乙烯、1-MCP对毛竹春笋老化和ERS1基因表达的影响

毛竹春笋采收后在20℃条件下用外源乙烯和1-MCP处理,研究乙烯和1-MCP对采后毛竹春笋木质化的调控作用。结果表明,乙烯处理提高了木质素合成相关的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂醇脱氢酶(CAD)和过氧化物酶(POD)的活性和ERS1基因的表达,促进组织中木质素和纤维素的积累,加快了毛竹春笋采后老化;1-MCP处理显著降低了PAL、CAD和POD活性以及ERS1基因的表达水平,抑制了木质素和纤维素的积累,延缓了毛竹春笋采后木质化。推测毛竹春笋ERS1对乙烯信号是一种正调控模式,乙烯通过调控ERS1基因表达而影响毛竹春笋组织老化进程。     

1-MCP对外源乙烯诱导的油桃果实呼吸、乙烯代谢的影响

以秦光油桃为材料,研究了1-MCP处理对外源乙烯诱导的果实硬度、呼吸、乙烯、EFE活性的影响。结果表明,1-MCP处理可抑制外源乙烯诱导的果实硬度下降,呼吸速率和乙烯合成的增加,推迟乙烯诱导果实呼吸峰和乙烯峰的出现,并降低了乙烯峰值,但提高了呼吸峰值,且对外源乙烯诱导的EFE活性无明显影响。     

乙烯利和1-MCP对菠萝蜜果实中AheAAT和 AheERF表达的影响

目的 研究乙烯（ETH）和1-甲基环丙烯（1-MCP）处理对菠萝蜜果实成熟过程中醇酰基转移酶（AAT）活性、AheAAT和AheERF1/2转录因子表达的影响,为进一步认识菠萝蜜果实AATs在酯类物质合成中的作用及其调控提供理论依据。方法 以‘海大2号’菠萝蜜果实为试材,果实盛花期选择具有代表性、花期一致的果实挂牌,花后约150 d采收,选择大小和成熟度相同,且无病虫伤的果实,分成3组进行处理。第一组采用1 000 mg?L ^-1 ETH溶液浸泡2—3 min;第二组采用0.5 mg?L ^-1 1-MCP熏蒸处理15 h;第三组作为对照组。在果实成熟过程中定期取样,每次取样3—5个果,测定AAT酶活性、AheAAT和AheERF表达等指标。 结果 通过测定AAT酶活性发现,ETH处理促进了果实的成熟衰老,提前了AAT活性高峰出现的时间,但是降低了酶活性。1-MCP处理抑制了果实成熟衰老,在贮藏前期抑制了AAT的活性,延迟了AAT活性高峰出现的时间,并显著降低了AAT的活性。对AheAAT序列分析发现,其全长1 380 bp,编码459个氨基酸。AheAAT具有酰基转移酶的保守结构域H-x-x-x-D和L-x-x-YYPLAGR活性位点基序,D(N) F(V) GWG附加基序,属于BAHD醇酰基转移酶家族,其氨基酸序列与苹果和梨的相似性最高。同时,从菠萝蜜果实中克隆获得2个ERF转录因子,分别命名为AheERF1/2,其中AheERF1全长648 bp,编码215个氨基酸,与苹果和菜豆的同源性最高;AheERF2全长657 bp,编码218个氨基酸,与苹果、番木瓜的同源性最高。AheERF1/2的氨基酸序列含有64/65个氨基酸残基组成的AP2/ERF保守序列,具有ERF家族转录因子的特征序列。ETH处理使果实中AheAAT表达高峰提前出现,并且下调了AheAAT的表达。ETH处理对AheERF1/2转录因子的影响与AheAAT相同,并且ETH降低了AheERF1/2转录因子与AheAAT的相关性。1-MCP处理延长了菠萝蜜果实的贮藏期。在1-MCP处理后的贮藏前期,AheAAT和AheERF1/2转录因子的表达呈现显著降低。当AheAAT和AheERF1/2转录因子出现表达高峰时,1-MCP下调了它们的表达。然而,1-MCP对AheERF1/2转录因子与AheAAT的相关性几乎无影响。结论 ETH处理提前了AAT的活性高峰及AheAAT和AheERF1/2转录因子的表达高峰,降低了AAT的活性,下调了AheAAT和AheERF1/2转录因子的表达,降低了AheAAT与AheERF2转录因子的相关性。1-MCP处理在贮藏前期抑制了AAT的活性及AheAAT和AheERF1/2转录因子的表达,在贮藏后期降低了AAT的活性,下调了AheAAT和AheERF1/2转录因子的表达量。     

