围产期母猪的免疫状态及与皮质醇的关系

【目的】研究围产期母猪的免疫状态,并初步探讨免疫状态与应激的关系。【方法】在分娩前14d、分娩当天和分娩后14d,采集初产母猪血样,检测血清皮质醇、结合珠蛋白及外周血淋巴细胞转化率和嗜中性细胞吞噬能力,采用实时荧光PCR检测外周血嗜中性细胞和淋巴细胞糖皮质激素受体基因(GR)mRNA的表达情况。【结果】分娩当天母猪血清皮质醇和结合珠蛋白的质量浓度分别极显著和显著高于产前14d和产后14d的水平。分娩当天母猪外周血嗜中性细胞吞噬率较产前14d减少40.56%(P0.01),在产后14d仍未恢复到产前14d的水平(P0.01)。分娩当天母猪外周血淋巴细胞转化率较产前14d减少40.00%(P0.01),在产后14d依然维持在较低水平。分娩当天母猪外周血嗜中性细胞GR基因mRNA表达较产前14d减少43.54%(P0.01),产后14天基本上恢复到产前14d的水平;外周血淋巴细胞GR基因mRNA表达较产前14d减少46.67%(P0.01),产后14d依然维持在较低水平。嗜中性细胞和淋巴细胞GR基因mRNA表达与血清皮质醇的水平呈极显著的负相关关系(P0.01)。【结论】围产期母猪处于高度应激、健康水平下降和免疫抑制的生理状态。皮质醇可能通过GR途径调节嗜中性细胞和淋巴细胞GR基因mRNA表达,从而影响其功能。     

围产期奶牛血清中阴阳离子状况的分析

为了解围产期奶牛机体主要阴阳离子水平及其变化,在黑龙江某3个集约化奶牛场分别选取荷斯坦经产奶牛8头,分别在产前21 d、14 d,7 d、分娩当天、产后7 d、14 d、21 d尾静脉采血,并测定Cl、Na、K、Mg、Ca、P等离子血清浓度.结果显示围产期奶牛血清Cl、Na、K、P含量在分娩后呈现降低趋势;Ca含量呈分...     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对PC12细胞凋亡的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导PC12细胞凋亡及对相关基因Bcl-2、Bax、Bid mRNA和蛋白cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9表达水平的影响。[方法]用不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng·m L~(-1))对PC12细胞染毒24 h,采用透射电镜观察、流式细胞术、荧光定量PCR、Western-blot等方法,研究DON对PC12细胞的超微结构、凋亡率、凋亡相关基因及蛋白表达的影响。[结果]不同浓度的DON均可诱导细胞凋亡,各试验组细胞凋亡率均极显著高于对照组(P0.01),并随着染毒剂量的增加而升高,在1 000 ng·m L~(-1)时达到峰值;与对照组相比,各试验组Bax mRNA表达水平和Bax/Bcl-2值均极显著增加(P0.01),Bcl-2 mRNA表达水平在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01),而Bid mRNA表达水平在DON浓度超过250 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01);Western-blot检测结果显示,各试验组cleaved-Caspase 9蛋白表达量均极显著高于对照组(P0.01),而cleaved-Caspase 3蛋白表达量在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著增加。[结论]DON能够诱导PC12细胞发生凋亡,凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bid及蛋白Caspase3、Caspase9等参与了DON诱导PC12细胞凋亡的调控。     

运动对心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

通过研究不同运动强度对心肌细胞凋亡基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响,探讨了运动对心肌细胞凋亡的作用机制。将大鼠分为3组(正常对照组、一般游泳有氧训练组和力竭性过度训练组)并建立运动模型;采用实时荧光定量PCR技术观察心肌细胞中凋亡基因Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达;采用Western blot方法观察Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,一般游泳有氧训练组大鼠调控基因Bcl-2表达显著增加,对细胞的凋亡起到一定的抑制作用;而力竭过度训练组中心肌细胞相关调控基因Bcl-2表达下降,Bax、Caspase-3的表达升高促进凋亡。因此推定超负荷的运动会加重大鼠心肌细胞的凋亡,凋亡的发生可能与调控基因Bcl-2、Bax和Caspase-3有关。     

