白细胞介素-4基因转化胡萝卜的研究

以胡萝卜‘长城红明’与‘开拓者’胚轴为受体材料,研究了菌种、预处理、农杆菌菌液浓度、侵染时间和共培养时间对胡萝卜胚轴转化率的影响.结果表明:C58C1菌株对胡萝卜胚轴伤害较小;‘长城红玥’以7日龄无菌苗于4℃预处理3d,经3.2×107个/mL农杆菌菌液侵染6min,共培养3d,转化率可达60％;‘开拓者’以7日龄无菌苗于4℃预处理3d,经4.8×107个/mL农杆菌菌液侵染10 min,共培养4d,或7日龄无菌苗于4℃预处理10 d,经3.2×107个/mL农杆菌菌液侵染10 min,共培养2d转化率可达100％;但2个品种均以7日龄无菌苗于4℃预处理3d,经1.6×107个/mL农杆菌菌液侵染2min,共培养2d,可得最多转化苗.     

根癌农杆菌介导的西瓜遗传转化研究

利用带有内含子的GUS基因的瞬时表达,研究影响根癌农杆菌介导的西瓜遗传转化的若干因素。结果表 明:西瓜子叶块外植体对潮霉素较为敏感,15 mg/L是适宜的筛选浓度,可明显抑制非转化组织的生长;脱菌过程中 采用500 mg/L的头孢霉素,对外植体生长影响较小;农杆菌菌株EHA105对西瓜子叶块的侵染能力较强;预培养有 利于转化;共培养3-4 d有利于提高转化频率并避免了农杆菌的过度生长;OD600值为0.3的菌液侵染10min效果最 佳;共培养培养基中添加乙酰丁香酮可提高转化频率。     

橙色大白菜遗传转化体系的初步建立

以06J28橙色大白菜子叶段为外植体,通过根癌农杆菌介导CMS7311-orf224基因,探讨了潮霉素、头孢霉素、预培养时间、农杆菌浓度、感菌时间和共培养时间等因素对橙色大白菜遗传转化的影响.试验结果表明,子叶段预培养2~3 d后,在OD600值为0.3~0.5的农杆菌EHA-105菌液中侵染5 min,再共培养2~3 d,在培养基中加入5 mg/L Hyg (抗性筛选)和500 mg/L Cef(脱菌)可得到转化植株.试验初步建立了橙色大白菜遗传转化体系,为大白菜种质资源创新奠定了基础.     

“奇宝”对4个无核葡萄品种花果疏除效应的研究

该试验以4个无核葡萄品种为试材,研究了新型植物生长调节剂＂奇宝＂对花果的疏除效应。试验从各处理对坐果率、单粒重、可溶性固形物含量的综合影响效果看,‘克瑞森’无核品种＂奇宝＂处理最适宜的时间是盛花期,最适宜的浓度是1mg/L;‘汤姆逊’无核品种＂奇宝＂处理最适宜的时间是初花期和盛花期,初花期适宜的浓度是15mg/L,盛花期适宜的浓度是10mg/L;‘火焰’无核品种＂奇宝＂处理适宜的时间是盛花期,适宜的浓度是5mg/L;‘黑无核’品种＂奇宝＂处理最适宜的时间是初花期和盛花期,初花期适宜的浓度是1mg/L,盛花期的适宜浓度是1mg/L。     

新疆甜瓜高效再生体系的建立及NPR1/HRP双价抗病基因转化

以厚皮甜瓜5d龄无菌苗子叶为外植体,MS和1/2MS为基本培养基,研究了添加6-BA、IAA和卡那霉素不同浓度,进行甜瓜再生体系与根癌农杆菌介导的转化体系的建立。结果表明:甜瓜子叶最适宜的不定芽分化培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.3mg/L,芽伸长培养基为MS+6-BA 0.75mg/L+IAA 0.3mg/L,生根培养基为1/2MS+IAA 0.3mg/L,适宜的转化条件为外植体预培养48h,农杆菌菌液浓度为OD₆₀₀=0.3～0.4,侵染时间为15min,22℃暗培养48～55h。经75mg/L的卡那霉素筛选,共获得再生甜瓜幼苗21株,其中8棵经PCR鉴定证明NPR1/HRP双价抗病基因已经整合到甜瓜基因组中,即转化率为38%。     

农杆菌介导的苜蓿子叶节转化体系的优化

以苜蓿品种“金皇后”为试材、以苜蓿子叶节为受体,通过农杆菌介导的转化方法,研究了抑菌浓度、子叶节生理期、侵染时间、共培养时间等因素对苜蓿子叶节遗传转化的影响,进而探索最佳转化条件,为建立高效的苜蓿子叶节遗传转化体系奠定基础.结果表明:用活化的OD600为0.6左右的农杆菌菌液进行浸染时,最佳受体材料为生长9日龄的子叶节,最佳浸染时间为20 min,共培养时间为3d,头孢霉素的抑菌浓度为500 mg/L.     