1-MCP对冷藏花牛苹果生理活性及香气合成相关酶活性的影响

以花牛苹果为试材,研究了1-甲基环丙烯(1-MCP)处理对花牛苹果冷藏期间果实呼吸强度、乙烯释放速率及香气成分相关酶活性的影响。结果表明,1-MCP能够显著抑制冷藏期间花牛苹果果实呼吸强度和乙烯生成,推迟呼吸和乙烯释放高峰的出现,同时能够抑制花牛苹果香气合成的相关酶活性,从而延缓果实的后熟与衰老,有效保持花牛苹果贮藏期间的生理品质。冷藏120 d,果实LOX酶活性峰值较同期对照降低了21.6%;PDC酶活性于冷藏180 d时达到最大,较同期对照低了51.5%。1-MCP处理降低了AAT酶活性峰值,但并未推迟峰值的来临。     

1-MCP对苹果果实贮藏期间乙烯合成代谢的影响

 以红富士(MalusdomesticaBorkhvar.RedFuji)苹果果实为试材,研究了1-MCP(1-methylcyclopropene,1-甲基环丙烯)对果实贮藏期间乙烯生物合成代谢过程的影响。结果表明,1-MCP维持果实硬度、降低果实的呼吸速率、脂氧合酶活性和乙烯的释放。进一步研究表明,1-MCP处理抑制果实贮藏15d后体内ACS活性,增加ACC含量的积累,延迟ACO活性高峰的出现,并抑制果实乙烯跃变期间蛋白激酶活性的升高。     

乙烯及1-MCP处理对不同开花指数牡丹切花开放衰老进程和水分平衡的影响

[目的]研究乙烯及1-MCP对不同开放阶段‘洛阳红’牡丹切花开放及衰老进程中切花品质及水分平衡的影响。[方法]以开花指数为1、2、3级的‘洛阳红’牡丹切花为试材,测定了其开放及衰老进程中花径增大率、开花指数、水分平衡及瓶插寿命对不同处理的响应。[结果]采用10.0μl/L外源乙烯处理6 h加快了切花的开放进程,缩短了切花的瓶插寿命及最佳观赏期持续时间,而采用1.0μl/L1-MCP处理6 h则延缓了切花的开放进程,延长了切花的瓶插寿命,但抑制了切花的正常开放。对水分平衡值的研究表明,水分平衡值的动态变化是影响‘洛阳红’牡丹切花衰老的重要因素,1-MCP处理改善了切花的水分平衡,使水分平衡值为0的时间延后。[结论]1-MCP主要通过延缓‘洛阳红’牡丹切花的开放进程来延长切花的瓶插寿命。     

1-MCP处理对雪桃呼吸、乙烯和贮藏品质的影响

研究了不同浓度(500、1000和1500 nL/L)1-甲基环丙烯(1-MCP)处理对低温和常温两种贮藏温度下雪桃的呼吸、乙烯和贮藏品质的影响。结果表明:1-MCP处理对硬度没有明显影响,但有利于可滴定酸含量的保持;在贮藏前期(0~28 d)明显抑制了低温贮藏雪桃可溶性固形物含量的增加,但对常温贮藏雪桃无效;对低温贮藏雪桃的呼吸速率没有显著影响,可显著抑制常温贮藏雪桃的呼吸速率,但不同浓度间差异不显著;分别在低温贮藏20 d和常温贮藏5 d后明显抑制了乙烯释放速率;对低温贮藏雪桃的出汁率没有明显影响,但抑制常温贮藏雪桃出汁率的增加;对低温贮藏雪桃的褐变有明显抑制作用;高浓度1-MCP处理有一定的抑制雪桃腐烂的效果。研究表明,1-MCP处理效果与贮藏温度有关。     