灯盏乙素抑制热应激诱导猪肾小管上皮细胞凋亡研究

灯盏乙素(Scu)为灯盏花中提取的单一黄酮类化合物,具有清热解毒和保护细胞免受热应激损伤的作用。试验将不同浓度Suc培养的猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)在42℃下热应激1 h,采用RNA干扰法沉默细胞HSP72基因表达,荧光定量PCR和Western blot检测细胞热休克蛋白(HSP)70、Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt-c)和caspase-3裂解。结果表明,Scu显著增加细胞Bcl-2蛋白和HSP70蛋白水平,增加Bcl-2/Bax比值,抑制Cyt-c的释放及pro-caspase-3裂解和caspase-3表达;但沉默HSP70后,细胞Cyt-c释放和caspase-3表达均显著增加。由此可知,Scu抑制LLC-PK1凋亡,保护细胞免受热应激损伤。     

天府肉鸭发育过程中胸腺Bcl-2,Bax基因及蛋白的表达

为探讨胸腺淋巴细胞凋亡的调控机制,将65只天府肉鸭分为22,24,26 d胚龄3个组和胚后0(新生雏),3,5,8,14,17,20,26,29,32周龄10个组,采用免疫组织化学和原位杂交方法研究天府肉鸭胚胎及胚后发育期胸腺中Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白的表达情况。结果表明,Bcl-2和Bax mRNA及蛋白免疫阳性反应见于胸腺淋巴细胞及胸腺上皮细胞。胸腺小叶皮质和髓质淋巴细胞BCL-2蛋白阳性率在22 d胚龄~17周龄恒定,20~32周龄呈下降趋势;淋巴细胞BAX蛋白阳性率在22~26 d胚龄恒定,0~8周龄上升,8~17周龄恒定,20~32周龄呈上升趋势;淋巴细胞BCL-2/BAX值在22~26 d胚龄恒定;0~8周龄下降,8~17周龄恒定,20~32周龄下降。胸腺皮质和髓质淋巴细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA阳性率分别与其蛋白阳性率变化规律一致。各组皮质淋巴细胞Bcl-2 mRNA与蛋白阳性率以及BCL-2/BAX值均显著低于髓质;各组皮质淋巴细胞Bax mRNA和蛋白阳性率均明显高于髓质。推测BCL-2和BAX蛋白及其基因是天府肉鸭胸腺胚胎及胚后发育期淋巴细胞凋亡的重要调节物。     

褪黑激素对Bcl-2和Bax基因在绒山羊皮肤中表达的影响

【目的】研究褪黑激素对内蒙古绒山羊皮肤Bcl-2和Bax基因表达的影响,探讨Bcl-2和Bax基因以及褪黑激素与绒山羊绒毛生长和凋亡的关系。【方法】选用8只性别、体重、年龄一致的内蒙古绒山羊母羊,随机分为埋植组和对照组,提取皮肤总RNA,对Bcl-2和Bax基因mRNA表达进行相对定量分析。【结果】①Bcl-2和Bax基因在内蒙古绒山羊皮肤细胞中相对表达量比值（Bcl-2/Bax）的增减与绒山羊一年中绒毛生长、退行以及休止时间特点基本吻合;②褪黑激素对Bcl-2基因在内蒙古绒山羊皮肤中的表达无显著影响（P＞0.05）,但显著上调了Bax基因在各月份的表达（P＜0.01）。【结论】褪黑激素显著下调了Bcl-2和Bax基因在内蒙古绒山羊皮肤细胞中相对表达量的比值（Bcl-2/Bax）,可促进细胞凋亡,加快机体新陈代谢。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对BHK-21细胞的线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

