氯前列醇钠对卵巢癌细胞SKOV3体外生长的影响

为观察氯前列醇钠(PG-Cl)对卵巢癌细胞(SKOV3)增殖和凋亡的影响,应用细胞计数法测量癌细胞生长曲线,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞体外增殖情况,吉姆萨染色法细胞观察形态学,Ho-echest-33342凋亡染色法检测加药后细胞凋亡情况。结果显示,PG-Cl对SKOV3细胞抑制率的大小与药物浓度和时间成正比,在高浓度药物作用下效果显著。而在150μg/mL PG-Cl作用12 h后细胞发生凋亡,荧光显示核质固缩呈圆形或椭圆形团块。结果表明,PG-Cl对SKOV3细胞体外生长有显著抑制作用,并诱导细胞发生凋亡。     

顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞凋亡影响

为研究顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞CHMp凋亡影响,本试验采用不同浓度的顺铂以不同作用时间处理细胞,用MTT法检测细胞活性,通过透射电镜观察CHMp细胞形态学变化,用流式细胞仪研究CHMp细胞凋亡和周期。结果显示,CHMp细胞生长受浓度和时间双重依赖,浓度越高,时间越长,抑制越明显,在电镜下观察细胞出现明显的凋亡形态,同时5μmol/L顺铂作用24 h后细胞阻滞于G1/S期,比例高达75.12%。结果表明,顺铂能抑制CHMp增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞G1/S期。     

姜黄素与根皮素联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究

试验旨在研究姜黄素与根皮素联合使用对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用。采用微量肉汤法测定亚抑菌浓度；菌落分析仪测定抑菌圈大小；酶标仪微量法测定OD₂₆₀和OD₂₈₀数值、碱性磷酸酶活力(AKP)、乳酸脱氢酶活性(LDH);SDS-PAGE凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白。结果表明：与对照组相比，15.625μg/m L姜黄素、根皮素分别作用于金黄色葡萄球菌16 h时，均显著抑制其生长；与姜黄素、根皮素单独处理组相比，15.625μg/m L姜黄素和根皮素联合作用显著抑制金黄色葡萄球菌生长；与对照组相比，姜黄素、根皮素单独与联合处理均显著增加OD₂₆₀、OD₂₈₀数值和AKP活力、降低LDH活性以及减少菌体胞内总蛋白含量。综上，姜黄素与根皮素联合使用对金黄色葡萄球菌的抑菌作用优于单独使用。     

脂多糖对奶牛子宫内膜上皮细胞毒性作用研究

本试验通过传代培养奶牛子宫内膜上皮细胞,以0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL 7个LPS浓度梯度刺激细胞,分别于刺激后12h、24h、36h 3个时间段做MTT细胞毒检测,同时进行细胞形态学观察,研究LPS对子宫内膜上皮细胞的毒性作用。结果发现：0.1μg/mL、1μg/mLLPS组细胞形态学无明显改变;10μg/mL、50μg/mL、100g/mL LPS组细胞形态学与对照组相比有明显改变,500μg/mL、1000μg/mL LPS组细胞发生裂解、死亡。MTT试验结果表明LPS对细胞的抑制作用呈浓度与时间依赖关系,随着LPS浓度的增加和刺激时间的延长,细胞抑制率明显增加,细胞活力明显降低。     