1-MCP和NO处理对黄金梨主要贮藏品质指标及脂肪酸代谢酶活性的影响

【目的】研究1-MCP和NO熏蒸处理对采后黄金梨低温贮藏期间主要贮藏品质指标及香气合成中脂肪酸代谢途径关键酶活性的影响,探讨1-MCP和NO对黄金梨香气代谢的作用机理,为1-MCP和NO应用于黄金梨贮藏保鲜提供理论依据。【方法】商熟期黄金梨分别用1μL·L-1的1-MCP持续熏蒸18h和10μL·L-1的NO持续熏蒸2h,研究低温贮藏期间(4℃)果实硬度、乙烯释放量、香气成分含量以及脂肪酸代谢途径关键酶脂氧合酶(LOX)、氢过氧化物裂解酶(HPL)、醇脱氢酶(ADH)、酰基转移酶(AAT)活性的变化。【结果】1-MCP和NO熏蒸处理均可有效抑制黄金梨贮藏期间果实硬度下降和乙烯释放,同时有效抑制了醛类、醇类总量的下降以及酯类总量的增加,但各香气成分受1-MCP和NO的影响存在一定差异;1-MCP和NO处理后脂肪酸代谢途径关键酶LOX、HPL、ADH和AAT活性均明显下降。【结论】1μL·L-1的1-MCP和10μL·L-1的NO分别熏蒸18h和2h处理对黄金梨具有较好的保鲜效果,能维持较好的贮藏品质,10μL·L-1的NO熏蒸2h处理的保鲜效果优于1μL·L-1的1-MCP熏蒸18h处理。     

1-MCP对杨梅果实采后生理和品质的影响

 杨梅果实在0℃下分别用0、1、5和10 μl·L-11-甲基环丙烯（1-MCP）处理15 h后，分别在0和20℃下贮藏。结果表明，杨梅果实经1-MCP处理后，0℃下可保鲜13 d，20℃下可保鲜5 d。1-MCP对0℃下贮藏后期的果实呼吸强度和相对电导率具有明显的抑制效果，但对乙烯释放量和品质的影响不明显。然而，1-MCP对20℃下贮藏的杨梅果实的呼吸强度、乙烯释放量、相对电导率和果实软化均具有不同程度的抑制作用，但对总糖、总酸和花色苷含量的影响不显著。     

1-MCP结合壳聚糖处理对芒果ETR基因表达的影响

以未处理的芒果果实为对照,研究了1.5μL/L 1-甲基环丙烯、2.0%壳聚糖及其复合处理对芒果采后储藏期间乙烯释放速率、呼吸强度和ETR基因表达水平的影响。结果表明,各处理均能有效抑制芒果的乙烯释放速率和呼吸强度的上升,抑制芒果ETR基因的表达水平。其中,联合处理对保持芒果的储藏品质更加显著。     

拟南芥乙烯应答基因HLS1的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】制备乙烯应答基因HLS1多克隆抗体,在过表达植物中检测HLS1的积累,为深入研究HLS1响应乙烯信号通路的分子机制奠定基础。【方法】构建pET28a-HLS1c原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导获得重组蛋白HLS1c-His;镍柱亲和纯化重组蛋白后免疫家兔获得抗HLS1血清,利用抗原亲和纯化抗血清获得高纯度的HLS1多克隆抗体;用HLS1抗体和GFP抗体,检测原生质体瞬时转化体系中GFP-HLS1c融合蛋白的表达;用农杆菌蘸花法获得过表达GFP-HLS1g的转基因植物,用HLS1抗体和GFP抗体检测GFP-HLS1g融合蛋白的表达。【结果】成功构建了原核表达载体pET28a-HLS1c,并在大肠杆菌系统中诱导获得重组蛋白HLS1c-His,且多以包涵体形式存在。纯化的HLS1c-His多克隆抗体,能清晰检测到约80 ng原核表达的HLS1抗原。纯化的HLS1抗体不仅能检测到原生质体中瞬时表达的GFP-HLS1c融合蛋白,也能检测到过表达转基因植物株系中的GFP-HLS1g融合蛋白,并且与标签蛋白GFP对应抗体所检测到的特异性条带大小一致。【结论】成功制备了拟南芥HLS1蛋白多克隆抗体,为HLS1蛋白在植物发育中的功能研究奠定了基础。     