为了探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养仓鼠肾细胞(BHK-21)的线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响,采用细胞培养、流式细胞术、免疫细胞化学染色等方法,研究DON对细胞早期凋亡率、线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的变化.结果显示:不同浓度的DON均可诱导BHK-21细胞凋亡,各浓度组的凋亡率都显著高于对照组(P<0.05);DON可使BHK-21细胞线粒体膜电位下降,且表现出剂量和时间效应关系.免疫组织化学染色显示,DON处理细胞24 h,Bax蛋白表达显著高于对照组,而Bcl-2蛋白表达均低于对照组.上述结果表明:DON诱导了BHK-21细胞凋亡和线粒体膜电位下降,Bax表达增强而Bcl-2表达下降是DON诱导BHK-21细胞凋亡的分子机制之一.     

不同基因型烟草对大鼠脾组织凋亡相关蛋白表达的影响

清洁级雄性SD大鼠随机分为正常空气对照组和2个烟气暴露处理组(T-1,T-2),全烟气暴露法染毒,分别于28,56 d取脾组织采用免疫组织化学法测定Bax和Bcl-2的表达水平,分析Bcl-2/Bax值,比较不同基因型烟草对大鼠脾组织凋亡相关蛋白表达的影响。结果表明,与对照组相比,染毒后大鼠脾白髓(WP)中Bcl-2的水平显著上升(P0.05),Bax的水平无明显变化(P0.05),Bcl-2/Bax值均明显升高且T-2组显著高于T-1组(P0.05);脾红髓(RP)中Bcl-2和Bax的水平显著上升(P0.05),但Bcl-2/Bax值均明显下降(P0.05),且T-1与T-2组间无显著差异(P0.05)。不同基因型烟草对大鼠脾组织凋亡相关蛋白的表达存在明显差异,这可能与不同基因型烟草化学成分不同有关,Bcl-2/Bax值有可能作为评价烟草体内毒理学效应的潜在指标。     

SIRT1基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡因子表达量的影响

为探究SIRT1基因在猪卵巢颗粒细胞凋亡中的作用机制,采用荧光定量PCR方法检测不同浓度白藜芦醇和尼克酰胺处理的颗粒细胞中SIRT1基因的表达规律性,以及凋亡相关因子基因Bax、Caspase-3、Bcl-2表达量的变化,采用SPSS统计分析SIRT1基因与凋亡相关因子表达量的相关性。结果表明,一定浓度的白藜芦醇和尼克酰胺能调节猪卵巢颗粒细胞中SIRT1基因表达;SIRT1基因的表达与Bax、Caspase-3的表达呈正相关,相关系数分别为0.664和0.815;SIRT1基因的表达与细胞凋亡因子基因Bcl-2的表达相关性不显著。说明SIRT1基因可通过影响线粒体信号通路中凋亡因子的表达参与猪卵巢颗粒细胞凋亡的调控。     

中药对围产期奶牛血液免疫及抗氧化活性指标的影响

为探讨中药免疫增强剂对围产期奶牛血液免疫和抗氧化指标的影响,将中药添加至围产期奶牛日粮,检测围产期奶牛血清IL-2、IL-6、TNF-α、IgA、IgM、IgG质量浓度,GSH-Px、SOD、CAT活性及MDA浓度。结果显示:(1)免疫增强剂可极显著提高围产期奶牛血清IgA、IgM、IgG质量浓度(P0.01);(2)免疫增强剂可极显著提高血清IL-6质量浓度(P0.01),但对血清TNF-α、IL-2质量浓度的影响无明显规律;(3)免疫增强剂可极显著提高围产期奶牛血清SOD活性(P0.01),极显著降低围产期奶牛血清MDA浓度(P0.01),围产期奶牛血清GSH-Px、CAT活性呈升高趋势,但差异不显著。说明:中药免疫增强剂可以有效提高围产期奶牛的免疫机能及围产期奶牛的抗氧化应激能力。     