橙皮苷对3种霉菌毒素处理的HepG2细胞增殖和迁移的影响

探讨橙皮苷对3种霉菌毒素处理的HepG2细胞增殖和迁移作用的影响。采用MTT、Griess、细胞划痕愈合试验分别检测细胞活力、细胞分泌NO、细胞迁移率。结果3种毒素对HepG2细胞增殖的影响随毒素浓度的增加呈现先促进后抑制的作用,低浓度DON、OTA(0.04μmol/L和0.08μmol/L),ZEN(<2μmol/L)显著提高HepG2细胞活力及促进增殖,高浓度霉菌毒素明显降低HepG2细胞活力及抑制细胞增殖。与霉菌毒素组比较,橙皮苷组HepG2细胞活力降低及增殖减弱,表示橙皮苷能缓解霉菌毒素对细胞的毒性。与空白对照组比较,霉菌毒素组HepG2分泌NO量显著降低,不同浓度及不同霉菌毒素对NO分泌没有明显影响;与霉菌毒素组比较,橙皮苷组不同浓度DON处理的细胞分泌NO差异不显著。低浓度DON毒素(0.08μmol/L^2μmol/L)处理HepG2细胞24、36、48 h后,DON毒素能极显著促进HepG2细胞迁移,随着霉菌毒素对细胞处理时间延长细胞迁移快,而高浓度DON毒素(10μmol/L、50μmol/L)对促细胞迁移影响显著低于低浓度DON。结果低浓度DON霉菌毒素促进HepG2细胞增殖及迁移,表明DON毒素对HepG2具有潜在的致癌性,橙皮苷能抑制HepG2细胞增殖及缓解霉菌毒素毒性的作用。     

低浓度玉米赤霉烯酮对TM3细胞增殖及γH2AX焦点形成的影响

为探讨玉米赤霉烯酮(ZEA)的雄性生殖毒性及其机理,本试验研究了低质量浓度ZEA暴露对小鼠睾丸间质细胞株TM3细胞增殖及核内γH2AX荧光焦点产生的影响。以TM3细胞为材料,加入不同质量浓度的ZEA,设0,5,10,20μg/L ZEA染毒组,培养72h后,应用噻唑蓝比色法检测TM3细胞增殖活力,观察细胞周期分布及其调控蛋白Cyclin D1、CDK4表达情况,同时应用免疫荧光、蛋白免疫印迹法检测TM3细胞中γH2AX含量的变化。结果显示,染毒72h后,低质量浓度的ZEA对TM3细胞的生长具有明显的促进作用,检测细胞周期发现10μg/L ZEA染毒组G1/G0期细胞分布百分比显著下降(P<0.05),S期细胞分布百分比显著升高(P<0.05),20μg/L ZEA染毒组G1/G0期细胞分布百分比极显著下降(P<0.01),S期细胞分布百分比显著升高(P<0.05);通过免疫荧光发现,5μg/L ZEA染毒组中部分细胞开始出现1至2个荧光焦点,与对照组相比,10μg/L ZEA染毒组和20μg/L ZEA染毒组出现γH2AX荧光焦点的细胞数量明显增多,荧光焦点数呈极显著升高(P<0.01);同时通过蛋白免疫印迹法发现,ZEA能够促进γH2AX蛋白表达量的增加,对细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、CDK4的表达也有明显的促进作用。低质量浓度的ZEA有促进细胞增殖的作用,并可诱发TM3细胞的DNA双链断裂,呈剂量-效应关系。     

采用泊洛沙姆为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对大鼠脾细胞的增值作用

为研究泊洛沙姆作为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度的泊洛沙姆407、FMDV-O型泊洛沙姆佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)、FMDV O型多肽抗原液(7.06 mg/m L,用PBS稀释至50μg/m L)及FMDV O型油乳佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)对伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A,Con A)处理淋巴细胞的增殖率。结果表明,与空白对照组相比较,泊洛沙姆各浓度对脾细胞均有增殖作用,多肽疫苗在高浓度的时候对细胞有抑制作用,随着作用浓度的降低,又进而转为细胞增殖作用。     

甘草提取物(GC-X)体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用的研究

为了探讨甘草提取物(GC-X)体外对HeLa细胞的促凋亡作用,试验采用MTT比色法观察了GC-X对HeLa细胞增殖的抑制情况,AO/EB双荧光染色法和透射电镜观察了细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪测定了各组细胞的凋亡率。结果表明:GC-X体外对HeLa细胞的生长、增殖的抑制作用具有剂量和时间依赖性,其48 h的IC50仅为11.24μg/m L;AO/EB双荧光染色和透射电镜观察可见,GC-X作用后He La细胞均出现典型的凋亡细胞形态;流式细胞仪检测GC-X对HeLa细胞的诱导凋亡作用呈现明显的浓度依赖性。说明GC-X可抑制HeLa细胞的增殖并具有诱导细胞凋亡的作用。     