草莓FaSKP1-1基因的克隆与表达分析

为研究草莓中SCF复合体的功能,以栽培草莓品种‘74’为试材,采用同源克隆的方法分离出2个SKP1基因。这2个基因核苷酸序列全长均为519bp,核苷酸序列相似性为98.46%,氨基酸序列相似性为98.84%,并具有特殊的‘GVDED’尾巴结构,分别命名为FaSKP1-1a和FaSKP1-1b(基因登录号分别为KU975057和KU975058)。RT-PCR和dCAPS分析发现FaSKP1-1a和FaSKP1-1b在草莓根、茎、叶、花托、花粉、花柱、果实中均高表达,在花瓣中表达量低。上述结果表明FaSKP1-1可能在草莓SCF复合体的形成过程中发挥重要作用。     

ALA对苹果幼果黄酮含量及CHS和CHI基因表达的影响

【目的】分析5-氨基乙酰丙酸(ALA)处理对苹果幼果黄酮含量及查尔酮合成酶基因(CHS)、查尔酮异构酶基因(CHI)表达量的影响,以确定适宜的ALA处理质量浓度和处理时间。【方法】在苹果疏果期前,用0(对照),100,200,300和400mg/L ALA处理苹果幼果,采用紫外分光光度法测定ALA处理后3,6,9,12d幼果中的黄酮含量,同时利用荧光定量法测定幼果中CHS和CHI基因的相对表达量。【结果】在ALA质量浓度为0~300mg/L时,随着ALA质量浓度的升高,苹果黄酮含量与CHS、CHI基因表达量均相应升高;在ALA质量浓度升至400mg/L时,各项指标均表现出下降趋势。用不同质量浓度ALA处理苹果幼果后,幼果的黄酮含量和CHS、CHI基因表达量均较对照明显提高,其中黄酮含量在处理后12d达到最高,而CHS和CHI基因相对表达量在处理9d时达到最高,12d后开始下降。【结论】为提高苹果疏除果中的黄酮含量,宜选择300mg/L的ALA在疏果前6~9d对苹果幼果进行喷洒。     

1-MCP处理对软枣猕猴桃的保鲜效果

以‘绿迷一号’软枣猕猴桃为试材,设定了0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μL/L 5个不同1-MCP浓度处理,后低温(2±0.5)℃贮藏,研究了1-MCP处理对‘绿迷一号’软枣猕猴桃的保鲜效果。结果表明：与对照相比,不同浓度1-MCP处理均能降低果实的呼吸强度和乙烯释放速率,延缓果实硬度、Vc含量、淀粉含量的下降以及可溶性固形物、相对电导率、MDA含量的上升,抑制了果实的失重率和腐烂率,不同程度显著降低了果实的冷害率,延长了果实贮藏期及货架期时间。结论：各1-MCP浓度处理的软枣猕猴桃均能延缓软化并正常后熟,其中以0.8μL/L 1-MCP处理对‘绿迷一号’保鲜效果最好。     

