结果表明,雌鸽为1411羽、雄鸽为1517羽。     

Study on Quick Sex Identification Method in Pigeons by CHD Gene

In this experiment, the primer pairs were designed, and polymerase chain reaction (PCR) technique to amplify the segments of the partial sex linked gene chromo-helicase-DNA-binding (CHD) to identificate pigeon's sex using feather pulps and blood.We found that two bands were demonstrated in all female egg-laying pigeons, and the sizes of them were 400 and 700 bp, respectively;In all male egg-laying pigeons, only one band appeared with length of 700 bp.100 unknown sex samples were successfully identified (52 males and 48 females).Based on the checking results between molecular electrophoresis of pigeons and the truly sex of maturity pigeons, we detected CHD gene in 2 928 early age pigeons using PCR amplification and electrophoresis in agarose gel.The PCR amplification results showed 1 517 males and 1 411 females.