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[目的]探讨一种新的获取海洋贝类基因组DNA的取样方法,为开展珍稀贝类的分子生物学研究提供参考。[方法]以文蛤、栉江瑶、翡翠贻贝、香港巨牡蛎、毛蚶为供试材料,以闭壳(合)肌全基因组DNA作为参考,采用常规酚-氯仿法抽提贝类贝腔液基因组DNA,使用生物光度计法、琼脂糖凝胶电泳、目的片段扩增测序验证其质量,并建立系统发育树检测其来源的真实可靠性。[结果]采用常规酚/氯仿基因组DNA提取方法获得的贝腔液DNA质量优于闭壳(合)肌DNA,蛋白质、多酚色素污染较少,完全满足目的片段扩增测序;系统发育进化树则证实了贝腔液并非外源污染。[结论]从贝腔液中获取基因组DNA是完全可行的,并可将其用于目的基因片段的扩增。 相似文献
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报道了一种专供PCR分析的快速微量提取拟南芥基因组DNA的方法,该法大大简化了传统提取3-法的步骤,而且用氯仿一异戊醇代替传统的酚,克服了由于酚的残留带来的后续PCR等操作上的困难。用该法提取的DNA样品质量较高,特别适合一些突变体及转基因植株的PCR初步鉴定。 相似文献
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报道了一种专供PCR分析的快速微量提取拟南芥基因组DNA的方法。该法大大简化了传统提取方法的步骤,而且用氯仿-异戊醇代替传统的酚,克服了由于酚的残留带来的后续PCR等操作上的困难。用该法提取的DNA样品质量较高,特别适合一些突变体及转基因植株的PCR初步鉴定。 相似文献
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一种适合枣合酸枣基因组DNA的提取方法 总被引:7,自引:0,他引:7
研究比较了CTAB法和SDS法在枣和酸枣基因组DNA提取中的效果,并分析了取样时间、部位、样品状况、抗氧化剂和不同纯化处理等对所提DNA质和量及其RAPD扩增效果的影响。结果表明:用改良后的CTAB法优于SDS法,可有效地去除多糖,所提DNA的质和量均能满足PCR扩增要求。取样时间与部位对所提基因组DNA的质量无影响,但与产量有关,以旺盛生长期的幼叶或嫩梢尖为佳。样品采用液氧处理-70℃低温保存, 相似文献
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目前已报道的常见的基因组DNA提取方法有经典酚醇法、盐析法、碘化钾法、煮沸法等,其中酚醇法根据其裂解液的不同又有CTAB、SDS、ROSE等具体方法,本试验对经典的CTAB法进行了改进,从酒精保存的西施舌组织中提取得到质量高的基因组DNA,以此为模板扩增ITS2效果很好。 相似文献
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一种木本果树基因组DNA提取方法研究 总被引:26,自引:0,他引:26
研究了一种可有效排除细胞内多酚类等杂质污染的简便、快捷、经济的果树基因组DNA提取方法.其改良策略是:在细胞核被裂解前去除细胞质中的多酚类等杂质,防止多酚类物质被氧化,从而排除多酚类等杂质的干扰.利用这一方法提取的柑桔、枇杷、梨、苹果、湖北海棠、桃、樱桃等7种果树基因组DNA均能被限制性内切酶完全消化,获得理想的Southern杂交结果,也可作为PCR模板应用,成功地进行特异性基因扩增和RAPD. 相似文献
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一种适合枣和酸枣基因组 DNA 的提取方法 总被引:29,自引:2,他引:29
研究比较了CTAB法和SDS法在枣和酸枣基因组DNA提取中的效果 ,并分析了取样时间、部位、样品状况、抗氧化剂和不同纯化处理等对所提DNA质和量及其RAPD扩增效果的影响。结果表明 :用改良后的CTAB法优于SDS法 ,可有效地去除多糖 ,所提DNA的质和量均能满足PCR扩增要求。取样时间与部位对所提基因组DNA的质量无影响 ,但与产量有关 ,以旺盛生长期的幼叶或嫩梢尖为佳。样品采后液氮处理 - 70℃低温保存 ,与新鲜材料所提DNA差异不大。抗氧化剂可有效地阻止多酚类物质氧化变褐 ,1%的 β 巯基乙醇即可满足要求。用于RAPD分析的模板DNA中含有RNA和少量蛋白质对扩增结果无影响 相似文献
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采用6种方法对太湖底泥基因组DNA进行提取,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定和PCR扩增效果等反映DNA纯度和质量的指标,综合分析不同提取方法的优劣.结果显示,在提取过程中使用溶菌酶优于使用蛋白酶,冻融和TENP前处理过程耗时且效果不佳,二次沉淀在提高DNA纯度中起关键作用.结果表明,溶菌酶-SDS-二次沉淀法是一种适用于太湖底泥基因组DNA的提取方法,提取的DNA质量好、纯度高,更胜于包括土壤DNA快速抽提试剂盒在内的其他5种方法,可直接用于对DNA质量要求较高的后续试验中. 相似文献
