伊氏锥虫在小鼠体内抗原变异规律及免疫保护试验

为了探索伊氏锥虫抗原的变异规律及其用于免疫预防的可能性，首先对伊氏锥虫安微株单虫克隆2个早期变异体ShTatl.1、ShTat1.2采用蛋白酶抑制剂TLCK处理，分离纯化这2种变异体的VSG，用ShTat1.1 VSG免疫KM小鼠，ShTat1.1锥虫攻击免疫鼠后6d分离锥虫，经间接免疫荧光试验（IFT）和班点酶标记试验（Dot-EIA)鉴定为ShTat1.2，说明同一克隆锥虫感染兔，小鼠第1次发生抗原变异后产生的变异体相同。依据这一规律，设计了免疫预防保护试验，试验小鼠分3组：一组为未免疫对照组，一组为ShTat1.1VSG单一抗原免疫组，另一组为ShTat1.1 VSG,ShTat1.2 VSG混合免疫抗原免疫组，各组均以ShTat1.1锥虫攻击，结果ShTat1.1 VSG ShTat1.2VSG免疫组小鼠全部获得保护，单用ShTat1.1 VSG免疫组小鼠和未免疫小鼠血中全部出虫、死亡，前者比后者出虫时间、存活时间延长。提示运用伊氏锥虫抗原变异这一规律设计的这种复合抗原，能激发宿主克服虫体抗原变异对免疫保护的干扰。     

伊氏锥虫单虫克隆的2个变异体的VSG的交叉免疫保护试验

为了考察同一克隆锥虫的不同变异体的可变糖蛋白分子 (VSG)有无交叉免疫作用 ,首先采用蛋白酶抑制剂TLCK处理 ,分离纯化伊氏锥虫安徽株单虫克隆 2个早期变异体ShTat1 1、ShTat1 2的VSG ,然后采用这 2种VSG进行交叉免疫保护试验。试验鼠分为对照组 ,ShTat1 1VSG免疫组 ,ShTat1 2VSG免疫组。用弗氏佐剂按常规进行 3次免疫注射 ,每次抗原用量均为 50 μg/只。三免后第 1 2天 ,将各组小白鼠随机分为 2个小组 ,分别用ShTat1 1、ShTat1 2攻击 ,每只攻虫 1 50 0条。结果攻虫后的对照鼠及异源攻虫后的免疫鼠尾血最早出虫时间均为攻虫后第 3天 ;同源锥虫攻击后免疫鼠的尾血最早出虫时间为第 6天。对照组经攻虫 ,保护率均为 0 /8;免疫鼠经交叉攻虫 ,保护率均为 0 /8;VSG免疫鼠用同源锥虫攻击 ,保护率分别为 5/1 0和 3/1 0。表明各VSG激发的免疫只能抗同源锥虫的感染 ,对异源锥虫感染无保护力     

运用伊氏锥虫抗原变异规律进行免疫的初步研究

为了克服锥虫抗原变异对宿主免疫反应的干扰，探索伊氏锥虫病高效保护性抗原，根据伊氏锥虫在宿主体内第一次发生变异产生的变异抗原免疫原性相同的规律，设计了伊氏锥虫变异前抗原（VSG1）和第二次变异所产生的抗原（VSG2）复合物作免疫原，对小鼠进行免疫与单用变异前抗原免疫鼠相比较，两组鼠都用带变异前抗原的虫攻击，另以未免疫的鼠作对照，结果VSG1＋VSG2免疫组小鼠8只全部获得保护，单用VSG1免疫组小鼠10只和未免疫组小鼠10只血中全部出虫而死亡，前者比后者出虫时间和存活时间延长，提示运用伊氏锥虫抗原变异这一规律设计的这种免疫复合物，能激收缩主克服虫体抗原变异对免疫保护的干扰。     