农杆菌介导木薯遗传转化过程中的几个影响因素

对农杆菌介导的木薯转化体系进行优化，结果表明，农杆菌侵染木薯的最适条件为：菌液浓度OD600=1．0，AS添加量150μm，侵染时间45min，共培养3d。     

黄瓜‘中国龙’毛状根诱导体系的建立

黄瓜是全球范围内重要的经济作物。建立黄瓜基因组测序品种‘中国龙’的毛状根诱导体系,可为今后分析黄瓜基因功能、挖掘黄瓜优良基因提供技术支撑。本文以‘中国龙’为材料,从种子表面灭菌方法、发根农杆菌的侵染浓度和共培养时间3方面,研究发根农杆菌菌株K599对‘中国龙’毛状根诱导的情况。结果表明,75%(φ)的乙醇先处理种子30 s,再用5%的次氯酸钠灭菌5~10 min的种子消毒方法,农杆菌菌液OD_(600)值在1.2左右时进行侵染,共培养2天,是获得‘中国龙’毛状根的适宜组合方法。PCR扩增结果证实,经这样诱导出的黄瓜毛状根中,发根农杆菌Ri质粒的rol C基因已在黄瓜毛状根基因组中整合并得到表达。试验探索出了一套适合‘中国龙’毛状根诱导的方法。     

小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因导入西瓜的遗传转化

研究了西瓜品种ZKM的再生体系和农杆菌介导小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellowmosaic virus,ZYMV)的外壳蛋白(cp)基因导入西瓜的遗传转化体系。结果表明,质量分数0.6%琼脂是适宜种子萌发的基本培养基,切取5d龄的西瓜无菌苗子叶为外植体,接种在MS+BA2.0mg/L诱导培养基上,诱导不定芽效率最高。选用75mg/L卡那霉素筛选西瓜抗性芽较为合适,外植体经预培养2～3d,菌液浓度以OD600nm值为0.4,共侵染10min有利于提高西瓜转化的效率。经PCR检测,ZYMVcp基因已经导入西瓜植株,转化频率为0.15%。     

根癌农杆菌介导的双孢蘑菇转基因体系的建立

构建了 gpd 启动子驱动的双孢蘑菇(Agaricus bisporus)双元表达载体,研究了受体材料、农杆菌浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)浓度和共培养时间对转化效率的影响.结果表明:不同受体的转化效率有较大的差异;以直径2～4 cm 的菌丝球为受体,当农杆菌菌液D600为0.2,侵染...     

应用绿色荧光蛋白报告基因优化辣椒的遗传转化体系

 以‘中椒5 号’甜椒和‘湘研10 号’辣椒子叶外植体为试料, 绿色荧光蛋白GFP 基因为报告基因, 通过观察检测愈伤组织的荧光表达与特异PCR 扩增鉴定, 分析了工程菌液pH 值、共培养基中乙酰丁香酮(AS) 的浓度、共培养时的温度与共培养时间对农杆菌转化辣椒效率的影响。结果表明, 在pH5.2、共培养基中加入AS 200 μmol·L ^{- 1} 、23 ℃黑暗条件下, 农杆菌与辣椒子叶共培养5 d , 有利于辣椒子叶的遗传转化,‘中椒5 号’、‘湘研10 号’愈伤组织荧光表达率均达到了40 %。     

草莓叶片再生体系的建立

以草莓‘红颜’和‘章姬’的叶片为外植体,研究暗培养时间、不同植物激素及浓度对不定芽诱导的影响,不同植物激素种类浓度及继代次数对不定芽增殖的影响,以及组培苗生根的最佳培养基。结果表明:草莓叶片不定芽诱导的最适宜培养基为MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D,暗培养天数15~20 d;不定芽增殖的最适宜培养基为2 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,‘红颜’组培苗适宜继代4代,‘章姬’组培苗适宜继代5次;MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA生根效果最好。     

甜蛋白基因MBLII 对莴苣的遗传转化

 以4 日龄莴苣(Lactua sativa L.) 无菌苗子叶为外植体, 通过根癌农杆菌介导,成功地进行了马槟榔甜蛋白基因MBLII 对莴苣的遗传转化。抗生素浓度和子叶外植体与农杆菌的共培养时间是影响转化的重要因素。附加卡那霉素( Kan) 50 mg/ L 的诱芽培养基MS I(MS+ NAA 0. 1 mg/ L+ 6􀀁BA 0. 1 mg/ L+ 羧卞青霉素500 mg/ L) 最适于侵染后子叶外植体的诱芽培养。在外植体与农杆菌共培养0~ 7 d 的范围内, 以共培养3 d 最佳( 生芽率58. 3%, 白化率29%) 。1~ 2 cm 再生芽移入诱根培养基MS II (MS+ NAA 0. 05 mg/ L+ Kan 50 mg/ L+ 羧苄青霉素300 mg/ L) 中, 诱根率可达100%。获得的抗性植株经组织化学及PCR 特异扩增鉴定和统计, 7. 6%阳性。Southern blot 结果证明MBL II 基因已整合到莴苣基因组中。     

根癌农杆菌介导的矮牵牛遗传转化体系研究

研究建立了根癌农杆菌介导的矮牵牛遗传转化体系.结果表明最佳的不定芽诱导分化和继代培养基为:MS 6-BA1.5 mg/L NAA0.2 mg/L;选择培养基中30 mg/L卡那霉素和300 mg/L的头孢霉素是适宜的抗生素使用浓度;侵染过程中0.05 MPa负压处理5 min和共培养过程中添加20 mg/L的乙酰丁香酮均可提高转化效率.卡那霉素抗性植株经2次选择继代培养后,PCR检测全部为阳性.对部分PCR阳性植株进行PGR-Southern杂交,证实外源基因已整合进入矮牵牛基因组中.     