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一种快速提取甘薯基因组DNA方案的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
建立了一种小量快速提取甘薯基因组DNA的方法。用该法以甘薯幼叶为实验材料,用小量快速法提取甘薯基因组DNA。提取的DNA经酶切、琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明DNA质量较好,所提取的DNA可用于RAPD、AFLP等技术。此方法具有提取速度快、利于规模化提取、DNA质量好和经济实用等优点,为甘薯及其它相关植物基因组DNA的提取提供了一种快速、简便的途径。 相似文献
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从植物种子中快速获取高质量DNA的方法(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]该研究旨在寻求一种从植物干种子中简单快速提取高质量基因组DNA的有效方法。[方法]将种子打磨成粉,取100mg粉末加入高盐提取液抽提基因组DNA。采用超微量分光光度计检测、PCR及酶切的方法检验DNA的得率和质量。[结果]从100mg7种常见作物种子粉末中可以得到619.67~1811.21ng基因组DNA,A260/A280比值在1.87~2.07之间,其纯度和质量适合进行PCR及酶切分析。通过普通PCR方法分别对7种作物的特异性内源基因片段进行扩增,结果均能扩增到明显的目的条带。用EcoRV和HindIII两种核酸内切酶能对所得的DNA充分酶切。[结论]该方法能快速地从干种子中提取到高质量的DNA。 相似文献
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xiangyan@ahau.edu.cn 《勤云标准版测试》2006,(5)
为获得一种较为理想的杨树基因组DNA的提纯方法,根据提取植物基因组DNA的经验,优化了Clark利用CTAB提取植物基因组DNA的方法。加入了一系列的去除蛋白、酚类物质,利用MgCl2沉淀DNA,通过与三种常规的提纯方法进行比较,经紫外检测和电泳检测,结果表明优化的方法获得了高质量的DNA,是较为理想的杨树基因组DNA的提纯方法。能满足RAPD及其他分子生特学研究的需要。在试验中还利用该方法提纯了五个品种的杨树基因组DNA,采用RAPD分子标记技术,在引物S174作用下成功地进行了PCR扩增及品种鉴定。 相似文献
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从一株革兰氏阳性菌微杆菌中快速高效提取基因组DNA的新方法(摘要) 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]探索可以快速从革兰氏阳性菌微杆菌中提取高质量基因组总DNA的新方法。[方法]采用3种不同方法提取微杆菌基因组DNA,并进行DNA纯度、完整度鉴定及16SrDNA扩增检测。[结果]紫外吸收值表明,采用改良方法所获DNAA260/A280大于1.80,A260/A230为2.0,5ml过夜菌液可得6.5μg基因组总DNA。DNA凝胶电泳结果表明DNA完整度高且无RNA污染。以此方法提取的基因组总DNA样品为模板,可灵敏有效扩增16SrDNA基因。[结论]该方法用时短,操作简易,纯度好、产率高、成本低,适用于革兰氏阳性菌各相关的分子生物学研究。 相似文献
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一种提取大豆疫霉菌菌丝体基因组DNA的新方案 总被引:2,自引:0,他引:2
大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)侵染大豆引起的大豆疫霉根腐病是大豆生产上的毁灭性病害之一.关于该病菌菌丝体基因组DNA的提取方法,目前国内外已经报道了很多,最常规的一种就是CTAB法,但其在提取前病原菌的培养上需要先在固体培养基上培养,然后再转至液体培养基中培养,整个过程耗时长、步骤繁琐、效率低、安全性低.试验直接以固体培养基上的菌丝体为原料,采用尿素提取液提取菌丝体基因组DNA的方法,耗时短,步骤简捷,提高了效率和安全性. 相似文献
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[目的]建立一种快速提取玉米基因组DNA的方法。[方法]对改良CTAB法进行进一步简化,不需要进行沉淀、洗涤、溶解和RNA消化等步骤,建立一种快速提取玉米基因组DNA的方法。[结果]该方法获得的DNA完整性及PCR扩增效果与试剂盒提取方法相比无明显差异;经过对样品ELISA检验可知,该方法得到的DNA用于PCR检测结果准确。[结论]该方法能够满足转基因玉米PCR检测中快速、高效、准确、高通量的要求。 相似文献