伊氏锥虫不同株的表面变异糖蛋白提取和重要特性比较

抗原变异是锥虫的重要特征，主要表现于锥虫表面变异糖蛋白（VariableSurfaceGlycoprotein，VSG）的变化，而且锥虫的VSG变异非常频繁，国外对布氏锥虫的VSG研究较多，对中国伊氏锥虫的VSG，杨汉春［1］、李国清等［2］曾作过分离和生化分析，但对中国不同地理宿主株VSG的分离比较尚无报道。而我国北方新疆骆驼伊氏锥虫和南方牛、马伊氏锥虫存在来源、地理、宿主和生化特性的变异[3,4]，我们对这两个虫株的VSG进行了分离、纯化和特性比较研究，以期为伊氏锥虫的抗原变异和伊氏锥虫病的防治研究提供依据。1材料与方法1．1材料和试剂…     

禽流感病毒感染的宿主免疫应答

禽流感病毒(AIV)亚型众多、宿主广泛、抗原易变,不同种类的宿主对AIV的反应差异很大。体液免疫可提供抗疫病的保护,抗血凝素的中和抗体是主要的决定因素。细胞毒性T细胞(CTL)反应主要是针对比较保守的内部蛋白,细胞免疫在不同亚型或不同毒株间有交叉反应性,但保护性低。AIV感染的早期,CTL和细胞因子等细胞免疫对限制病毒扩散等起一定作用;感染后期,中和抗体的产生对病毒的清除和宿主恢复起重要作用。     

锥虫的两种免疫逃避机制

近半个世纪来,国内外学者在人畜锥虫病的免疫学和分子生物学等各方面进行了大量的研究,但迄今仍未研制出一种有效的防治锥虫病的方法.究其原因,主要是锥虫具有不断发生抗原变异和对被感染宿主的免疫系统产生免疫抑制的特性,也是锥虫的两种重要的免疫逃避机制.本文主要就这方面的研究进展做一简要介绍.一、锥虫引起的免疫抑制现象动物感染锥虫病后,免疫系统发生很大变化,而广泛性免疫抑制是其主要特征之一.锥虫引起宿主的免疫抑制是由多种因素引起的.Rolants发现,锥虫所引起的免疫抑制是一种主动抑制,它与寄生在宿主体内的活锥虫有关,即锥虫的分泌产     

锥虫免疫逃避的研究进展

正在寄生虫与宿主长期的适应过程中,有些寄生虫获得了抵制其免疫清除作用的能力,这种能力被称为免疫逃避(immune evasion)~([1])。寄生虫为了在宿主体内存活,进化出了逃避宿主先天性免疫和特异性免疫的能力。锥虫(Trypanosome)寄生于人和动物的血液内引起严重的锥虫病,其免疫逃避机制非常复杂,这也正是锥虫病疫苗研究困难的原因之一,揭示其免疫逃避机制将为锥虫病疫苗的研制奠定理论基础。锥虫有多种复杂的免疫逃避机制,如     

非免疫蛋黄粉可防止母鸡感染SE

加拿大研究人员测定了给鸡饲喂添加非免疫蛋黄粉(不含抗-SE抗体)、免疫蛋黄粉(含抗-SE抗体)、蛋黄蛋白、蛋白和乳清粉饲料对清除和防止肠炎沙门氏菌(SE)感染的影响。     

感染伊氏锥虫兔抗同源和异源锥虫攻虫的效果

感染伊氏锥虫兔抗同源和异源锥虫攻虫的效果顾有方摘译汪志楷校１前言锥虫的一个显著特征是逃避宿主免疫反应，这主要直接作用于糖蛋白组成的表面抗原。实际上，尽管锥虫的循环抗原型很多和宿主反应特异性极强，但在锥虫流行地区不采用外来的控制措施，如治疗，部分家畜一...     

应用单克隆抗体检查伊氏锥虫抗原变异

用广西骡株伊氏锥虫可溶性抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP_2/O)融合,获得了在ELISA中能与广西骡株伊氏锥虫可溶性变异表面糖蛋白反应的2个分泌IgG_1的单克隆抗体(McAb)。用McAb于ELISA抑制试验对四份不同期的广西骡株伊氏锥虫阳性血清的抗体成分进行了分析,结果四份锥虫阳性血清对于McAb与相应抗原决定簇的结合均未出现明显的抑制作用。表明血清样本间很少或完全没有与McAb相类似的抗体。这证明伊氏锥虫存在多个血清型亦即变异抗原型。     