根癌农杆菌介导荔枝遗传转化研究

利用带有内含子的GUS基因(uidA)的瞬时表达,研究影响根癌农杆菌介导荔枝胚性愈伤组织遗传转化的若干因素。结果表明:在AGL-1、LBA4404和EHA105三种菌株中,EHA105对荔枝胚性愈伤组织的侵染力最强;采用2d的共培养时间既有较高的瞬时表达率,又避免了农杆菌的过度生长;0.5×10~8个细胞/mL的菌液密度为最佳侵染浓度;继代培养15d的胚性愈伤组织处于最旺盛分裂的时期,是转化的合适受体;愈伤组织转化前干燥处理对uidA瞬时表达率的提高有一定的促进作用。使用优化的农杆菌侵染条件获得了稳定表达uidA基因的荔枝抗性愈伤组织。     

根癌农杆菌介导蓝猪耳转化系统的建立

 通过对影响根癌农杆菌介导蓝猪耳转化效果各种因素的研究, 建立了蓝猪耳高效稳定的遗传转化系统。研究结果表明, 农杆菌侵染叶片外植体效率最高; 外植体预培养不利于农杆菌的侵染; 乙酰丁香酮能大大提高根癌农杆菌转化蓝猪耳的效率。另外, 菌液浓度、侵染和共培养的时间及再生的途径等均对转化效率有一定的影响。叶片外植体与农杆菌共培养后, 经过抗性芽的诱导、根的再生, 70 d左右就可以获得抗性苗。抗性植株经GUS染色、PCR分析和Southern blot检测, 外源基因已经整合到蓝猪耳基因组中, 转化频率为7%～8%。     

甜菜转基因体系的相关影响因素研究

以16种基因型的二倍体甜菜（Beta vulgarisl L．）为材料,建立并优化了甜菜的植株再生体系;对影响甜菜转基因的相关因素进行了比较分析,确定了抗生素标记基因的适宜筛选浓度为200mg／L;菌液适宜浸染浓度OD600为0．3;浸染最适时间为10min;外植体与农杆菌适宜共培养时间为4d;添加乙酰丁香酮的适宜浓度为100μmol／L。研究结果的获得,为完善甜菜的遗传工程以及甜菜基因组学的相关研究奠定基础。     

根癌农杆菌介导乙肝病毒表面抗原基因转化樱桃番茄体系优化

以樱桃番茄为试材,建立了樱桃番茄高频再生体系,并对农杆菌介导乙肝病毒表面抗原(HBsAg)基因转化樱桃番茄的条件进行了优化研究。结果表明:11d苗龄的子叶外植体在MS+6-BA 3.0mg/L+IAA 0.2mg/L的培养基上预培养2d后,用OD值为0.6的农杆菌侵染15min,可使樱桃番茄植株达到最佳的遗传转化效果。     

大白菜AB-81高频再生系统的建立及gus A基因瞬时表达的研究

 以大白菜自交系AB-81 的子叶和真叶切块为外植体, 建立了高频不定芽离体再生系统。在MS 附加TDZ 0. 2 mg/L , NAA 2. 0 mg/L , AgNO₃ 10 mg/L 和ABA 0. 25 mg/L 的再生培养基上, 子叶和真叶的不定芽再生频率分别达到93. 3%和90. 0%, 每块外植体的不定芽数达3～6 个, 最多达21 个。以EHA105/ pMOG410 为载体转化侵染大白菜AB-81 的子叶, 获得较高gus A 基因瞬时表达频率的条件为: 子叶预培养2～3 d ; 侵染的工程菌液的浓度OD 0. 3～0. 5 ; 侵染时间2～10 min ; 共培养时间2～3 d。     

龙葵毛状根诱导条件的研究

以发根农杆菌A4、C58C1和A1476为诱导菌株,探讨外植体类型、发根农杆菌种类、侵染时间、预培养时间、菌液浓度和共培养天数对龙葵毛状根诱导率的影响。结果表明:外植体以叶片诱导率最高;发根农杆菌A4、C58C1和A1476侵染龙葵叶片均能诱导出毛状根,C58C1诱导率较高;较佳侵染时间为5min;发根农杆菌浓度在OD600=0.6时诱导效果较好;预培养和共培养时间均为2d时诱导率较高。该试验为大量生产毛状根,并利用毛状根培养技术生产药物龙葵碱提供了试验基础。