喜树碱对NIH/3T3细胞TLR3表达及活化的影响

为研究喜树碱(CPT)对小鼠成纤维细胞NIH/3T3中Toll样受体3(TLR3)的表达及活化的影响,本实验利用CCK-8试剂盒测定了CPT在不同浓度下、不同作用时间对NIH/3T3细胞的毒性作用,并确定CPT对NIH/3T3细胞的基本无毒浓度为1μg/mL。通过流式细胞术检测CPT作用NIH/3T3细胞表明,TLR3平均荧光强度与对照组相比显著增强,表明TLR3表达增加。此外,ELISA试剂盒检测结果显示CPT作用后IFN-β表达量增加,并高于阳性对照组,差异极显著(p<0.01)。本研究表明CPT对NIH/3T3细胞的TLR3具有显著的激动作用。     

菟丝子黄酮对BPA致小鼠睾丸间质细胞分泌雄性激素异常的保护作用

为研究菟丝子黄酮对双酚A(BPA)干扰小鼠睾丸间质细胞激素分泌的缓解作用,以TM3小鼠睾丸间质细胞为对象,采用1μg/mL～500μg/mL的菟丝子黄酮与TM3(小鼠睾丸间质细胞)细胞共同培养24 h,以MTT法检测细胞增殖,确定菟丝子黄酮对TM3细胞的安全剂量。然后采用1μmol/mL～200μmol/mL的双酚A干扰TM3细胞24 h,以MTT法检测细胞增殖,通过TM3细胞的相对存活率,确定BPA最适染毒剂量;最后先用菟丝子黄酮和TM3细胞共同培养4 h后,再用BPA干扰TM3细胞24 h。通过ELISA检测细胞上清液睾酮(T)和黄体生成素(LH)的含量,并分析菟丝子黄酮对BPA干扰小鼠睾丸间质细胞激素分泌的缓解作用。结果表明,250μg/mL～400μg/mL的菟丝子黄酮(等差法)对TM3细胞作用24 h后,有极显著的增殖效果(P<0.01);80μmol/mL的BPA对TM3细胞作用24 h后,细胞存活率为81%,可作为最适染毒剂量;菟丝子黄酮保护4 h后,再用BPA干扰12 h、24 h后,不同浓度的菟丝子黄酮可显著升高TM3细胞睾酮和黄体生成素的水平(P<0.05)。说明菟丝子黄酮对BPA致小鼠睾丸间质细胞睾酮和黄体生成素的分泌异常具有明显的保护作用。     

沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞的调节作用研究

试验研究沙葱多糖（Allium mongolicum regel polysaccharides）对绵羊外周血淋巴细胞增殖及一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。试验设置不同浓度（0~250μg/ml）的沙葱多糖和不同的作用时间（24、48、72 h），以MTT比色法检测淋巴细胞增殖；以培养24 h的绵羊外周血淋巴细胞为研究对象，以微板法、硝酸还原酶法分别测定NO及iNOS。结果表明，沙葱多糖浓度为50~100μg/ml时抑制淋巴细胞的增殖，当浓度为150~250μg/ml时促进淋巴细胞的增殖，且作用时间为24 h时增殖效果最强。较低浓度的沙葱多糖（50~100μg/ml）抑制淋巴细胞分泌NO，随着浓度的加大，NO分泌量增加。沙葱多糖对淋巴细胞内iNOS 活性没有显著影响（P>0.05）。因此，沙葱多糖能够影响淋巴细胞的增殖，释放 NO 及 iNOS，并且呈现量效和时效关系，说明沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞具有免疫调节作用。     

奶牛外周血单个核细胞增殖反应最优条件的筛选

为了建立奶牛外周血单个核细胞增殖反应的MTT检测方法,对影响增殖反应的刺激原及浓度、细胞浓度、培养时间等条件进行了探索性研究。结果表明,MTT法检测的最佳条件是:ConA浓度为2.5μg/mL,细胞浓度为1×10⁶ cells/mL,培养时间为48 h;或者浓度为30μg/mL,细胞浓度为1×106 cells/mL,培养时间为48 h;或者浓度为30μg/mL,细胞浓度为1×10⁶ cells/mL,培养时间为48 h。     

淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的调节作用研究

为研究淫羊藿多糖(EPS)体外增强免疫活性,采用酶学检测法测定淫羊藿多糖活性及对鸡脾脏淋巴细胞的增殖作用。根据活性检测结果,选择用50%的乙醇醇沉的淫羊藿多糖进行安全浓度试验;根据安全浓度检测结果,选择2 500.00μg/mL、1 250.00μg/mL、625.00μg/mL、312.50μg/mL、156.25μg/mL 5个浓度,用MTT法测定淫羊藿多糖单独和协同LPS刺激对鸡脾脏淋巴细胞增殖率的影响。结果显示:不同浓度乙醇醇沉的淫羊藿多糖均具有良好的活性,但乙醇浓度为50%醇沉的淫羊藿多糖活性最佳。淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的安全浓度为2 500.00μg/mL。淫羊藿多糖无论是单独还是协同LPS刺激脾脏淋巴细胞,均显示出不同程度增强脾脏淋巴细胞的活性,且均在浓度为1 250.00μg/mL时显示出较强的体外增强鸡脾脏淋巴细胞增殖的能力,说明淫羊藿多糖在安全浓度范围内可刺激鸡脾脏淋巴细胞增殖,从而实现调节免疫功能的作用。     

镰形棘豆乙醇提取物对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

采用细胞增殖试验(MTT法)、Annexin-V/PI双重染色法检测镰形棘豆提取物对体外培养的肝癌细胞增殖抑制及凋亡的影响。结果显示,镰形棘豆提取物可显著抑制人肝癌细胞的增殖活性,尤其当浓度为250μg/mL和500μg/mL时,对肝癌细胞Smmc-7721抑制率均超过了60%,并且高剂量组中处于凋亡早期癌细胞的比率显著高于对照组(P0.05)。结果表明,镰形棘豆提取物对癌细胞增殖有显著的抑制作用,其作用机制可能与其抑制癌细胞增殖活性和诱导癌细胞凋亡有关。     

MTT比色分析法检测山羊白细胞介素—2方法的建立

以伴刀豆蛋白A（ConA)活化的山羊外周血单核细胞作为应答细胞，建立了检测山羊白细胞介素－2（IL－2）的MTT比色分析法。结果表明，以3μg/mL的ConA浓度刺激，经过36h活化所得的应答细胞活性最好；MTT的用量及作用时间分别以20μL（50μg/μL)及4h为最佳；IL－2与活化细胞的作用时间以18h为最适。     

内毒素联合替米考星致鸡原代肝细胞损伤机制的研究

旨在探索内毒素(LPS)和替米考星联合诱导鸡肝细胞损伤的机制。选取400g左右海蓝公鸡,采用改良二步罐流法分离肝细胞。用噻唑盐比色法(MTT法)测定细胞存活率,改良赖氏法测定细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的含量并筛选出LPS、替米考星单独致鸡肝细胞损伤的最佳剂量和LPS与替米考星联合致鸡肝细胞损伤的最佳剂量,探讨此复合式肝损伤过程中的相互影响。Hoechest 33342对肝细胞染色、Caspase-3活性的测定和流式细胞仪来探究细胞是否出现凋亡。结果表明:LPS浓度为30μg/mL,替米考星浓度为120μg/mL时,肝细胞存活率极显著降低(P0.01);检测上清中ALT、AST出现极显著差异(P0.01),肝细胞损伤显著;细胞荧光照片可看出,凋亡细胞明显增多,Caspase-3活性明显升高,流式细胞仪检测细胞凋亡率明显升高。结果提示,内毒素和替米考星可单独诱发鸡肝细胞损伤并造成细胞凋亡,二者联合可能会使损伤作用增强。     