六出花瓶插过程中乙烯代谢特征及其调控效应

为了探究六出花瓶插过程中乙烯代谢特征及其调控效应,为六出花切花保鲜剂的研发提供理论依据,以花苞期的六出花切花为供试材料,在基础瓶插液( 1 %蔗糖 + 200 mg·L^-1 8-羟基喹啉)中分别加入20 mg·L^-1乙烯利(ETH)、4 mg·L^-1纳米银(NS)、75 mg·L^-1水杨酸(SA)和10 mg·L^-1精胺(SP)配制瓶插液处理六出花切花,分析瓶插过程中切花形态、生理和基因表达3个层面的指标变化。结果表明：（1）含有乙烯利的瓶插液处理显著缩短了六出花切花瓶插寿命,含有纳米银、水杨酸、精胺的瓶插液处理均能延长六出花切花瓶插寿命,其中以含有4 mg·L^-1纳米银的瓶插液处理效果最佳,延长了瓶插期 2 d。（2）含有乙烯利的瓶插液处理显著加速了花枝鲜样质量和花瓣可溶性糖、可溶性蛋白含量的降低,增加了花瓣丙二醛含量和相对电导率,显著提高了花瓣乙烯代谢水平。含有纳米银、水杨酸、精胺的瓶插液处理六出花切花均不同程度地延缓了花枝鲜样质量和花瓣可溶性糖、可溶性蛋白含量的降低,抑制了丙二醛含量和相对电导率的升高,降低了乙烯代谢水平。（3）含有乙烯利的瓶插液处理增加了开花各时期乙烯合成及信号转导关键基因（AlACO、AlACS、AlCTR1、AlERS1和AlEIN3）的表达量;纳米银、水杨酸和精胺均能不同程度地抑制乙烯合成及信号转导关键基因的表达。研究结果显示六出花为乙烯末期上升型花卉,外源施加乙烯抑制剂可以延缓六出花切花衰老,提高瓶插品质,其中以4 mg·L^-1的纳米银效果最佳。     

日本白鲫BMP15和GDF9基因片段的克隆及组织表达分析

根据斑马鱼GDF9、BMP15基因的保守序列设计引物,采用RT PCR方法扩增获得日本白鲫GDF9、BMP15基因片段。日本白鲫GDF9基因片段长778 bp,编码145个氨基酸;BMP15基因片段长811 bp,编码270个氨基酸。氨基酸序列分析表明日本白鲫GDF9与斑马鱼的同源性最高,为78%,与其他物种的同源性在58%~78%之间;日本白鲫BMP15与斑马鱼同源性最高,为80%,与其他物种的同源性在30%~80%之间。系统进化树分析显示,鱼类的GDF9基因独立聚成一支,其中日本白鲫的GDF9基因与斑马鱼的GDF9基因聚成一支;鱼类的BMP15基因独立聚成一支,其中日本白鲫的BMP15基因与斑马鱼的BMP15基因聚成一支。半定量PCR结果显示,BMP15 mRNA在脾脏、肝脏、鳃、脑、心脏、肌肉、肾脏、卵巢中均有表达,其中卵巢中表达量最高;GDF9 mRNA在肝脏、脑、心脏、肌肉、卵巢中均有表达,而在脾脏、鳃、肾脏中表达量极低或不表达,在卵巢中表达量最高,为进一步研究日本白鲫GDF9与BMP15基因的结构与功能奠定了基础。     

墨兰FT同源基因的时空表达及功能分析

FLOWERING LOCUS T(FT)基因是植物开花调控途径的整合基因,整合来自光周期途径、春化途径和自主途径等不同花发育途径的信号,在植物花发育中发挥着重要作用。从墨兰品种‘企剑黑墨’中克隆了新的FT同源基因,并对其各组织部位的表达特性和生物学功能进行了分析。结果表明,墨兰FT基因c DNA全长序列为618bp,其中开放阅读框为531 bp,编码176个氨基酸。其氨基酸序列与拟南芥、水稻中FT基因的氨基酸序列有较高的同源性。墨兰FT同源基因在‘企剑黑墨’各器官中均有表达,营养生长期FT基因在腋芽中的表达量最高,生殖生长期FT基因在腋芽,花梗,花蕾等器官中的表达量较高,在根和叶中的表达量最低。在拟南芥中超表达墨兰FT同源基因,能显著促进拟南芥开花。     