筛选伊氏锥虫单克隆抗体检测方法的建立—ELISA

首先采用DEAE纤维素柱层析法从感染动物血液中分离获得纯净的伊氏锥虫,通过超声乳化结合离心得到可溶性锥虫抗原,作为免疫接种及检测用:通过免疫大白鼠获得鼠抗伊氏锥虫阳性血清,用辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG血清获得酶标抗体,经测试,抗原工作浓度为1:80(原浓度为2.57mg/ml),酶标抗体工作浓度为1:400,从而建立了酶联免疫吸附试验(ELISA),作为筛选抗伊氏锥虫单克隆抗体的检测手段。实践证明该方法灵敏度高,特异性强,使用方便。     

鸡基因组多个位点影响抗传染性支气管炎病毒感染

正目前,关于宿主抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染的免疫应答的遗传机制知之甚少。广东省农业科学院畜牧研究所的科研人员应用ELISA试剂盒检测疫苗免疫后511份原鸡血清的IBV抗体水平,并应用全基因组关联研究鉴定影响抗IBV感染的免疫应答产生的主要位点。结果显示,共鉴定出20个与IBV抗体产生显著相关的SNP标记,主要分布于鸡的5个染色体(GGA1、GGA3、GGA5、GGA8和GGA9);每个SNP标记周围存     

病毒的持续性感染机制研究进展

病毒感染存在急性与持续性两种形式,急性感染有利于病毒在不同宿主间迅速传播。然而,一方面由于宿主具备多种抵御和清除病毒感染机制来抑制病毒的过度增殖,另一方面由于病毒在感染过程与宿主共同进化,在保证自身不被宿主免疫系统清除的同时,又避免与机体免疫系发生正面冲突,这种类似于寄生的持续性感染方式可能更有利于其长久繁衍。病毒可以降低宿主的防御和减轻病毒对机体的损伤,因而许多持续性感染病毒并不杀伤细胞,然而持续性感染的建立并非只是病毒单方面的决定,而是由病毒和宿主等多种因素共同作用的结果。其中与免疫细胞的相互作用是病毒引起持续性感染的重要原因,虽然某些机制目前还未完全清楚,但存在一些共同的机制。本文针对持续性感染病毒与免疫细胞之间相互作用的研究进展作一综述。     

水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用

为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛伊氏锥虫病诊断方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的OB6单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上包被纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的TB7单克隆抗体和兔抗小鼠IgG,作为检测带和质控带,然后优化条件,研制成检测伊氏锥虫病的免疫胶体金试纸条.通过交叉试验表明该试纸条与衣原体、弓形虫、旋毛虫、巴贝斯焦虫和大片吸虫无交叉反应.该试纸条最低可以检出1∶3 200倍稀释的伊氏锥虫VSG抗原(浓度为3.11 mg·mL-1).应用该试纸条对230份水牛血清样本进行初步检测,同时用ELISA做平行试验,阳性符合率为88.2％.结果证明该试纸条是一种快速、灵敏、特异的水牛伊氏锥虫病的检测方法,为水牛伊氏锥虫病的现场检测诊断和预控提供了有效的方法.     

寄生虫感染与免疫

本文从寄生虫抗原、宿主对寄生虫和寄生虫对宿主的免疫应答、免疫抑制及免疫不全状态下的寄生虫感染以及免疫学诊断、预防等方面,重点阐明其特征性的免疫现象。寄生虫的抗原非常复杂,包括构成虫体本身物质的虫体抗原和排泄、分泌抗原等。寄生虫感染的重要表现是IgE抗体产生增强和嗜酸白细胞增多。特异性IgE抗体产生,是因为在寄生虫抗原中有诱导IgE抗体生成的抗原即变应原的存在,这种变应原又受特异的辅助T淋巴细胞的诱导。嗜酸白细胞不仅在血中增加,在感染组织中也见显著浸润。它除了在Ⅰ型变态反应中具有调节作用外,对寄生虫也有直接作用。寄生蠕虫类一方面可降低本身的抗原性,朝着与宿主抗原相一致的方向进化着。另一方面虫体可以把感染初期的抗体吸附在自身表面形成封闭抗体。同时蠕虫类还能产生抗补体因子和向外释放抗原物质来干扰宿主的免疫系统,巧妙地逃避宿主的免疫应答而使自身生存下来。     