活性氧参与脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7活化诱导凋亡

研究活性氧(ROS)与脂多糖(LPS)诱导后巨噬细胞活化诱导凋亡的关系。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用不同浓度LPS诱导细胞,添加100μmol/L H2O2增加细胞内ROS,或用姜黄素(7.5μmol/L)降低细胞内ROS;流式细胞术分析细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和ROS。结果显示,RAW264.7细胞凋亡和细胞内ROS水平均随LPS浓度增加而增加,高浓度的LPS导致MMP下降;与LPS(8μg/m L)单独作用组比,H2O2增加ROS,并导致凋亡细胞百分率增加;姜黄素降低LPS诱导的细胞凋亡,同时减少细胞内ROS。表明活性氧参与LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7活化诱导凋亡。     

茶皂素对奶牛乳腺上皮细胞增殖及乳脂合成关键酶的影响

本试验旨在研究茶皂素对乳腺上皮细胞增殖、乳脂合成关键酶的影响。采用酶消化法分离获取乳腺上皮细胞,经免疫荧光鉴定后,分别添加不同浓度[0(对照)、0.05、0.25、0.50、1.00、5.00、10.00、20.00、40.00、60.00、80.00、100.00μg/mL]的茶皂素溶液培养,然后进行如下操作:1)采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的茶皂素对乳腺上皮细胞增殖的影响;2)采用酶联免疫分析(ELISA)试剂盒测定细胞中乙酰辅酶A羧化酶(ACACA)、脂肪酸合成酶(FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)的含量;3)采用实时荧光定量PCR的方法测定FASN、ACACA、SCD基因mRNA相对表达水平。结果显示:1)茶皂素浓度为0.05~20.00μg/mL对细胞增殖无显著影响(P0.05),浓度为20.00~100.00μg/mL时显著抑制细胞增殖(P0.05);2)细胞FASN、ACACA、SCD的含量在对照组和0.50、5.00、20.00μg/mL浓度组间无显著差异(P0.05);3)细胞与茶皂素共育24、48h后,与对照组相比,0.50、5.00、20.00μg/mL浓度组SCD基因mRNA相对表达水平显著降低(P0.05)。综合以上,茶皂素对奶牛乳腺上皮细胞增殖及乳脂合成关键酶SCD基因mRNA表达具有一定抑制作用。     

姜黄素对水牛卵巢颗粒细胞体外培养的影响

本试验研究了添加姜黄素对水牛卵巢颗粒细胞体外培养过程中增殖、凋亡自噬及间隙连接等生物学过程的影响。设置不同浓度(1,5,10,25,50,100μg/m L)的姜黄素,对颗粒细胞的凋亡、增殖、自噬和间隙连接等基因与蛋白的表达进行定性与定量检测,发现高浓度姜黄素会导致细胞凋亡标记Caspase-3及自噬基因Beclin-1的基因表达量上升,间隙连接蛋白Cx43基因表达量下降,细胞增殖标记PCNA表达量无显著变化。研究结果为姜黄素在调节卵巢颗粒细胞功能提供了一定的理论依据。     

用 MTT 比色分析法检测牛白细胞介素-2的研究

以伴刀豆蛋白 A(Con A)活化的牛外周血单个核细胞(PBM)作应答细胞,对四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测牛白细胞介素-2(IL-2)的各项参数作了系统探讨,首次建立了检测牛 IL-2的 MTT 比色分析法。结果表明,活化应答细胞时的细胞密度以2.5～5×10~6个/ml、Con A 浓度以12.5μg/ml、活化时间以48～72小时为宜;MTT 比色分析的最适条件为:应答细胞密度1～2×10~5个/孔,α-甲基-D-甘露糖苷(α-mM)终浓度为12.5mg/ml,样品与应答细胞作用时间为36～48小时,MTT 用量为50μg/孔,MTT 作用时间为2.5小时,结果证明,本方法可检出少至390个活应答细胞、0.03个单位(U)的重组人 IL-2(rhIL-2)和2~(-5)稀释的含牛 IL-2培养上清.本方法避免了传统~3H-胸腺嘧啶核苷(TdR)掺入法的诸多不便,是一种方便、敏感、可靠和安全的牛IL-2检测法.