三氧化二砷诱导瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制的初步研究

目的观察三氧化二砷对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法以0、2、4、8μmol/L的三氧化二砷作用于成纤维细胞,另以4μmol/L的三氧化二砷作用于成纤维细胞0、24、48、72h,以Hoechst33258/PI荧光染色法进行形态学检测,免疫组织化学实验检测Bcl-2/Bax、Caspase-3的表达。结果随作用浓度和作用时间的增加,成纤维细胞的凋亡小体逐渐增多,而Bcl-2/Bax比例下降,Caspase-3表达增强。结论三氧化二砷可通过下调Bcl-2/Bax比例和上调Caspase-3的表达诱导病理性瘢痕成纤维细胞凋亡。     

IBDV超强毒株感染SPF鸡后法氏囊淋巴细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白动态表达的研究

 为证实传染性法氏囊炎超强毒SNJ93株感染SPF鸡后1～14 d内法氏囊淋巴细胞中Bcl-2、Bax蛋白的动态表达与淋巴细胞凋亡的关系。应用透射电镜观察、TUNEL法标记检测凋亡的淋巴细胞，用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白。结果表明，感染后1～7 d可见到大量凋亡的淋巴细胞，其中感染后3～5 d最多。感染后1～9 d Bcl-2蛋白显著高于同时点的对照组（P<0.01）；感染后1～5 d Bax蛋白明显高于同时点的对照组，差异极显著（P<0.01）；感染后第7天高于同时点的对照组,差异显著（P<0.05）； Bcl-2/Bax比率在感染后第1天低于同时点的对照组（P<0.05）；3～5 d明显低于同时点的对照组(P<0.01)。SNJ93感染SPF雏鸡后1～7 d内法氏囊淋巴细胞会发生大量凋亡，Bcl-2/Bax能准确反映淋巴细胞的凋亡程度。     

异叶败酱多糖的体内抗肿瘤活性研究

【目的】研究异叶败酱多糖抑制U14宫颈癌实体瘤小鼠肿瘤生长的作用机制。【方法】建立小鼠宫颈癌(U14)实体瘤模型,以灌胃生理盐水和皮下注射环磷酰胺(25mg/kg)分别作为阴性和阳性对照,观察异叶败酱多糖不同剂量(30,60,90mg/kg)灌胃给药14d后,对小鼠肿瘤生长抑制作用的影响;检测异叶败酱多糖对荷瘤小鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(AKP)活性的影响;用原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况;利用免疫组织化学法分析与细胞凋亡密切相关蛋白(突变型p53、Bcl-2、Bax)的表达情况。【结果】与阴性对照组相比,异叶败酱多糖中、高剂量组瘤质量显著下降,荷瘤小鼠血清LDH活性显著降低,Bax蛋白表达量显著升高,突变型p53和Bcl-2蛋白表达量显著下降(P0.05);异叶败酱多糖各组肿瘤组织的细胞凋亡数较阴性对照组均显著提高(P0.05),荷瘤小鼠血清AKP活性有所升高,但与阴性对照差异不显著(P0.05)。与阳性对照组相比,异叶败酱多糖中、高剂量组抗U14宫颈癌效果接近于临床化疗药环磷酰胺。【结论】异叶败酱多糖具有抑制实体瘤U14生长的作用,揭示该多糖可能通过调节细胞凋亡相关基因的表达,进而促进肿瘤细胞的凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡的影响

为探究茶多酚(Tea polyphenols,TP)对体外培养鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibrolast,MEF)凋亡的影响。在MEF细胞培养液中添加质量浓度为0、10、40、70、100和150μg/mL的TP,分别培养24、48、72和96h,使用MTT法(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,噻唑蓝,MTT法)检测细胞活力;细胞培养72h,以RT-PCR检测B-细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(B cell lymphoma leukemia-2,Bcl-2)、和Bcl相关的蛋白X(Bcl-as-sociated X protein,Bax)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)的相对表达量。MTT结果表明:TP质量浓度为40μg/mL时细胞密度略高于其他组,但是没有显著差异(P0.05);质量浓度为100μg/mL时,对MEF的生长产生抑制作用(P0.05),细胞形态没有发生明显变化;当质量浓度为150μg/mL时对细胞生长抑制作用明显(P0.05),从形态观察细胞出现调亡;通过反转录结果表明,对Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因的分子转录水平没有影响(P0.05),表明质量浓度高于100μg/mL TP对MEF生长产生抑制作用,但对Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3转录分子机制无影响。     