抗伊氏锥虫表膜单克隆抗体的研究 Ⅱ.用抗伊氏锥虫表膜抗原McAb检测循环抗原

利用抗伊氏锥虫表膜抗原的McAb双抗体夹心法,检测了48匹健康马(骡)、5匹人工接种伊氏锥虫马(骡),9匹先用锥虫弱毒株免疫后用强毒株攻毒马(骡)共278份血清的循环抗原(CA),同时用常规间接ELISA检测了相应的循环抗体(CAb)。结果: 278份血清的CA、CAb阳性率无显著差异,但其阳性检出时机不完全吻合;人工接种马(骡)的CA阳性检出率高于CAb,于接虫后经1-2个CA高峰而死,濒死前4/5动物的CA呈现阳性,免疫马(骡)在攻虫前CA即可呈现阳性,多经1-3个CA高峰后逐渐转阴;人工接种马(骡)的CA水玉高于免疫马(骡),二次攻虫后的CA水平高于首次。     

布氏锥虫Trx-putative和Trx-like的抗氧化功能研究

硫氧还蛋白(Trx)是一种氧化还原调节蛋白,参与锥虫抗宿主氧化,生物信息学分析发现Trx-putative和Trx-like含有与Trx一样的"Tioredoxin-like super family"结构域,为了阐明其抗氧化功能,通过原核表达方法获得其重组蛋白,重组蛋白免疫SD大鼠制备抗性血清,间接免疫荧光试验观察其...     

伊氏锥虫感染力及其毒力的比较试验

伊氏锥虫是家畜主要的致病锥虫。不但感染众多的宿主,而且地理分布也十分广泛.其感染力及毒力因地理和宿主条件的不同而表现出差异.宿主中以马、大和大小鼠等为高度易感动物,感染后往往发病急、死亡快,而牛、兔和豚鼠等动物则较差,其感染呈慢性经过.我们通过小鼠及豚鼠人工感染试验对伊氏锥虫云南株和广东株的感染力及其毒力进行了比较观察。     

伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究：Ⅲ.伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗独特…

用提纯的Ａｂ２制成免疫制剂，在大白鼠、小白鼠可诱导特异性ＶＳＧ抗体（Ａｂ３）。免疫保护试验结果表明，Ａｂ２制剂免疫动物对攻虫感染具有明显的保护效应。单独用抗独特型抗体免疫的小白鼠、大白鼠、豚鼠对５０条同型锥虫攻击的保护率分别为６０％，６０￣８０％，８０％；抗独特型抗体作为“引子”，可使小白鼠获得８０￣１００％的保护，对大白鼠和豚鼠和保护率为１００％。单独使用抗独特型抗体免疫的小白鼠对５个数量（２５     

伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究Ⅲ．伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗独特型抗体的功能鉴定

用提纯的Ａｂ２制成免疫制剂，在大白鼠、小白鼠可诱导特异性ＶＳＧ抗体（Ａｂ３）。免疫保护试验结果表明，Ａｂ２制剂免疫动物对攻虫感染具有明显的保护效应。单独用抗独特型抗体免疫的小白鼠、大白鼠、豚鼠对５０条同型锥虫攻击的保护率分别为６０％，６０～８０％，８０％；抗独特型抗体作为“引子”，可使小白鼠获得８０～１００％的保护，对大白鼠和豚鼠的保护率为１００％。单独使用抗独特型抗体免疫的小白鼠对５个数量（２５，５０，１００，２００，４００）锥虫攻击的保护率分别为８０％，６０％，２０％，０％，０％，而作为“引子”免疫小白鼠对５个数量锥虫攻击的保护率分别为１００％，８０％，４０％，２０％，０％。这些结果表明，制备的兔抗独特型抗体（Ａｂ２）含有ＶＳＧ表位的内影像，具有模拟ＶＳＧ的功能，在实验动物体内可诱导主动免疫，因此可作为一种潜在的疫苗制剂为家畜伊氏锥虫病的免疫预防提供一个可能的途径。