1-甲基环丙烯及乙烯对绿芦笋采后品质的影响

为改进绿芦笋常温贮运保鲜技术，将采后绿芦笋用1-甲基环丙烯(1-MCP)和乙烯分别在密闭的玻璃缸内常温下处理24h，测定其品质指标变化。结果表明：外源乙烯处理加快了绿芦笋的老化进程，使其品质下降，商品率降低：乙烯受体抑制剂1-MCP处理延缓了绿芦笋叶绿素、可溶性糖和蛋白质含量的下降和木质素含量的上升。24℃贮藏3d，1-MCP处理的绿芦笋商品率仍达88％以上，比对照高12．8％。     

CYP11A1、CYP17A1、CYP19A1基因在小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢轴的表达

为揭示类固醇生成相关基因CYP11A1、CYP17A1、CYP19A1在绵羊多羔繁殖中的作用,以不同繁殖力小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术检测CYP11A1、CYP17A1、CYP19A1基因在小尾寒羊大脑、小脑、下丘脑、垂体、子宫、卵巢、输卵管中的表达。结果表明:CYP11A1基因主要在小尾寒羊卵巢、输卵管、子宫内表达;CYP11A1基因在单羔小尾寒羊卵巢的表达极显著低于多羔群体(P0.01),在子宫的表达量极显著高于多羔群体(P0.01);CYP17A1基因主要在小尾寒羊卵巢、输卵管、下丘脑表达;CYP17A1基因在多羔小尾寒羊群体下丘脑、子宫的表达量显著低于单羔群体(P0.05)。CYP19A1基因主要在小尾寒羊卵巢、下丘脑表达。本究结果提示CYP11A1、CYP17A1基因可能参与小尾寒羊多羔性状的调控。     

绵羊繁殖轴相关组织TPH1和TPH2基因表达分析及TPH2基因多态性与产羔数的关系

为探讨TPH1和TPH2基因在绵羊不同繁殖状态下的表达差异及TPH2基因多态性与小尾寒羊产羔数的关系,利用实时荧光定量PCR技术检测该2个基因在不同繁殖状态下成年苏尼特羊(短光照3只,长光照3只)和小尾寒羊(卵泡期3只,黄体期3只)的大脑、小脑、下丘脑、松果体、垂体、卵巢、输卵管、子宫、肾脏和肾上腺等10种组织中的相对表达量;同时采用Sequenom MassARRAY?SNP技术检测TPH2基因单核苷酸多态位点SNP在常年发情绵羊品种(小尾寒羊、湖羊和策勒黑羊)和季节性发情绵羊品种(滩羊、苏尼特羊和草原型藏羊)的多态性,并将基因多态性与小尾寒羊产羔数进行关联分析。结果表明:该2个基因在2个绵羊品种各组织广泛表达,TPH1基因在苏尼特羊下丘脑和松果体中短光照表达量极显著高于长光照(P0.01),在苏尼特羊垂体中短光照表达量显著高于长光照(P0.05),在小尾寒羊垂体和卵巢中卵泡期显著低于黄体期(P0.05);TPH2基因在苏尼特羊卵巢组织长光照下的表达量显著高于短光照(P0.05),TPH2基因在小尾寒羊下丘脑组织中卵泡期的表达量极显著高于黄体期(P0.01)。小尾寒羊中TPH2基因g.107854166CT和g.1078541669CT 2个SNP位点关联分析表明,该2个位点与季节性发情性状和小尾寒羊第1、2以及第3胎产羔数均无显著关联(P0.05)。综上,TPH1和TPH2基因在苏尼特羊绵羊下丘脑和松果体中呈季节性光照节律差异表达,暗示其可能参与季节性发情上游基因的调控,而TPH2基因可能参与调控小尾寒羊下丘脑中激素分泌和卵巢发育,但g.107854166CT和g.1078541669CT不是调控季节性发情和小尾寒羊产羔数的关键位点。