补阳还五汤超微饮片对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨补阳还五汤超微饮片对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后凋亡相关基因Bcl-2、Bax的影响。方法 将SD大鼠80只,雌雄各半,复制局灶性脑缺血大鼠模型,造模后按神经功能缺损评分进行分层,随机分为5组,每组15只,分别于移植后7 d、14 d、28 d进行神经功能评分,采用补阳还五汤超微饮片与传统饮片予以干预,于相应时间点处死大鼠后采用免疫组化法检测凋亡基因Bcl-2、Bax。结果 补阳还五汤能显著减轻神经功能缺损,Bcl-2、Bax在各时间点（7 d、14 d、28 d）表达与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）,模型加移植加补阳还五汤超微饮片组上调Bcl-2、拮抗Bax表达的作用优于模型加移植加补阳还五汤传统饮片组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 补阳还五汤可调节脑缺血后Bcl-2、Bax的表达,是其促进神经功能恢复的可能机制之一,且超微饮片组的作用较传统饮片组更加显著。     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

槟榔鲜果对小鼠体质量、生精细胞凋亡及脏器系数的影响

为探索槟榔鲜果的毒性作用,将槟榔鲜果果皮、果仁和全槟榔的水提液及生理盐水(对照)对KM小鼠每天进行1次灌胃处理,连续13 d,测定小鼠的体质量、存活率、生精细胞凋亡指数、Bcl-2与Bax蛋白表达量及脏器系数。结果表明,果仁处理和全槟榔处理的小鼠体质量随着处理天数的增加呈下降趋势,果皮处理无明显影响;对照和果皮处理的小鼠存活率均为100%,全槟榔和果仁处理分别为55.56%和0;果仁和全槟榔处理的生精细胞凋亡指数分别为1.61%和0.96%,均极显著高于果皮处理和对照;果仁处理的Bax蛋白的表达水平明显增强,Bcl-2蛋白的表达水平明显下降。可见,槟榔鲜果水提液对小鼠所产生的毒性效应主要来源于果仁,果皮对小鼠无明显影响,全槟榔处理介于二者之间。     

柔嫩艾美耳球虫裂殖子入侵对MDBK细胞凋亡因子表达的影响

【目的】为了积累寄生虫与宿主间的作用的研究基础,为球虫病防治新方法的研究打下理论基础。【方法】以MDBK细胞和柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)为试验对象,以β-actin为内参,采用qRT-PCR技术检测主要的细胞凋亡相关因子Bcl-XL、Bid,Bcl-2、Bax表达,比较攻虫凋亡诱导组Bcl-XL/Bid,Bcl-2/Bax的变化。【结果】研究结果显示,攻虫凋亡诱导组Bcl-XL/Bid,Bcl-2/Bax的比值表达均相对上调,而不攻虫凋亡诱导组表达均相对下调,且均差异显著(P0.05),【结论】说明球虫裂殖子入侵MDBK细胞后通过抑制宿主细胞Bcl-XL/Bid,Bcl-2/Bax两对异源二聚体的解离抑制细胞凋亡。     

实时荧光定量PCR检测九香虫血淋巴液对肿瘤细胞凋亡相关基因表达的影响

为了检测九香虫血淋巴液对肿瘤细胞凋亡的影响,本试验制取2.45mg·L~(-1)、12.26mg·L~(-1)浓度的血淋巴液,将其分别作用至人乳腺癌MCF-7及人胃癌SGC-7901细胞,并采用实时荧光定量PCR方法对作用前后的肿瘤细胞凋亡相关基因表达进行检测。结果显示,经血淋巴液处理后的2种肿瘤细胞Caspase-9、Bax及Caspase-3基因表达和对照组细胞相比有明显上升,Bcl-2基因表达明显下降。